维生素K_3通过下调mTOR信号途径而诱导HeLa细胞自噬

目的观察VitK3(维生素K3,vitaminK3)对HeLa细胞损伤过程中的自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法以HeLa细胞为研究对象,采用MTT检测细胞存活率,用Western blot方法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的变化和蛋白激酶B(PKB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化-Akt/mTOR表达的变化。结果30μmol·L-1剂量以上的VitK3可明显抑制HeLa细胞的增殖(P<0.05)。VitK3作用12h后增加Beclin1和LC3-Ⅱ的蛋白表达水平(P<0.05),降低磷酸化的Akt/mTOR的蛋白表达水平(P<0.05)。结论VitK3能明显抑制HeLa细胞增殖并具有诱导HeLa细胞发生自噬的作用,其机制可能与下调mTOR信号有关。     

当归芍药散通过AMPK/mTOR通路对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨当归芍药散是否可以通过AMPK/mTOR信号通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。方法:分别将足细胞分为正常对照组、模型组、当归芍药散含药血清组、自噬抑制剂组、当归芍药散含药血清加自噬抑制剂组、自噬激动剂、AMPK抑制剂、当归芍药散含药血清加AMPK抑制剂组和AMPK激动剂，并观察各组的自噬相关蛋白、细胞活性和细胞凋亡率。结果:与对照组相比，高糖组足细胞活力和Beclin-1/LC3/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01);和高糖组相比，当归芍药散含药血清组、自噬激动组、AMPK激动剂组的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均提高，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均降低(P<0.01);与高糖组相比，自噬抑制剂组、AMPK抑制剂组足细胞的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均降低，细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01)。结论:当归芍药散可以通过AMPK/mTOR通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。     

芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

摘 要 目的：探讨芦荟大黄素（AE）对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白（p53）/磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组（AE 0 μmol·L-1）、AE低（10 μmol·L-1）、中（30 μmol·L-1）、高（50 μmol·L-1）剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤（3 MA）+ AE组（20 μmol·L-1+50 μmol·L-1）。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白（Beclin 1）、微管相关轻链蛋白Ⅰ（LC3Ⅰ）及微管相关轻链蛋白Ⅱ（LC3Ⅱ）表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数（AI）显著升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度（IOD）/所选区域面积（Area）值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高（P<0.05）。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的:探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法:构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果:氧糖剥夺处理后,1μmol/L和10μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而100μmol/L则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论:低剂量(1、10μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

苯甲酰乌头原碱对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响

目的:研究苯甲酰乌头原碱(BAC)对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响,探讨其用于非小细胞肺癌治疗的作用机制。方法:采用不同剂量的BAC(10、50、100、200、400μmol/L)分别对A549细胞进行处理后,观察细胞的形态变化,并采用CCK-8法测定细胞的增殖抑制率。将细胞分为对照组(不加药物)和BAC低、高剂量组(200、400μmol/L),分别加入相应药物处理后,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用聚合酶链式反应法和Western blotting测定细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2凋亡相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和自噬相关因子Beclin1、LC3、P62的基因及蛋白表达水平。结果:采用不同剂量的BAC处理后,细胞出现皱缩、排列稀疏、溶解等现象,BAC 100、200、400μmol/L剂量组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,BAC低、高剂量组细胞凋亡率分别在药物作用24、48 h时有不同程度的上升,且该促凋亡作用具有剂量、时间依赖趋势。与对照组比较,BAC各剂量组细胞中Bcl-2、P62的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的降低,Bax、Caspase-3、Beclin1、LC3的mRNA和Bax、Active Caspase-3、P62、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平均有不同程度的升高,其中BAC低剂量组Caspase-3的m RNA和Bcl-2、Active Caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达水平,以及BAC高剂量组各目标基因的mRNA和蛋白的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且上述影响均呈剂量依赖趋势。结论:BAC可抑制A549细胞的增殖、促进其凋亡,并且能促进Beclin1、LC3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Bax、Caspase-3(Active Caspase-3)表达和抑制P62、Bcl-2等自噬/凋亡相关基因及蛋白的表达;其机制可能与BAC通过促进细胞发生过度自噬从而导致细胞凋亡有关。     

