针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

OBJECTIVETo study the survival and growth of colorectal cell line SW480 treated by small interfering RNA (SiRNA) that aims to PLK1 (Polo-like kinase 1) mRNA. METHODSThree chemically synthesized SiRNA molecules were designed targeting different sites of PL     

针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

目的研究小干扰RNA（Small interfering RNA, SiRNA）处理结肠癌细胞株SW480，对该细胞存活生长的影响。方法化学合成了对应于PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达mRNA碱基序列不同位点的3种特异SiRNA，分别用脂质体将其以及等比例混合物转染SW480细胞，MTT法检测不同的SiRNA对细胞存活的影响，并应用细胞染色和DNA电泳分析细胞凋亡。结果发现3种SiRNA及其混合物对SW480细胞的存活具有相应的抑制作用，随着浓度的增加SW480细胞存活百分率下降，而且混合物均比单一使用效果好，三种混合物在25nM处抑制了近20％的SW480细胞存活，同时观察到细胞形态和核酸变化的凋亡现象。结论化学合成的SiRNA降低了SW480细胞的存活，诱导了细胞凋亡，而且联合应用效果更好，提示新的抗肿瘤措施。     

LncRNA NEAT1调控miR-331表达对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA NEAT1通过靶向调控miR-331对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响。方法选取2018年1月至2019年1月手术切除鼻咽癌组织及对应的癌旁组织的患者48例样本,qRT-PCR检测Lnc RNA NEAT1在鼻咽癌及相应的癌旁组织、不同的鼻咽癌细胞系中的表达情况;构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系SUNE-1-siNEAT1及阴性对照SUNE-1-siNC,并以SUNE-1作为空白对照;电离辐射后,采用MTT实验、Transwell、免疫荧光标记检测Lnc RNA NEAT1对SUNE-1细胞辐射敏感性、侵袭能力及DNA损伤修复的影响;使用生物信息学网站starBase预测NEAT1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),再经双荧光基因报告验证Lnc RNA NEAT1与miR-331的靶向关系。结果 qRT-PCR结果显示,鼻咽癌组织中Lnc RNA NEAT1的表达水平高于癌旁正常组织,且差异有统计学意义(P<0.05), Lnc RNA NEAT1在SUNE-1细胞中表达量最高,与其他细胞株相比差异均具有统计学意义(P&l...     

针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

目的研究小干扰RNA(Small interfering RNA, SiRNA)处理结肠癌细胞株SW480,对该细胞存活生长的影响.方法化学合成了对应于PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达mRNA碱基序列不同位点的3种特异SiRNA,分别用脂质体将其以及等比例混合物转染SW480细胞,MTT法检测不同的SiRNA对细胞存活的影响,并应用细胞染色和DNA电泳分析细胞凋亡.结果发现3种SiRNA及其混合物对SW480细胞的存活具有相应的抑制作用,随着浓度的增加SW480细胞存活百分率下降,而且混合物均比单一使用效果好,三种混合物在25nM处抑制了近20%的SW480细胞存活,同时观察到细胞形态和核酸变化的凋亡现象.结论化学合成的SiRNA降低了SW480细胞的存活,诱导了细胞凋亡,而且联合应用效果更好,提示新的抗肿瘤措施.     

硼替佐米联合PLK1抑制剂处理肿瘤细胞A549、HeLa对其增殖影响

目的 明确硼替佐米(bortezomib, PS341)和PLK1抑制剂处理肿瘤细胞HeLa、A549后细胞增殖的变化,探索不同药物组合使用的抗肿瘤作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度分组的药物处理A549、HeLa细胞后的生长曲线;采用PI染色法检测PLK1抑制剂BI2536、GW843682X与蛋白酶体抑制剂PS341的合并使用对肿瘤细胞周期的影响;采用Western blot检测细胞周期相关蛋白和PLK1的蛋白表达水平。结果 PLK1抑制剂BI2536、GW843682X均明显抑制A549、HeLa细胞生长并使其阻滞在G₂/M期,加入蛋白酶体抑制剂PS341后细胞增殖抑制被削弱、G₂/M期阻滞的细胞减少、周期蛋白cyclin E1异常积累。结论 PS341可明显减弱PLK1抑制剂的细胞增殖抑制效果,认为PLK1抑制剂与PS341联合使用需考虑药效减弱的风险,推测相关分子机制涉及细胞周期蛋白代谢异常。     

蔓荆子黄素调控miR-378/PRRX1轴对胃癌生物学行为的影响

目的 探究蔓荆子黄素（Cas）对胃癌（GC）SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移及微小RNA-378(miR-378)/配对相关同源框1(PRRX1)轴的影响。方法 不同浓度Cas(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理SGC-7901细胞48 h。将对数生长期的SGC-7901细胞分为：对照组、Cas低浓度组（10μmol/L）、Cas中浓度组（20μmol/L）、Cas高浓度组（40μmol/L）、Cas高浓度+miR-378小干扰RNA(siRNA)组（40μmol/L Cas+miR-378 siRNA）、Cas高浓度+PRRX1组（40μmol/L Cas+PRRX1过表达质粒）、Cas高浓度+miR-378 siRNA+PRRX1组（40μmol/L Cas+miR-378 siRNA+PRRX1过表达质粒）。MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验分别测定各组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、凋亡率、侵袭及迁移能力;q PCR、蛋白印迹实验分别检测SGC-7901细胞miR-378、PRRX1蛋白表达水平;双萤光素酶实验验证mi...     

