非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏内源性H_2S合成减少

目的探讨非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝脏硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)变化及与肝细胞线粒体损伤的可能关系。方法采用雄性SD大鼠26只,分为正常对照组(n=6),NASH模型组(n=10)及复方牛胎肝提取物治疗组(n=10),高脂饮食12周建立NASH大鼠模型。亚甲基蓝分光光度法测定肝组织H2S生成率,RT-PCR及免疫组织化学测定肝组织CSEmRNA及其表达。透射电子显微镜观察肝细胞超微结构、PCR法测定肝细胞线粒体DNA(mtDNA)片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6。结果 NASH大鼠模型组肝细胞线粒体肿大、膜模糊或嵴消失,正常组大鼠mtDNA片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6表达明显高于模型组和治疗组(P<0.05)。NASH模型组肝组织H2S生成率〔(1.26±0.08)nmol/min〕较正常组〔(2.11±0.17)nmol/min〕明显减少(P<0.05),且肝脏CSEmRNA水平及其表达减少,治疗组与模型组比较差异无统计学意义。结论 NASH大鼠肝脏H2S合成减少可能与肝细胞线粒体损伤有关,H2S在NASH发病机制中可能具有保护肝脏的作用。     

大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠脂质水平及肝脏脂质代谢基因表达的影响

目的 探讨大黄素 (emodin) 对高脂喂养导致的非酒精性脂肪肝 (NAFLD) 大鼠脂质水平和肝脏脂质代谢基因表达的影响。方法 大鼠高脂饮食6周形成 NAFLD 模型,大黄素低、高剂量 (30、60 mg/kg) 干预4周,肝脏 HE 染色观察 NAFLD 模型大鼠肝脏病理改变,检测血清和肝脏的甘油三酯 (TG)、游离脂肪酸 (FFA) 和转氨酶 (ALT、AST) 水平;采用荧光实时定量 PCR 技术检测肝脏 X 受体 (LXR)、固醇调节元件结合蛋白-1c (SREBP-1c)、脂肪酸合成酶 (FAS)、二酰基甘油酰基转移酶2 (DGAT2)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1 (SCD-1)、脂酰辅酶A氧化酶 (ACO)、肉毒碱棕榈酸转移酶-1 (CPT-1) 和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α) 等脂质代谢基因表达。结果 与模型组相比,大黄素低剂量组大鼠血清 FFA、TG、ALT 显著下降,肝脏 HE 染色显示脂质沉积减轻,SCD-1 表达下降;高剂量组大鼠 ALT、AST,血清和肝脏 TG、FFA 显著下降,肝脏脂质沉积显著下降,肝脏 FAS、DGAT-2、SCD-1 表达降低,CPT-1 和 PPAR-α 的表达显著增高。结论 大黄素剂量依赖性地改善 NAFLD,其机制可能与下调肝脏脂质合成基因和上调脂肪酸氧化基因的表达有关。     

浒苔多糖对腹腔脓毒症大鼠的免疫调理作用

①目的 研究浒苔多糖对腹腔脓毒症大鼠中性粒细胞和淋巴细胞及其亚群的影响,阐明浒苔多糖对腹腔脓毒症大鼠的免疫调理作用.②方法 制作SD大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症模型,被分为假手术组、对照组和实验组,各20只.制作脓毒症模型后分别在3、12、24、48h采血待测.检查外周血涂片、白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞计数和CD4＋、CD8＋ T淋巴细胞亚群.③结果 实验组白细胞计数和中性粒细胞计数比对照组明显降低,而淋巴细胞计数和CD4＋ T淋巴细胞水平比对照组明显升高（P＜0.05）.④结论 浒苔多糖可以明显降低脓毒症大鼠白细胞和中性粒细胞,从而减轻炎症反应;提高脓毒症大鼠淋巴细胞计数和CD4＋T淋巴细胞,从而改善免疫功能.     