基于细胞自噬的荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的机制研究

目的本研究主要探讨荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的保护作用与细胞凋亡和细胞自噬的关系。方法采用Langendorff法,建立大鼠离体心脏缺血/再灌注模型,缺血30min,再灌注120 min;随机将Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、不同剂量荭草苷组(1.0、2.0、4.0 mg·kg~(-1))、自噬抑制剂组(2.0 mg·kg~(-1)荭草苷+渥曼青霉素)以及阳性对照药白藜芦醇组;采用多道生理记录仪采集血流动力学指标,全自动生化仪检测灌流液中心肌酶活性,电镜观察大鼠心肌细胞超微结构改变及自噬体,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin1水平。结果与模型组比较,荭草苷可明显改善大鼠血流动力学指标,降低乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平,明显改善大鼠心肌细胞超微结构变化,同时能降低心肌细胞凋亡水平,增加细胞内自噬体数量以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin 1表达水平。结论荭草苷对大鼠心脏缺血/再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能与降低心肌细胞凋亡及增强细胞自噬有关。     

MicroRNA-30a-5p靶向Beclin1抑制自噬减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤

目的探究微小型RNA-30a-5p(MicroRNA-30a-5p,miR-30a-5p)对胰腺泡细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度牛胆酸钠诱导AR42J细胞损伤,取最佳用药浓度,建立胰腺泡损伤模型。细胞分为Control组、Model组、mimic mock组及miR-30a-5p mimic组,牛胆酸钠及miR-30a-5p mimic处理细胞后,RT-PCR检测miR-30a-5p mRNA水平,MTT检测细胞存活,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测脂肪酶及淀粉酶活性,ELISA检测多种炎症因子的浓度,免疫印记检测自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。生物信息预测miR-30a-5p和Beclin1的靶向关系,通过荧光素酶报告实验验证。pcDNA Beclin1(pc-Beclin1)及miR-30a-5p mimic转染经牛胆酸钠处理的AR42J细胞,检测细胞存活、凋亡、脂肪酶淀粉酶活性、自噬相关蛋白表达及炎症因子浓度。结果 500μmol/L牛胆酸钠处理AR42J细胞。miR-30a-5p mimic可显著提高Model组AR42J细胞中miR-30a-5p的mRNA水平及细胞存活率,降低凋亡细胞百分比、脂肪酶淀粉酶活性及细胞培养上清中炎症因子的浓度。同时,miR-30a-5p mimic可显著降低Model组AR42J细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1表达,提高p62、p-P13K、p-Akt及p-mTOR表达。miR-30a-5p mimic显著降低Beclin1wt的荧光酶活性。pc-Beclin1显著上调Beclin1,提高LC3表达,并显著减弱miR-30a-5p mimic对AR42J细胞的促增殖抗凋亡作用及对炎症反应的抑制作用。结论 miR-30a-5p通过靶向下调Beclin1,减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤。     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对MPP+处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及PD特征蛋白表达的影响

目的 探讨抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及帕金森病(PD)特征蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法 以MPP⁺、PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色检测自噬空泡;Western blot检测α-syn、TH、p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p-mTOR、mTOR、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白水平。结果 MPP⁺干预显著降低SH-SY5Y细胞存活率,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。MPP⁺和IGF-1处理后SH-SY5Y细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.05);细胞中自噬空泡减少,LC3BⅡ/Ⅰ降低,p62蛋白水平...     

