LncRNA RMRP靶向调控miR-613对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)RMRP对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法 qRT-PCR检测正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231)中RMRP和miR-613的表达水平。以MCF-7细胞为研究对象,分别构建沉默RMRP或过表达miR-613的乳腺癌细胞株,qRT-PCR检测RMRP和miR-613的表达水平,MTT法检测细胞存活,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测增殖相关蛋白(Cyclin D1)和凋亡相关蛋白(Cyt-c、Bax和Bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RMRP和miR-613的靶向调控关系。结果与HBL-100细胞相比,4种乳腺癌细胞RMRP的表达显著上调,miR-613的表达显著下调。稳定沉默RMRP或过表达miR-613的细胞株构建成功。沉默RMRP或过表达miR-613均可显著抑制CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达,促进Cyt-c和Bax蛋白的表达,抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡。miR-613是RMRP的靶基因,RMRP可...     

miR-582-5p靶向DNMT1对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的靶向作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)miR-582-5p、DNMT1 m...     

龙葵碱通过调节miR-140和结肠癌转移相关基因1调控胃癌细胞增殖和凋亡

目的探讨龙葵碱对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其潜在分子机制。方法转染前,将胃癌SGC-7901细胞分为4组:对照组(常规培养)、低、中、高剂量龙葵碱组(分别给予25,50,100μg·mL^-1龙葵碱处理48 h)。选用100μg·mL^-1龙葵碱进行后续实验。将miRNA模拟物(miR-mimics)、miRNA抑制剂(miR-inhibitor)阴性对照及miR-140-mimics、miR-140-inhibitor分别转染至SGC-7901细胞,分别命名为第1转染组、第2转染组、第3转染组、第4转染组。将第3转染组和第4转染组细胞分别给予100μg·mL^-1龙葵碱处理,分别命名为第5转染组和第6转染组。用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况,用实时荧光定量链式聚合酶反应(RT-qPCR)检测miR-140、结肠癌转移相关基因1(MACC1) mRNA相对表达量表达。结果对照组、高剂量龙葵碱组、第1转染组、第2转染组、第3转染组、第4转染组、第5转染组、第6转染组的细胞增殖率分别为(100.00±9....     

circRASSF2靶向miR-1343-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨circRASSF2对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测37例乳腺癌及癌旁组织中circRASSF2和miR-1343-3p表达水平;将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为si-circRASSF2组、si-NC组、miR-NC组、miR-1343-3p组、si-circRASSF2+anti-miR-1343-3p组、si-circRASSF2+anti-miR-NC组;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Western blot检测Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9蛋白相对表达水平;双荧光素酶报告实验检测circRASSF2和miR-1343-3p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织中circRASSF2表达水平升高,miR-1343-3p表达水平降低（P<0.01）。与si-NC组比较,si-circRASSF2组MDA-MB-231细胞OD值降低,...     

lncRNA EGFR-AS1靶向miR-577对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的:研究长链非编码RNA（lncRNA） EGFR-AS1对微小RNA-577（miR-577）的靶向关系及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（q PCR）检测卵巢癌组织中lncRNA EGFR-AS1和miR-577表达。Lnc Base Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析lncRNA EGFR-AS1与miR-577的靶向关系。卵巢癌细胞SKOV3中转染si-EGFR-AS1或miR-577,噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。si-EGFR-AS1和anti-miR-577共转染,观察抑制miR-577表达在干扰lncRNA EGFR-AS1表达诱导的SKOV3细胞增殖和凋亡中的作用。结果:卵巢癌组织中lncRNA EGFR-AS1表达量显著高于癌旁组织,miR-577表达量显著低于癌旁组织（P<0.01）。lncRNA EGFR-AS1与miR-577具有靶向结合位点,转染miR-577的WT-EGFR-AS1细胞荧光素酶相对活性显著低于转染miR-NC组（P<0.01）。干扰lncRNA EGFR-AS1表达明显降低SKOV3细胞24,48,72 h的吸光度（A）值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量,显著增加细胞凋亡率及p21、Bax蛋白水平（P<0.05或P<0.01）。miR-577过表达显著降低SKOV3细胞48和72 h的A值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,显著提高细胞调亡率及p21、Bax蛋白表达量（P<0.05）。与si-EGFR-AS1和anti-miR-NC共转染比较,si-EGFR-AS1和anti-miR-577共转染显著减少SKOV3的细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量,显著提高24,48,72 h的A值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平（P<0.05）。结论:lncRNA EGFR-AS1在卵巢癌中表达上调,干扰lncRNA EGFR-AS1表达可抑制卵巢癌细胞增殖,并诱导凋亡,其作用机制与靶向调控miR-577表达有关。     