电针穴位对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢的影响

目的 通过建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型探讨针刺对NAFLD脂质代谢的影响.方法 将大鼠分为空白组和NAFLD组,NAFLD组大鼠模型建立成功后,再随机分为对照组、电针穴位组和电针非穴组,电针穴位组取“丰隆”、“足三里”、“太冲”、“三阴交”穴,电针非穴组取大鼠尾部中三分之一随机四处,避开尾静脉,“治疗”4周后处死所有动物取材,检测大鼠的血清脂联素(ADP)、瘦素(LEP)、游离脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG).结果 电针“治疗”4周后,电针穴位组与对照组相比较ADP、HDL升高,LEP、LDL、FFA、TC、TG下降(P＜0.05),肝组织脂肪性变减轻,电针非穴组与对照组比较变化不明显(P＞0.05),肝组织脂肪性变无明显改变.结论 电针“丰隆”、“足三里”、“太冲”、“三阴交”等穴位,能升高血清ADP、HDL,降低LEP、LDL、FFA、TC、TG,从而调节脂质代谢,减少脂肪生成,增加脂肪氧化,减轻肝脏脂肪沉积,治疗NAFLD.     

内毒素休克大鼠心肌组织中H2S/CSE体系的变化及意义

目的 探讨内毒素休克大鼠血浆中硫化氢(H2S)含量变化和心肌组织中H2S/CSE体系变化及其改变的意义.方法 采用静脉注射脂多糖(LPS)的方法制备内毒素休克大鼠模型,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PPG,H2S代谢酶抑制剂)组、LPS+NaHS...     

黄芪多糖对非酒精性脂肪肝病大鼠的治疗作用

目的 研究黄芪多糖（APS）对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠的治疗作用。方法 取36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（8只）和疾病模型组（28只）,疾病模型组大鼠给予高脂饲料喂养6周建立NAFLD大鼠模型。取其中25只NAFLD模型大鼠随机分为NAFLD模型组（7只）、辛伐他汀组（9只,6.7 mg·kg^-1·d^-1辛伐他汀灌胃给药）和APS组（9只,700 mg·kg^-1·d^-1 APS灌胃给药）,正常对照组和NAFLD模型组大鼠给予相同体积双蒸水灌胃,各组均连续灌胃8周。比较各组大鼠的饮食量、能量摄入量、饮水量、排泄量和血清生物化学指标。采集大鼠肝脏组织计算肝脏指数,测定肝组织中总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）含量,并于光学显微镜下观察肝脏组织结构和细胞形态。结果 NAFLD模型组大鼠的能量摄入量高于正常对照组（P<0.05）,饮食量、饮水量和排泄量均低于正常对照组（P均<0.05）。辛伐他汀组和APS组大鼠的饮食量、能量摄入量、饮水量和排泄量与NAFLD模型组相比差异均无统计学意义,且两组间差异也均无统计学意义（P均>0.05）。与NAFLD模型组相比,辛伐他汀和APS组大鼠血清TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇和丙二醛含量均降低（P均<0.05）,高密度脂蛋白胆固醇含量和总超氧化物歧化酶活性均增加（P均<0.05）,且肝组织中TC和TG含量以及肝脏指数和肝细胞内脂滴数目、脂滴面积均下降（P均<0.05）。APS组大鼠血清中葡萄糖、丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平均低于NAFLD模型组（P均<0.05）,但辛伐他汀组与NAFLD模型组相比差异无统计学意义（P均>0.05）。结论 APS可有效调节NAFLD大鼠的血清葡萄糖、血脂和肝脏脂滴水平,其机制可能与APS的抗氧化作用有关。     

CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H2S的表达影响

目的观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响。方法体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组)。采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量。结果观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CSE-siRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSE-siRNA2沉默作用最强。     

