葛根素抑制人成骨样MG-63细胞分泌IL-6的分子机制研究

目的研究葛根素(puerarin)抑制人成骨样MG-63细胞分泌IL-6的分子机制。方法利用兼有两种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,通过ELISA、RT-PCR、荧光素酶报告基因检测、小RNA干扰等方法,研究葛根素对MG63细胞产生骨吸收调节因子IL-6的作用及作用机制。结果葛根素可明显抑制MG-63细胞IL-6表达和IL-6基因启动子的转录活性,并且该作用可被纯ER阻断剂ICI 182,780部分阻断。采用小RNA干扰技术进一步证明葛根素对成骨细胞的上述作用是ERα依赖的。结论葛根素调节人成骨细胞产生IL-6主要是ERα依赖的。     

葛根素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

葛根素是中药葛根的有效成分 ,对心脑血管疾病具有广泛的药理作用[1] 。研究表明 ,经皮腔内冠状动脉成型术(ＰＴＣＡ)后最主要的并发症为再狭窄 ,其主要表现为血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)的增殖和迁移以及细胞外基质的增多 ,而ＶＳＭＣ和巨噬细胞的凋亡功能失调和 (或 )凋亡小体的清除不足是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要因素[2 ] 。因而寻找能够促进动脉粥样硬化中ＶＳＭＣ凋亡的手段具有重要的临床意义。本实验利用体外细胞培养技术、流式细胞术、荧光显微镜观察了葛根素对ＶＳＭＣ凋亡的影响。1　材料和方法1.1　血管平滑肌原代细胞的…     

葛根素对人骨肿瘤细胞株 MG63 的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100 mmol·L^-1)。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53 和 p21 mRNA水平。Western blotting 检测PI3K、AKT、Bax、 Bcl-2、p53和p21表达水平。结果 葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和 Bax 表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达。结论 葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡。     

雌激素促进人的类成骨细胞TE85成骨作用的受体机制

目的：研究雌激素促进人的类成骨细胞株TE85细胞骨形成的作用。方法：用³H-胸腺嘧啶、³H-脯氨酸参入法分别测定细胞的增殖和胶原合成; 紫外分光光度法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性; 放免法测定细胞内骨钙素（BGP）含量; 放射配基法测定细胞核雌激素受体结合。结果：雌激素（E₂, 0.01～1.0 nmol.L^-1）可浓度依赖地刺激TE85细胞的³H-胸腺嘧啶和³H-脯氨酸的参入量; 在相同的时间点和剂量下,可增加成骨细胞内ALP活性和BGP的含量。结论：E₂通过增加成骨细胞数量、促进细胞胶原蛋白及ALP和BGP的合成而促进成骨作用,这些作用是通过雌激素受体介导的。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

谷胱甘肽耗竭在芹菜素诱导成骨肉瘤MG- 63 细胞凋亡中的作用

目的研究芹菜素（apigenin）诱导体外培养人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用及其机制。方法体外培养MG-63细胞,分光光度法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 apigenin显著降低MG-63细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。apigenin以浓度依赖方式诱导MG-63细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂;500μmol/LGSH预孵育1h,能有效阻断apigenin诱导MG-63细胞内GSH耗竭和细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论 apigenin通过耗竭MG-63细胞内GSH诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

Nocodazole对骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的以细胞有丝分裂阻滞剂Nocodazole为诱导物,诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,并进行生物化学指标的检测。方法首先,观察1nmol/L～10μmol/L递增浓度的Nocodazole对MG-63细胞的作用,然后选取10,50,100,500nmol/L4个浓度诱导凋亡,通过噻唑蓝(MTT)比色实验测定细胞生长曲线;流式细胞技术(FCM)分析细胞周期;免疫细胞化学方法检测PLK1表达情况;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析Nocodazole作用前后MG-63细胞内PLK1基因表达情况。结果不同浓度Nocodazole作用MG-63细胞24h后,对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性增加。流式细胞仪分析结果显示,Nocodazole作用MG-63细胞后,G0/G1期细胞含量降低,S期细胞比例增加,G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Nocodazole作用后,免疫细胞化学检测显示,PLK1表达明显下降。RT-PCR分析显示经Nocodazole作用后的骨肉瘤细胞株MG-63表达PLK1较用药前明显下降。上述结果都有明显的量-效关系。结论 Nocodazole诱导MG-63细胞凋亡、G2/M期阻滞的机制可能是通过抑制PLK1基因的表达实现的。     