PLK1抑制剂BI-2536的合成工艺研究

目的 研究PLK1抑制剂BI-2536的合成工艺.方法 以D-2-氨基丁酸为起始原料,依次经酯化、还原胺化、亲核取代、还原环合、甲基化反应,得到关键中间体(7R)-2-氯-8-环戊基-7-乙基-7,8-二氢-5-甲基-6(5H)-蝶啶酮;以3-甲氧基-4-硝基苯甲酸为起始原料,经氯代、酰胺化、硝基还原,得到关键中间体4...     

抑制Bmi-1基因表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的利用小干扰RNA技术沉默Bmi-1基因的表达,探讨其对人鼻咽癌CNE-1生物学行为的影响。方法设计并化学合成了针对Bmi-1的小干扰RNA,转染具有高转移性的CNE-1细胞,利用qRT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达水平。体外通过Transwell小室、Matrigel胶模型﹑流式细胞术,观察Bmi-1被沉默后对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响。结果 qRT-PCR和Western结果显示,Bmi-1-siRNA转染组Bmi-1基因的表达水平被有效抑制。与对照组相比,Bmi-1-siRNA转染组的细胞侵袭迁移力明显下降,细胞被阻滞在S期。结论抑制Bmi-1基因的表达可有效降低CNE-1细胞侵袭迁移的能力。     

桃叶珊瑚苷对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的 探讨桃叶珊瑚苷（Auc）调节周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)/周期蛋白B1(CCNB1)/Polo样激酶1(PLK1)信号通路对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 以人乳腺癌细胞MCF-7为对象,将其分为对照组,Auc低、中、高浓度组（Auc-L、AucM、Auc-H组,20、40、80μmol/L的Auc）,Auc-H+pcDNA-NC组（80μmol/L的Auc+转染pcDNA-NC质粒）,Auc-H+pcDNA-CDK1组（80μmol/L的Auc+转染pcDNA-CDK1质粒）,检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力,凋亡情况及周期分布,凋亡、上皮-间充质转化（EMT）、CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种MCF-7细胞悬液建立移植瘤模型,并将其分为对照组和Auc组（每组12只）,检测各组裸鼠肿瘤体积、质量及肿瘤组织中CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果 与对照组细胞相比,Auc各浓度组的细胞克隆形成数、增殖率、细胞侵袭数、划痕愈合率、G1/G0期和S期细胞占比以及B细胞淋巴瘤2...     

Ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌远处转移的影响

目的：探讨Ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况及其对鼻咽癌远处转移的影响。方法采用免疫组织化学方法检测Ezrin蛋白在98例鼻咽癌患者（观察组）和37例慢性鼻咽炎患者（对照组）组织中的表达情况。并分析鼻咽癌患者的详细临床分期和病理特点,跟踪随访治疗过程中发生复发和转移的情况。结果观察组98例患者中,69例（70．4％）呈现Ezrin蛋白阳性表达;对照组37例患者中,仅有4例（10．8％）呈现Ezrin蛋白阳性表达;两组Ezrin蛋白阳性率差异有统计学意义（χ2＝38．42,P＝0．00）。通过对观察组中不同Ezrin蛋白表达强度患者的远处转移情况比较发现,Ezrin的强阳性（＋＋＋）与肿瘤的远处转移密切相关,Ezrin蛋白阳性（＋＋）、（＋＋＋）表达组与阴性（-）和/或弱阳性（＋）表达组患者比较,肿瘤转移率明显偏高（均P＜0.05）。结论 Ezrin蛋白在鼻咽癌患者组织中呈现高表达情况,并且Ezrin蛋白的阳性表达与鼻咽癌的远处转移有关。     

靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的通过体外实验来研究靶向肽NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡等生物学行为的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法、细胞划痕实验,研究靶向肽NYZL1对BIU-87细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响;使用流式细胞术,研究靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞凋亡、周期分布的影响。结果MTT实验结果显示,NYZL1对膀胱癌细胞的增殖无明显抑制作用;细胞生长曲线显示,NYZL1不直接影响肿瘤细胞的生长;损伤修复实验结果显示,BIU-87细胞的迁移能力不受NYZL1的影响;流式细胞仪分析结果显示,NYZL1对BIU-87细胞的周期分布与凋亡结果均无明显影响。结论靶向肽NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞的恶性生物学行为无显著影响。     

Rac1的生物学作用及其调控机制研究进展

Rac1（即Rac相关的C3肉毒素底物1）是Rho家族成员之一.Rho家族在细胞的一些基本功能中起着＆quot;分子开关＆quot;的作用,参与了细胞的运动、1肌动蛋白重组、肿瘤的恶性转型、侵袭转移、转录因子的调节、细胞的凋亡以及肿瘤的血管生成等过程.Rac1在细胞运动与黏附、细胞的增殖分化与凋亡、肿瘤的侵袭与转移以及免疫调节等方面都发挥了重要的作用.本文就Rac1的结构特点、主要生物学作用及其调控机构等方面的最新研究进展进行介绍.     