浒苔多糖对机体免疫及糖、脂代谢影响的研究

浒苔自古以来即为食用和药用藻类,其主要成分浒苔多糖存在于藻体细胞中。据实验研究发现,浒苔多糖具有增强免疫功能、降脂、降糖以及抗菌抗病毒等诸多的生物活性。本文就浒苔多糖对对机体免疫及糖、脂代谢影响的研究进行综述。     

非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及病理变化的动态观察

目的 通过高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,连续监测4～16周模型动物肝功能、脂质代谢、胰岛素抵抗及肝细胞凋亡在NAFLD进展过程中的变化情况及相瓦关系,为该模型在脂肪肝发病机制、脂肪肝治疗药物评价等方面的应用提供参考依据.方法 SD大鼠50只,除正常对照组外,其余动物饲喂高脂饲料,分别检测4,8,12,16周大鼠血清GLU、CHO、TG、HDL、LDL、GPT、GOT及胰岛素水平,肝脏组织切片进行病理学及细胞凋亡观察,进一步分析大鼠肝功能、脂质代谢、胰岛素抵抗及肝细胞凋亡对肝组织病理改变的影响.结果 模型组大鼠4周后就出现肝功能损伤,脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗,肝细胞凋亡8W后明显增加,肝细胞脂变及炎症为肝组织病理变化的主要特征,且造模时间越长,病变程度越严重.结论 经过高脂饲料的喂养,SD大鼠在4～16周内可形成病变程度逐步加重的NAFLD模型,肝功能损伤,脂质代谢紊乱及肝细胞凋亡是引起非酒精性脂肪肝中脂肪变性和炎症的重要因素,该模型可应用于脂肪肝治疗药物评价等方面.     

北五味子多糖对高脂诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠的降血脂作用及其抗氧化活性

目的：探讨北五味子多糖（SCP）对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠的降血脂作用及其抗氧化活性,为五味子的开发利用提供理论依据。方法：选择32只雄性Wistar大鼠,随机抽取16只作为正常对照组（灌胃给予双蒸水,给予普通饲料）和SCP组（灌胃给予50 mg·kg^-1SCP,给予普通饲料）,每组8只。其余16只大鼠以高脂饲料喂养4周,确定高脂血症成功后,将大鼠随机分为NAFLD组和NAFLD+SCP组（NAFLD+50 mg·kg^-1SCP）,给药12周后称大鼠体质量并计算肝指数;检测大鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,酶学法检测大鼠肝组织中TC和TG水平,TBA法检测大鼠血清和肝组织中丙二醛（MDA）水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,微量酶法检测肝组织中还原型谷胱甘肽（GSH）水平,HE染色观察大鼠肝组织病理形态表现。结果：与正常对照组比较,NAFLD组大鼠肝指数明显增加（P < 0.01）,血清中TC、TG、LDL-C、ALT和AST水平升高（P < 0.01）,肝组织中TG和TC水平升高（P < 0.01）,血清及肝组织中MDA水平升高（P < 0.01）、SOD活性降低（P < 0.01）,肝组织中GSH水平降低（P < 0.01）。与NAFLD组比较,NAFLD+SCP组大鼠体质量及肝脂数明显降低（P < 0.05）,血清中TC、TG及LDL-C水平以及肝组织中TC和TG水平降低（P < 0.01）,血清及肝组织中MDA水平降低（P<0.01）,SOD活性升高（P<0.01）,肝组织中GSH水平升高（P<0.01）。HE染色检测,NAFLD组大鼠肝小叶结构紊乱,出现明显的肝细胞脂肪变性;NAFLD+SCP组大鼠肝小叶内肝细胞脂肪变性明显减轻。结论：SCP对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠血脂具有一定的调节作用,其作用机制可能与抗氧化应激有关。     