苯丁酸钠对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察分析苯丁酸钠( Sodium phenylbutyrate,NaPB)对乳腺癌 MDA?MB?231细胞增殖和凋亡的影响,初步探究其可能的作用机制。方法以不同剂量 NaPB(0 mmol/L、2 mmol/L和 4 mmol/L)处理乳腺癌 MDA?MB?231细胞株并进行实验分组:对照组, 2 mmol/L NaPB组 4 mmol/L NaPB组。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)检测各组乳腺癌细胞的增殖情况,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、Bcl?2相关 X蛋白( Bax)和乳腺癌易感基因 1(BRCA1)蛋白表达的水平。结果 NaPB能显著抑制乳腺癌 MDA?MB?231细胞的生长增殖,并可诱导乳腺癌细胞凋亡,对照组、 2 mmol/L NaPB组和 4 mmol/L NaPB组乳腺癌细胞的凋亡率分别为( 4.25±0.89)%、(14.11±2.98)%和( 32.73±1.89)%,两两比较均差异有统计学意义( P＜0.05)NaPB可诱导凋亡相关蛋白 Bcl?2表达水平下降,而 Bax表达水平升高, NaPB的抗肿瘤作用在高剂量组中表现得更明显。与对相比 NaPB可显著下调 BRCA1蛋白的表达,差异照组,有统计学意义(P＜0.05)。结论 NaPB可抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与 NaPB下调 BRCA1表达有关。     

人生长激素对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人生长激素对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,将40只裸鼠随机分为:对照组、重组人生长激素(rhGH)组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和rhGH+5-FU组,各组腹腔注射给药,2周后观察各组药物对肿瘤生长的影响。分别采用MTT法和免疫组化检测肿瘤细胞增殖,TUNEI法检测移植瘤组织的细胞凋亡。结果:5-FU组和rhGH+5-FU组的肿瘤质量、PI及S期的人乳腺癌细胞数均明显小于对照组(P<0.01),AI、G0/G1期人乳腺癌细胞数均明显大于对照组(P<0.05或P<0.01);rhGH+5-FU组的PI及G2M期人乳腺癌细胞数均明显小于5-FU组(P<0.05)。结论:人生长激素在体内对人乳腺癌细胞既无明显的增殖作用,也无明显的凋亡作用,但与5-FU联用后能增强化疗对MCF-7乳腺癌细胞的效果,且具有协同作用。     

miR-145-5 p靶向调控MRGBP基因表达对晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)是否通过靶向调控MRG结构域结合蛋白(MRGBP)基因表达来影响晶状体上皮细胞增殖和凋亡.方法 使用紫外线照射晶状体上皮细胞SRA01/04,构建细胞凋亡模型.在细胞中转染anti-miR-145-5p或pcDNA-MRGBP,并构建细胞凋亡模型.实时荧光定量P...     

miR-148a靶向S1PR1抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和迁移机制研究

目的 研究miR-148a靶向调控1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY19)增殖和迁移的机制.方法 miR-148a mimic对OCI-LY19细胞进行转染,实验分为对照组、miR-148a阴性对照组、miR-148a mimic组,实时荧光定量法测定转染后OCI-LY19细胞...     