ZnPcH1-PDT对CNE1细胞增殖抑制作用研究

目的本文探讨新型酞菁类光敏剂ZnPcH1介导的光动力疗法(ZnPcH1-PDT)对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法采用人鼻咽癌CNE1细胞作为研究对象。应用MTT比色法和细胞集落形成实验检测PDT对细胞的杀伤作用。结果 ZnPcH1-PDT对鼻咽癌CNE1细胞有杀伤作用,呈量效关系(P<0.05)。结论 ZnPcH1-PDT能够有效地抑制鼻咽癌细胞的增殖,且呈量效关系。     

金丝桃苷抑制鼻咽癌细胞生物学行为的分子机制研究

目的 探讨金丝桃苷对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响和机制。方法 采用10、20及40 mg/L金丝桃苷的培养液孵育SUNE1细胞,依次记为低、中、高剂量组;将长链非编码RNA(lncRNA)配对盒基因8反义RNA 1(PAX8-AS1)过表达或敲低质粒、miR-494-3p模拟物及其阴性对照分别转染至40 mg/L金丝桃苷处理的SUNE1细胞,采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验检测SUNE1细胞活力、克隆形成以及迁移和侵袭。蛋白质印记法分析基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表达。双荧光素酶报告实验分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向关系。结果低、中、高剂量金丝桃苷降低SUNE1细胞活力、迁移数和侵袭数,下调MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表达水平,上调lncRNA PAX8-AS1表达水平（P<0.05）。lncRNA PAX8-AS1靶向负调控miR-494-3p表达。过表达lncRN...     

三维共培养模型下人脐静脉内皮细胞对鼻咽癌CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响

目的探讨三维共培养下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法采用Transwell小室对HUVEC细胞和CNE2细胞进行共培养,CCK-8法比较两组实验中CNE2细胞增殖能力,细胞计数法比较细胞迁移能力,以及Matrigel胶法比较侵袭能力。结果 HUVEC与CNE2共培养条件下,共培养组迁移能力显著高于非共培养组(P0.01)。共培养组侵袭能力显著高于非共培养组(P0.01)。在增殖实验中,共培养组和非共培养组的OD值第3天,第4天及第5天,共培养组的细胞增殖率显著高于非共培养组(P0.05)。结论在三维共培养条件下,HUVEC对CNE2鼻咽癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力有促进作用。     

miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的作用.方法 定量聚合酶链反应检测胃癌组织和胃癌细胞中miR-21的表达情况,过表达miR-21后蛋白免疫印迹法检测HTN1的表达,双荧光素酶实验检测miR-21和HTN1表达在胃癌细胞中的关系,划痕实验检测过表达miR-21对胃癌细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测过表达miR-21对胃癌细胞侵袭能力的影响.结果 miR-21在胃癌组织及胃癌SGC7901细胞中表达水平均降低(P<0.05).miR-21的表达与病理分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞株荧光素酶活性、HTN1基因和蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞的迁移速率较对照组减慢,侵袭细胞数目少于对照组(P<0.05).结论 miR-21在胃癌中表达下调,其可以调控HTN1表达影响胃癌细胞迁移和侵袭能力.     

LncRNA KCNQ1OT1通过调控 miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制.方法 于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达.以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系.结果 喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)].喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)].与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)％比(3.79±2.37)％].KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达.敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论 KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为.     

cerbB-2与P53蛋白在Ⅲ期鼻咽癌中表达与生物学行为的关系

目的探讨Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中cerbB-2蛋白与P53蛋白的表达与生物学行为及预后的关系。方法应用免疫组织化学EnVison法检测58例Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌标本。结果58例Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中,cerbB-2蛋白总阳性率为63.8%(37/58),cerbB-2蛋白阳性表达组颅底侵袭率显著较高而5年生存率显著性较低(P<0.05);P53蛋白总阳性率为65.5%(38/58),P53蛋白阳性表达组颅底侵袭率显著较高而5年生存率显著性较低(P<0.05);cerbB-2蛋白与P53蛋白表达列联系数(c)=0.44。结论本组Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌患者中cerbB-2蛋白表达与P53蛋白表达相关。cerbB-2蛋白与P53蛋白表达阳性者预后较差。     

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照（NC）组（未处理）、低剂量组（12.5μmol/L羽扇豆醇）、中剂量组（25μmol/L羽扇豆醇）、高剂量组（50μmol/L羽扇豆醇）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-100-5p组（转染miR-100-5p）、anti-miR-NC+高剂量组（转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理）、anti-miR-100-5p+高剂量组（转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理）。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、...