丙泊酚对SD乳鼠少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白表达和髓鞘形成的影响

目的探讨不同剂量丙泊酚对新生SD乳鼠少突胶质细胞合成髓鞘碱性蛋白（MBP）和大脑髓鞘形成的影响。方法出生后 7 d（P7）SD乳鼠57只,随机分为对照组（n=13）、溶剂脂肪乳组（n=5）、25、50和100 mg/kg丙泊酚组（各组n=13）,单次腹腔注射给 药。采用qPCR和Western blot检测注药后8 h mbp mRNA、caspase-3 mRNA和MBP、Cleaved Caspase-3蛋白的表达;免疫荧光 法检测注药后8 h少突胶质细胞凋亡以及24 h大脑胼胝体和内囊处髓鞘形成情况。结果与对照组相比,各丙泊酚组8 h mbp mRNA和MBP蛋白呈剂量依赖性下调（P<0.05）,caspase-3 mRNA和Cleaved Caspase-3 蛋白转录表达水平均呈剂量依赖性 增加（P<0.05）;同时少突胶质细胞凋亡明显增加,且50 和100 mg/kg 组较25 mg/kg 组凋亡显著增多（P<0.05）;24 h 胼胝体处 100 mg/kg丙泊酚组、内囊处50和100 mg/kg丙泊酚组髓鞘形成均明显减少（P<0.05）。结论丙泊酚可致SD乳鼠少突胶质细胞 呈剂量依赖性凋亡增加,MBP表达减少,并且不同程度的影响胼胝体和内囊处髓鞘的形成。     

丙泊酚诱导新生大鼠少突胶质细胞的凋亡:基于激活caspase家族蛋白和抑制抗凋亡程序

目的 探讨丙泊酚诱导少突胶质细胞凋亡的分子机制。方法 采用随机数字表法将45只7 d SD乳鼠分为对照组（n=15）、脂肪乳剂组（n=15）和50 mg/kg丙泊酚组（n=15）。单次腹腔注射丙泊酚,0.4 mL/只（体积不足者用生理盐水补齐）。对照组和脂肪乳剂组腹腔注射等体积的生理盐水和中长链脂肪乳。丙泊酚腹腔注射麻醉8 h后,采用qPCR和Western blot检测不同组别caspase-3、caspase-8、caspase-9 m RNA和蛋白表达水平;检测NGF mRNA和P-PI3K/P-PAkt表达水平。结果 与对照组相比,丙泊酚组caspase-3、caspase-8、caspase-9 m RNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）;NGF mRNA和P-PI3K/P-PAkt表达水平降低（P<0.05）。结论 丙泊酚通过激活凋亡程序中caspase家族蛋白成员和抑制抗凋亡程序,诱导少突胶质细胞的凋亡。     

hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用

目的：探究微小RNA-214-5p（micro RNA-214-5p、miR-214-5p）对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法：将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhi－bitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4（P21-activated kinases 4, PAK4）的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4（pc-PAK4）、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果：miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平（46.02±5.23）较HeLa组（1.00±0.01）明显升高（LSD-t=31.423,P=0.000）,miR-214 mimic组PAK4蛋白的表达水平（0.08±0.04）较HeLa组（0.26±0.05）明显降低（LSD-t=4.296,P=0.002）;miR-214 inhibitor组miR-214-5p mRNA的表达水平（0.41±0.05）较HeLa组（1.00±0.01）明显降低（LSD-t=18.726,P=0.000）,miR-214 inhibitor组PAK4蛋白的表达水平（0.58±0.05）较HeLa组（0.26±0.05）明显升高（LSD-t=5.061,P=0.001）;miR-214-5p与PAK4可靶向结合。miR-214 mimic组细胞生长速度（3.50±0.45）较HeLa组（5.02±0.35）明显降低（tD=8.644,P=0.000）,miR-214 mimic组细胞凋亡率[（11.42±0.71）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显升高（LSD-t=4.032,P=0.003）;miR-214 inhibitor组细胞生长速度（5.89±0.32）较HeLa组（5.02±0.35）明显升高（LSD-t=7.863,P=0.000）,miR-214 inhibitor组细胞凋亡率[（0.53±0.42）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显降低 （LSD-t=4.221,P=0.002）;共转染pc-PAK4能逆转miR-214 mimic对细胞活力和细胞凋亡的调控作用。结论：miR-214-5p能通过靶向下调PAK4抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导细胞凋亡。     

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的：初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果：低氧组较对照组自噬溶酶体含量（P=0.000）及自噬体数量（P=0.000）明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加（P=0.001）,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率增加（P=0.000）;低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体（P=0.019）及自噬体数量（P=0.000）、LC3Ⅱ蛋白表达（P=0.049）、Sirt1蛋白表达（P=0.000）明显增加,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率减少（P=0.021）;低氧+白藜芦醇+ex527组...     