慢病毒介导的细胞分裂周期相关蛋白2基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨应用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2)基因对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)法分别检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A与乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-23...     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1靶向微小 RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码 RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法收集南阳市中心医院 2017年 1月 2019年 1月收治的 37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将 MDA-MB-453细胞分为 CDKN2B-AS1阴性对照( si-NC组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA(si-CDKN2B-AS1组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+miR-339-5p阴性对照( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+ miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用 RT-qPCR法对 CDKN2B-AS1及微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及 MTT实验;采用 Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用 Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原 -67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子 1A(P21)、上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测 CDKN2B-AS1对 miR-339-5p的靶向调控。结果在乳腺癌组织中 CDKN2B-AS1表达水平上调［( 2.23±0.08)比( 1.00±0.06)］(P<0.05)。抑制 CDKN2B-AS1可增加 G0期细胞比例［(43.29±3.76)%比( 30.25±3.01)%］、 P21表达水平升高, S期细胞比例［(21.91±3.10)%比( 34.19±3.32)%］、细胞存活率［( 53.02±5.38)%比( 100.00±7.12)%］、迁移、侵袭数以及 Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低( P<0.05)。 CDKN2B-AS1靶向调控 miR-339-5p,抑制 miR-339-5p逆转抑制 CDKN2B-AS1对 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论抑制 CDKN2B-AS可抑制乳腺癌 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控 miR-339-5p表达。关键词:乳腺肿瘤;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1;微小 RNA-339-5p(miR-339-5p);增殖;迁移;侵袭     

苦参碱对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的探讨苦参碱对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖、凋亡的影响。方法实验组MCF-7细胞加入苦参碱溶液,对照组加入等量培养液。MTT比色法检测苦参碱对MCF-7细胞的生长抑制率;镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测MCF-7细胞Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与对照组比较,实验组苦参碱呈时间、剂量依赖性明显抑制MCF-7细胞生长,诱导MCF-7细胞凋亡,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论苦参碱对MCF-7细胞具有明显的生长抑制和促凋亡作用,与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。     

过表达微小 RNA-877-5p通过靶向叉头框转录因子 M1调控胃癌细胞活力和凋亡

目的探讨微小 RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制。方法本研究时间为 2020年 1—7月。胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心。实时定量基因扩增荧光检测( qPCR)检测胃癌细胞株 HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1中 miR-877-5p和叉头框转录因子 M1(FOXM1)信使核糖核酸( mRNA)表达。建立 miR-877-5p过表达或抑制 FOXM1表达细胞株,观察其在 HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用。 MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测 FOXM1、细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子 p21、p27、B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved-caspase 3)蛋白表达。 TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析 miR-877-5p和 FOXM1的靶向关系。共转染 miR-877-5p模拟物和 FOXM1过表达载体( pcDNA-FOXM1),研究 FOXM1过表达对 miR-877-5p过表达诱导的 HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常胃黏膜上皮细胞 GES-1比较,胃癌细胞 HGC-27、SUN-1、AGS中的 miR-877-5p表达下调( 1.00±0.08比 0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05)FOXM1 mRNA和蛋白表达上调( 1.00±0.09比 2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P< 0.05)。 miR-877-5p过表达显著降低 HGC-27细,胞 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05),明显提高细胞凋亡率、 p21、p27、Bax、cleaved-caspase3蛋白的水平( P<0.05)显著减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。抑制 FOXM1表达显著降低 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05)提高细胞凋亡率、 p,21、Bax蛋白水平( P<0.05),减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。 miR-877-5p靶向调控 FOXM1的表达,。FOXM1过表达后, miR-877-5p过表达对 HGC-27细胞增殖、 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、 p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转。结论过表达 miR-877-5p通过靶向调控 FOXM1表达抑制胃癌细胞的活     