米非司酮对子宫肌瘤细胞凋亡及雌孕激素受体的影响

目的 探讨米非司酮对子宫肌瘤细胞凋亡和雌孕激素受体（ＥＲ,ＰＲ）的影响以及凋亡与受体的关系。方法 １２例子宫肌瘤患者,于月经周期第１５￣１６天口服米非司酮２５ｍｇ／ｄ,连服７ｄ后行子宫切除术,取瘤体和子宫肌组织、行流式细胞术结合形态学变化检测瘤细胞凋亡;做免疫组化观察ＥＲ、ＰＲ变化,９例分泌期手术的肌瘤患者做对照组,同时取增生期１０例、分泌晚期８例、月经期５例以排除激素变化对瘤细胞凋亡及受体的影响     

低氧状态下红景天苷经HIF-1α信号通路调节人成骨样MG-63细胞表型表达的研究

目的研究低氧状态下红景天苷对成骨细胞表型表达的调控作用及其作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖能力;采用Annexin V/PI双染法分析低氧诱导的细胞凋亡情况;磷酸苯二钠法检测成骨细胞分化的早期标志性基因碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR技术检测低氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、抑癌基因VHL蛋白(p VHL)、骨钙素(OC)、成骨细胞特异性转录因子Runx2及Osterix mRNA表达水平;采用ELISA法检测VEGF及OC的蛋白表达水平和I型胶原的含量;Western blot技术检测HIF-1α、p VHL、Osterix、Runx2的蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦显微镜技术观察HIF-1α的核转位情况;荧光素酶报告基因检测技术检测HIF-1α的转录活性。结果低氧状态下红景天苷促进MG-63细胞增殖,抑制由低氧诱导的MG-63细胞凋亡,促进Osterix、Runx2表达及通过增加ALP活性、Ⅰ型胶原和OC含量促进成骨细胞分化成熟。进一步研究发现,低氧状态红景天苷可下调HIF-1α的表达及核转位,而上调其转录活性及下游靶基因VEGF的表达。结论低氧状态下红景天苷通过调节HIF-1α/VEGF信号通路促进成骨细胞增殖和分化,同时抑制由低氧诱导的成骨细胞凋亡。     

RNAi沉默XIAP基因抑制MG-63细胞增殖及其分子机制

目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制NC-63骨肉瘤细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的表达及其抗肿瘤的机制.方法 构建XIAP基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体.将NC-63细胞分为空白组(A组),用空白质粒psiRNA-Con转染(B组),用psiRNA-XIAP转染(C gt).Westernblot检测XIAP蛋白的表达;MTT检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期、凋亡及半胱天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的表达;ELISA法检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)含量.结果 与A、B组比较,C组细胞XIAP蛋白水平、MTT值及VEGF含量均显著降低,细胞凋亡率、Caspase-9蛋白表达及G2/M期细胞所占比例增高(P＜0.05).结论 RNAi能有效抑制XIAP基因表达,抑制骨肉瘤细胞增殖活性,诱导其凋亡.其机制可能涉及Caspase家族凋亡信号转导通路的活化、DNA合成及肿瘤血管生成的抑制.     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.     

葛根素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖凋亡的影响

目的探讨葛根素对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用及其机制。方法取对数生长期的PANC-1细胞,分别用不同浓度的葛根素(0、50、100、200μmol/L)干预48 h后,利用CCK-8检测PANC-1细胞增殖水平;Annexinv-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2、Caspase-7表达水平。结果葛根素对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制呈浓度依赖性;不同浓度的葛根素干预PANC-1细胞48 h后,细胞凋亡率分别为2.47%±0.64%、6.37%±0.71%、8.33%±0.90%、12.40%±1.01%,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);Western blot实验表明,葛根素对胰腺癌PANC-1细胞干预48 h后,随着葛根素浓度的增加,细胞中Fas、Fas-L、Caspase-7、Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2的表达量下调,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论葛根素可通过激活Fas/Fas-L信号通路诱导PANC-1细胞增殖抑制和凋亡。     

β-榄香烯通过抑制WNT信号通路促进MG-63细胞凋亡

<正>β-榄香烯在作为化疗药使用时表现为毒副作用小,极少产生耐药性[1]。但是榄香烯治疗骨肉瘤尚未见报道。我们应用榄香烯作用于人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并进一步研究Wnt/β-catenin信号传导通路在其中的作用。     