头孢他啶对奈替米星体内药动学的影响

目的 考察头孢他啶对奈替米星在受试者体内药动学的影响,为临床合理用药提供依据. 方法 12例受试者在单剂量静脉滴注奈替米星（单用组）或奈替米星加头孢他啶（联用组）后,采用高效液相色谱 间接光度法测定不同时间点血清及尿液中奈替米星浓度,计算其药动学参数及尿药回收率. 结果 单用、合用头孢他啶后奈替米星的体内过程均符合二房室开放模型,其药动学参数单用组AUC_0-t,t_1/2β,CL与0～24 h尿药回收率分别为（52.93±5.58） mg&#8226;L^-1&#8226;h、（3.68±0.33） h、（4.49±0.53） L&#8226;h^-1与72.22%,联用组分别为（71.81±8.03 ）mg&#8226;L^-1&#8226;h、（5.06±0.57） h、（2.95±0.37） L&#8226;h^-1与59.20%. 两组比较差异有显著性. 结论 奈替米星与头孢他啶联用后,其消除过程减慢,连续应用可能导致药物体内蓄积,二者合用时应适当减少奈替米星的剂量.     

新生儿氨茶碱药动学研究

本文采用荧光偏振免疫分析法测定１２例新生儿血中茶碱浓度，氨茶碱剂量按５ｍｇ／ｋｇ恒速静脉滴注。经时采样，测得数据，经分析药时曲线拟合呈一室模型，平均清除速度常数０．０３７±０．００８ｈ￣（－１），平均消除半衰期１９±４ｈ，平均表观分布容积０．８２±０．１４Ｌ／ｋｇ，平均清除率３０±５ｍｌ／（ｈ·ｋｇ）。消除半衰期最大相差２．１倍，显示明显个体差异。     

头孢唑林对阿米卡星在兔体内的药动学影响

采用微量微生物法对阿米卡星（ＡＭＫ）单用及与头孢唑林（ＣＥＺ）合用后兔体内ＡＭＫ血药浓度进行测定,药时数据用ＭＣＰＫＰ软件经ＩＢＭ 计算机处理,并对两组药动学参数进行了统计学处理,结果表明ＣＥＺ对ＡＭＫ的药动学有显著的影响。     

甲硝唑对头孢噻肟钠蛋白结合影响的研究

目的：测定甲硝唑对孢噻肟钠蛋白结合率的影响。方法：采用超滤法结合高效液相色谱法测出游离药物浓度,比较未加和加入甲从后头孢噻肟钠的蛋白结合率。结果：头孢噻肟钠的超滤回收率为９９．１％,未加及加入甲硝唑后头孢噻肟钠的蛋白结合率分别为３２．２％和３０．８％。结论：甲硝唑对头孢噻肟钠的蛋白结合率基本无影响。     

半胱氨酸对抗坏血酸稳定性影响的研究

用线性升温法研究半院氨酸对抗坏血酸稳定性的影响,紫外检测波长为243.5 nm。实验结果表明,半胱氨酸能增加抗坏血酸的稳定性。在 20℃,PH 2.0的条件下,含有 2％和 3％的半胱氨酸的抗坏血酸溶液降解反应的活化能分别为 84.814 kJ/mol和 102.834 kj/mol,有效期分别为1. 015 a和 3.154 a。     

碳水化合物对犬加替沙星药动学的影响

目的:研究碳水化合物饮食对犬加替沙星药动学的影响。方法:8只Beagle犬随机交叉空腹或摄取碳水化合物后单次口服加替沙星胶囊17mg·kg-1,采用高效液相色谱法测定血药浓度,用3p97软件计算两者的药动学参数,并评价碳水化合物饮食对加替沙星药动学的影响。结果:空腹组、摄食组的药-时曲线符合口服吸收一室模型,主要药动学参数分别为t1/2ke(4·00±0·84)、(3·98±1·10)h,tmax(2·29±1·08)、(3·45±2·00)h,Cmax(6·06±0·87)、(4·46±2·10)μg·mL-1,AUC(0~t)(56·74±10·80)、(45·99±6·47)μg·h·mL-1(P>0·05)。结论:碳水化合物饮食对犬加替沙星药动学参数无明显影响。     