硫化氢对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪代谢的调控作用

 目的 探讨给予外源性硫化氢(H₂S)对肥胖小鼠脂肪代谢的调控作用。方法 将小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组。正常对照组(n=10)：给予正常小鼠饲料喂养;模型组(n=10)：给予高脂饲料喂养12周建立饮食致胖(diet-induced obesity, DIO)模型;治疗组(n=15)：同样建立成DIO小鼠并随机分3小组,分别给予25、50和100 μmol·kg-¹·d-¹ NaHS治疗6周,期间继续给予高脂饲料。给药期间动态监测各组小鼠的体质量变化。治疗期满处死小鼠,检测附睾脂肪以及肾周脂肪重量,用自动生化仪和ELISA法分别检测小鼠血清中的游离脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)和抵抗素(resistin)脂肪因子水平。结果 与正常对照组比较,DIO模型组小鼠造模成功,体质量、附睾脂肪重量与肾周脂肪重量均有明显升高,但小鼠血清中的NEFA和resistin含量没有明显变化;与模型组相比,治疗各组小鼠附睾脂肪重量与肾周脂肪重量均有明显的回落(P<0.05),血清中的NEFA水平也明显降低(P＜0.05),resistin含量没有显著变化。结论 H₂S可以显著缓解DIO小鼠脂肪的堆积,降低治疗组血清中NEFA的水平,但对resistin脂肪因子无明显调控作用。     

高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病大鼠IRS-1的表达

目的:利用高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝(NAFLD)的模型,探讨NAFLD大鼠肝脏胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达。方法:雄性SD大鼠30只,随机分成正常组和高脂组,分别给予普通饲料与高脂饲料,至8周末分别检测大鼠的体重、体长及生长状况;生化分析仪检测血生化指标;HE染色观察肝组织病理学变化;通过免疫组织化学方法和RT-PCR检测肝脏IRS-1蛋白和mRNA的表达。结果:高脂组的ALT、TC、TG显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。予高脂饮食喂养8周后,高脂组大鼠肝脏符合NAFLD的病理特征。高脂组大鼠肝组织IRS-1较正常组表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。高脂组IRS-1的mRNA表达水平和蛋白表达一致。结论:高脂饮食喂养8周可使SD大鼠出现NAFLD,肝脏IRS-1的蛋白表达低于正常组。     

盐酸小檗碱对大鼠非酒精性脂肪性肝病的干预

目的探讨盐酸小檗碱对大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的干预效果和可能作用机制。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组（札=10）和造模组（n=30）,正常对照组给予普通饲料,造模组给予高脂肪饲料（77.5％基础饲料、10％蛋黄粉、10％猪油、2％胆固醇、0、5％胆酸钠1。喂饲12周,成功复制NAFLD大鼠模型。将造模组大鼠随机分为模型对照组（n=9）、多烯磷脂酰胆碱组（n=9）和盐酸小檗碱组（n=9）。药物干预4周后,称量大鼠肝脏湿重和附睾脂肪、肾周脂肪及内脏脂肪的重量;测定血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、空腹血糖（FPG）、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）等各项生化指标;采用放射免疫法测定空腹血清胰岛素（FINS）含量;光学显微镜下观察肝细胞脂肪变性程度。结果与模型对照组比较,盐酸小檗碱组大鼠的附睾脂肪及。肾周脂肪重量显著降低,AST、ALT、FPG、LDL—C下降,FINS、稳态模式评估法胰岛素抵抗指数下降,肝脏脂肪变性程度减轻。结论盐酸小檗碱通过改善高脂肪饲料诱导NAFLD大鼠的胰岛素抵抗而发挥治疗NAFLD的作用。     

Effects of extracts from soothing-liver and invigorating-spleen formulas on the injury induced by oxidative stress in the hepatocytes of rats with non-alcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet

OBJECTIVE

To investigate effects of the extracts from soothing-liver and invigorating-spleen formulas on the injury due to oxidative stress, mediated by the Nuclear factor-like 2 (Nrf2)-Antioxidant response element (ARE) pathway, in the hepatocytes of rats with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) induced by high-fat diet.

饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠脂联素受体2基因的表达及其意义

[目的]探讨脂联素受体-2（AdipoR2）在饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝脏组织中的表达差异[方法]采用反转录PCR（FIT—PCR）法检测饮食诱导非酒精性脂肪性肝病与对照组大鼠肝脏中的AdipoR2 mRNA表达差异,同时检测大鼠脂联素、胰岛素抵抗指数及血糖水平。[结果]模型组大鼠肝脏组织中AdipoR2 mRNA为0．3964±0．0988,而对照组为1．2254±0．1462,两者间差异有显著性意义（P〈0．01）。模型组血糖为（5．44±0．58）mmol／L,与对照组（5．25±0．14）mmol／L比较差异无显著性意义;模型组脂联素水平（3．56±0．78）mg／mL,低于对照组的（4．71±0．30）mg／mL,P〈0．05,而前者胰岛素抵抗指数为2．39±0．16,较后者1．32±0．30明显增高（P〈0．01）。[结论]肝脏脂联素受体2表达下调可能是引起非酒精性脂肪性肝病的原因;与糖、脂肪代谢障碍,胰岛素抵抗程度提高有关。     

甲状旁腺激素相关蛋白加重蛋氨酸胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病进展

目的 研究甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）对蛋氨酸胆碱缺乏饲料（MCD）诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的影响。方法 构建小鼠 NAFLD 模型并分为空白对照组（普通饲料喂养 4 周）、AAV-Vehicle 组（注射空载腺相关病毒 AAV-Vehicle）和AAV-PTHrP组（注射PTHrP 过表达腺相关病毒）。实验期间监测小鼠体质量。收集小鼠肝脏组织进行HE染色、油红染色和天狼星红染色评估肝脏组织病理学改变;检测肝脏及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和游离脂肪酸浓度评估小鼠肝脏损伤及脂肪代谢水平。250 μmol/LFFAs诱导小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞24 h构建NAFLD细胞。根据有无PTHrP处理分为PTHrP组、对照组。油红及尼罗红染色检测细胞内脂质沉积程度;CCK8试剂盒检测PTHrP对脂肪变性肝细胞的毒性作用。结果 动物实验：对比AAV-Vehicle组,AAV-PTHrP组小鼠体重下降更为快速;AAV-PTHrP组小鼠肝脏谷草转氨酶（P<0.05）、谷丙转氨酶（P<0.05）、甘油三酯（P<0.01）、游离脂肪酸（P<0.05）水平,NAS评分以及SAF评分均显著升高（P<0.01, P<0.05）,肝脏脂滴堆积更为明显。细胞实验：同时加入PTHrP,小鼠及人NAFLD细胞模型的脂质沉积更为明显（P<0.01）,且细胞活性下降（P<0.05）。结论 PTHrP可能通过促进肝细胞脂滴沉积,加重MCD诱导的小鼠NAFLD。     

DEHP促进酒精结合高脂饮食诱导大鼠酒精性脂肪肝的机制

目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)促进酒精结合高脂饮食诱导的酒精性脂肪肝的作用机制.方法 将60只SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组(酒精)、酒精+ DEHP 0.05 mg/kg组、酒精+DEHP 5 mg/kg组、酒精+ DEHP 500 mg/kg组以及DEHP 500 mg/kg对照组.取大鼠血清及肝脏组织,用生化分析血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平,HE切片观察大鼠肝脏损伤状态,用Western blot检测肝组织中P-AMPK及lipin-1蛋白的表达水平.结果 DEHP促进了血清中ALT、AST的积累,加剧了酒精结合高脂饮食诱导的小鼠病理状态,同时上调了lipin-1蛋白水平,抑制了P-AMPK蛋白水平.结论 DEHP可能通过介导lipin-1和P-AMPK蛋白水平,加重大鼠酒精性脂肪肝的病理过程.