葛根素对子痫前期患者胎盘细胞凋亡的影响

目的研究葛根素对子痫前期（PE）患者相关Bax、bcl-2及Caspase-3在胎盘绒毛中的表达的影响,探讨葛根素治疗PE对凋亡相关表达的影响及治疗机制。方法选择正常妊娠妇女60例,硫酸镁治疗后PE患者60例（对照组）,硫酸镁与葛根素治疗后PE患者54例（研究组）,分娩后取胎盘组织,采用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白的BCL-2,BAX,Caspase-3表达情况;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧核苷酸切口末端标记法（TUNEL法）检测胎盘细胞凋亡情况。结果研究组胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率明显高于正常妊娠组,但低于对照组（P〈0．05）胎盘绒毛中有Bax、bcl-2、Caspase-3表达主要分布于合体滋养层细胞,研究组Bax和Caspase-3阳性表达率分别为（49．6±5．7）％和（29．5±4．1）％,与正常妊娠比较,表达水平显著增加（P〈0．01）,与对照组比较,Bax、Caspase-3表达水平显著降低,（P〈0．01）。结论胎盘组织中Bax、Caspase-3在子痫前期发病中可能起重要作用;葛根素治疗能使胎盘绒毛Bax、Caspase-3表达改变,抑制胎盘绒毛的细胞凋亡,提高子宫-胎盘-胎儿血供。     

肿瘤细胞凋亡的分子机制

凋亡作为肿瘤治疗的基础,了解触发或加快肿瘤细胞凋亡的因素对肿瘤的防治具有重大的意义。细胞凋亡过程受遗传因素影响,多种癌基因与抑癌基因参与这一过程,有些基因对细胞凋亡有诱导作用,另一些基因可抑制细胞凋亡的发生,了解,握,利用理化等因素调控,诱导细胞凋亡的分子机制,可以促进和改善肿瘤治疗的方法。     

葡萄糖对成骨样细胞MG63增殖及相关基因表达的影响

目的 探讨葡萄糖对成骨细胞株MG63增殖及细胞相关基因表达的影响.方法 以不同浓度葡萄糖干预细胞株MG63(干预组),设磷酸缓冲盐溶液(PBS)为对照(对照组).应用细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;应用生化分析仪检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的含量;应用RT-PCR检测骨钙素(OCN)、骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)基因的表达.结果 与对照组相比,干预组细胞增殖受抑制(P＜0.01),ALP活性降低(P＜0.05),OCN和OPG表达减弱(P＜0.05),而RANKL的表达增强(P＜0.05).结论 高糖环境可抑制成骨细胞增殖、分化和基质成熟,同时下调OPG、上调RANKL的表达,可能是糖尿病性骨质疏松的重要发病机制之一.     

双氢青蒿素诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:研究双氢青蒿素诱导人白血病细胞凋亡作用及其机制。方法:用双氢青蒿素处理K562细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,蛋白印迹技术(Western blot)检测线粒体、胞浆细胞色素C的表达。结果:双氢青蒿素处理K562细胞48h后MTT检测,570nm波长处测定半数细胞抑制浓度为8×10-5mol.L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞增殖抑制表现;RT-PCR检测到caspase-3的表达,Western-blot检测线粒体细胞色素C表达下调,胞浆中细胞色素C表达阳性。结论:双氢青蒿素能够在体外抑制人白血病细胞增殖并诱导其凋亡,而促进细胞色素C的释放,激活caspase-3可能是其作用机制之一。     

葛根素对血管平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的：观察中药黄酮葛根素对血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的影响，并进一步探讨其作用的分子机制，探讨葛根素对何种VSMC凋亡相关基因的表达有影响。方法：应用流式细胞仪、荧光显微镜及电镜观察药物作用后细胞凋亡情况；采用cDNA差式分析法观察药物对细胞凋亡相关基因表达的影响。结果：（1）葛根素可促进VSMC凋亡，药物作用48h后凋亡率为15．5％，对照组为1．0％，荧光显微镜及电镜观察均可见明显的细胞凋亡特征；（2）cDNA差式分析筛选出两条长752bp和761bp的片断。同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的片断，同源检索显示与葡萄糖调节蛋白GRP94基因高度同源。结论：葛根素可促进VSMC凋亡，可能与促进VSMC的GRP94的基因表达有关。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制