卡波姆对炉甘石洗剂稳定性的影响

目的筛选各种助悬剂,以提高炉甘石洗剂的稳定性。方法采用沉降体积比法、絮凝度法、重新振摇分散法、黏度法比较各种助悬剂的助悬效果。结果F值和B值的大小顺序为海藻酸钠〉卡波姆〉羧甲基纤维素钠（CMC—Na）〉CMC—Na＋枸橼酸钠。沉降后,重新摇散次数为卡波姆〈CMC—Na＋枸橼酸钠〈CMC—Na〈海藻酸钠。对炉甘石洗剂稳定性的综合评估中,卡渡姆对炉甘石洗剂稳定性的综合影响优于其他助悬剂。结论0．003％（g／g）卡波姆作为助悬剂,可以提高炉甘石洗荆的稳定性。     

健康者体内头孢唑林对阿米卡星药动学的影响

采用微量微生物法对阿米卡星（ＡＭＫ）单用及ＡＭＫ与头孢唑林（ＣＥＺ）合用后,健康者体内ＡＭＫ血药浓度进行测定;药时数据用ＭＣＰＫＰ软件经ＩＢＭ计算机处理,并对两组药动学参数进行了统计学处理,结果表明ＣＥＺ对ＡＭＫ的药动学有显著的影响。     

绒毛钩藤影响中枢神经系统的药理学研究

目的研究绒毛钩藤对中枢神经系统的药理作用。方法小鼠自主活动实验观察其镇静作用;戊巴比妥钠阁下催眠实验观察其催眠作用;士的宁致小鼠惊厥实验观察其抗惊厥作用。结果自主活动试验中．绒毛钩藤提取物（0．16g·kg^-1）灌胃给药后,小鼠60min时的自主活动计数与生理盐水组相比．明显减少（P〈0．01）。在戊巴比妥钠阁下催眠实验中,绒毛钩藤低（0．16g·kg^-1）,中（0．32g·kg^-1）剂量灌胃给药后,小鼠翻正反射消失的个数与生理盐水组比较。均明显增多（P〈0．01）。士的宁致小鼠惊厥实验中。绒毛钩藤提取物灌胃给药后．与生理盐水组比较,中（0．32g·kg^-1）剂量组小鼠死亡数目明显减少（P〈0．01）,高（0．64g·kg^-1）剂量组小鼠死亡数目明显增多（P〈0．01）。结论绒毛钩藤在低剂量和中剂量对中枢神经系统有抑制作用,在高剂量对中枢神经系统有兴奋作用。     

基于UHPLC-HRMS血清代谢组学研究黄芪发酵菌质干预高尿酸血症的作用机制

目的 基于UHPLC-HRMS血清代谢组学研究黄芪发酵菌质对高尿酸血症模型大鼠血清内源性代谢产物的影响及机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、苯溴马隆组(20 mg·kg^-1)和黄芪发酵菌质高剂量组(3.0 g·kg^-1)、低剂量组(1.5 g·kg^-1)。模型组和各给药组均先采用大鼠灌胃300 mg·kg^-1氧嗪酸钾建立高尿酸血症模型,造模后1 h给药组给予相应药物进行干预,14 d后采集大鼠血清。利用UHPLC-HRMS对不同组别大鼠血清中的内源性代谢产物进行分析,并结合多元数据统计分析方法筛选差异代谢物和代谢通路。结果 造模14 d后高尿酸血症大鼠模型建立成功,黄芪发酵菌质显示出良好的降尿酸作用。与空白组相比,模型组发现了17个与高尿酸血症发病相关的潜在生物标志物;黄芪发酵菌质可显著回调其中10个潜在生物标志物,并主要涉及鞘脂代谢、嘧啶代谢、色氨酸代谢、泛酸和辅酶A生物合成、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等通路发挥降尿酸作用。结论 本研究可为揭示黄芪发酵菌质降尿酸作用机制研究提供依据,并为黄芪的深度开发利用奠定基础。