环状 RNA肌球蛋白轻链激酶靶向微小 RNA-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状 RNA肌球蛋白轻链激酶( circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究 2019年 3月至 2020年 1月进行。实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测检测正常结肠上皮细胞( NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中 circMYLK和微小 RNA-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将 circMYLK小干扰 RNA(si-circMYLK)、 miR-497-5p模拟物分别转染 SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、 Transwell实验分别检测干扰 circMYLK或过表达 miR-497-5p对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和 RT-qPCR确定 circMYLK对 miR-497-5p的调控作用。结果与 NCM460细胞比较,结肠癌细胞中 circMYLK表达( 1.00±0.06比 3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高, miR-497-5p表达( 1.00±0.08比 0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低( P<0.05)。干扰 circMYLK表达后 SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。过表达 miR-497-5p后 SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。 circMYLK靶向负性调控 miR-497-5p表达。抑制 miR-497-5p表达能够逆转干扰 circMYLK对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力( P<0.05)。结论结肠癌细胞中 circMYLK呈高表达,干扰 circMYLK通过靶向 miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

长链非编码 RNA FOXD2相邻相反链 RNA 1靶向调控微小 RNA-760对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨 FOXD2相邻相反链 RNA 1(FOXD2-AS1)对前列腺癌细胞的增殖和凋亡的影响以及作用机制。方法验于 2019年 1—11月进行,根据 DU145细胞转染情况分为空载体质粒( pcDNA)组、 FOXD2-AS1过表达质粒( pcDNA-FOXD2实AS1)组、小干扰 RNA阴性对照( si-NC)组、 FOXD2-AS1小干扰 RNA(si-FOXD2-AS1)组、微小 RNA(miR)-760组、 miR-760阴性对照( miR-NC)组及 si-FOXD2-AS1+抗 miR-760阴性对照( anti-miR-NC)组、 si-FOXD2-AS1+抗 miR-760(anti-miR-760)组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 miR-760和 FOXD2-AS1表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性;蛋白质印迹法检测蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常前列腺上皮细胞 RWPE-1相比,前列腺癌细胞 DU145、LNCaP、22Rv1中 miR-760表达水平显著降低［( 0.34±0.03)、(0.56±0.05)、(0.42±0.04)比( 1.01±0.08)］(P<     

miR-4795-3p通过靶向EGFR抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨微小RNA（miRNA）-4795-3p通过靶基因表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制胃癌细胞增殖和侵袭。方法:本研究于2020年6月至12月分别转染阴性对照模拟物（阴性对照组）和miR-4795-3p模拟物（miR-4795-3p组）至胃癌BGC...     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

人类表皮生长因子受体 2对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响

目的 研究人类表皮生长因子受体2(HER2)对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 2018年11月至2019年6月,运用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测永生化的正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达;将空载体(pcDNA 3.1)、HER2过表达载体(pcDNA 3.1-HER2)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)、HER2小干扰RNA(si-HER2)用脂质体法转染至SGC-7901细胞.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Tran-swell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中p16、p21、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达.结果 与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达[(3.02±0.28),(2.51±0.21),(2.36±0.19)比(1.00±0.08)]明显升高,其中SGC-7901细胞中的表达最高(P<0.05);过表达HER2后,SGC-7901细胞的增殖[(1.12±0.09)比(0.61±0.06)]、迁移[(170±15)比(100±9)]和侵袭[(130±12)比(75±6)]能力均明显上调,细胞的凋亡力[(8.03±0.69)％比(19.46±1.44)％]明显下调(P<0.05);敲减HER2则可下调SGC-7901细胞的增殖[(0.59±0.05)比(0.89±0.08)]、迁移[(55±5)比(100±8)]和侵袭[(36±4)比(75±6)]能力,上调细胞的凋亡[(16.82±1.15)％比(8.01±0.65)％]能力(P<0.05).重要的是,过表达HER2可明显抑制SGC-7901细胞中增殖抑制蛋白p16、p21,迁移侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9,凋亡促进相关蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3的表达,敲减HER2具有相反的作用.结论 HER2可促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其可能与调控功能增殖、迁移侵袭及凋亡相关蛋白表达有关.