少突胶质细胞对PC12细胞JAK2基因表达的影响及其意义

目的 探讨少突胶质细胞对PC12细胞JAK2基因表达的影响及其意义。方法 用分离培养的少突胶质细胞及其细胞碎片分别作用于培养的PC12细胞,于不同作用时相点在观察PC12细胞突起变化的同时检测PC12细胞内JAK2mRNA的表达JAK2蛋白的磷酸化。结果 在给予少突胶质细胞及其细胞碎片处理后10min,JAK2 mRNA表达较对照组有显著增高（P＜0．05）,但处理12h后,其表达虽较处理10min及4h有显著下降,但仍显著高于对照组（P＜0．05）。对照组JAK2蛋白的活性较低,但少突胶质细胞及其细胞碎片加入后,JAK2蛋白很快便被磷酸化而激活,到处理后12h,激活的蛋白呈较处理10min有显著下降,但仍显著高于正常对照组（P＜0．05）。少突胶质细胞及其细胞碎片对其影响差别不显著（P＞0．05）。结论 少突胶质细胞作用于PC12细胞时可调节PC12细胞JAK2的表达与激活,这种表达与激活在一定程度上可能介导少突胶质细胞对PC12细胞突起生长的影响。     

GLP-1通过Par-4/NF-κB途径改善2型糖尿病胰岛β细胞凋亡

目的：观察GLP-1对糖尿病小鼠中Par-4/NF-κB的表达和胰岛β细胞凋亡的影响。方法：将小鼠随机分成正常对照组（8只,C组）、Par-4敲除组（8只,CP组）、糖尿病组（8只,D组）、糖尿病Par-4敲除组（8只,DP组）、GLP-1+糖尿病组（8只,GD组）、GLP-1+糖尿病Par-4敲除组（8只,GDP组）,TUNEL法检测各组细胞凋亡,Westernblot检测各组细胞Par-4和NF-κB蛋白表达水平,ELISA检测各组胰岛素分泌。结果：C组凋亡率（P=0.965）和NF-κB（P=0.754）与CP组比较无统计学差异,胰岛素分泌无统计学差异（P=0.797）;与C组和CP组比较,D组凋亡率（P=0.000）、Par-4（P=0.000）和NF-κB（P=0.000）表达明显升高,胰岛素分泌下降（P=0.000）;与D组相比,DP组和GD组细胞凋亡率（P=0.000,P=0.000）、Par-4（P=0.000,P=0.000）和NF-κB（P=0.000,P=0.002）表达明显下降,胰岛素分泌有所改善（P=0.000,P=0.026）;与GD组比较,GDP组凋亡率（P=0.000）、Par-4（P=0.000）和NF-κB（P=0.015）表达明显下降,胰岛素分泌有所改善（P=0.026）,DP组和GDP组在凋亡率（P=0.930）、Par-4（P=0.965）和NF-κB（P=0.875）表达及胰岛素分泌（P=0.797）方面无统计学差异。结论：GLP-1干预通过抑制Par-4/NF-κB表达,改善2型糖尿病胰岛β细胞凋亡和胰岛素分泌功能。     

实验性大鼠脑出血细胞凋亡与Bcl-2和Bax表达关系的研究

目的 研究大鼠脑出血（ICH）后血肿周围细胞凋亡及其与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的变化规律和关系.方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组（n=10）,假手术组（n=40）,ICH组（n=40）.假手术组和ICH组又依术后12h、1d、2d、3d和7d各分为5个亚组.用胶原酶配合肝素诱导大鼠脑尾状核出血,末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记法（TdT-mediated-dUTP nick end labeling,TUNEL）观察不同时间点细胞凋亡的变化, SABC法观察Bcl-2和Bax蛋白在各时点表达的变化,免疫印迹（Western-blot）技术检测Bcl-2和Bax蛋白相对光密度比值,电镜观察细胞超微结构改变.结果 ①ICH组TUNEL阳性细胞12h可检测到,3d达高峰,7d仍有表达（P＜0.01）,阳性细胞主要见于血肿周围,多见神经元,有少量神经胶质细胞和血管内皮细胞;②ICH组Bcl-2和Bax蛋白免疫反应阳性细胞分别于出血2、3d达高峰,7d仍有表达,主要表达于血肿区及血肿周围、同侧及对侧皮层;多见神经元,少数为神经胶质细胞、吞噬细胞和中性粒细胞;③Western-blot 正常对照组和假手术组均可检测到Bcl-2、Bax蛋白,但相对光密度比值较小;ICH组Bcl-2相对光密度比值2d达最大值,Bax则3d达最大值,在7d仍明显高于正常对照组（P＜0.05）.结论 ICH后存在细胞凋亡;Bcl-2和Bax参与了ICH细胞凋亡;ICH组TUNEL阳性细胞7d仍可检测到,提示ICH后7d内进行抗凋亡治疗可以不同程度地阻止细胞凋亡的发生.     

丙泊酚对不同发育时期斑马鱼鞘磷脂蛋白表达的影响

目的 探讨丙泊酚对斑马鱼鞘磷脂蛋白（MBP）表达的影响及相关机制。方法 将受精后6～48 h胚胎（共180个）采用随机数字表法分别浸泡于新鲜养鱼水（对照组）、含二甲基亚砜养鱼水（二甲基亚砜组）和含30μg/mL丙泊酚养鱼水（丙泊酚组）中,每组60个胚胎。于受精后3、4、5、6、7、10 d收集幼鱼,通过RT-qPCR法和Western blot法检测不同发育时期mbp mRNA及蛋白表达。采用TUNEL、免疫荧光法检测3 d少突胶质细胞的凋亡情况。采用RT-qPCR和Western blot法检测凋亡相关因子caspase-8、caspase-9和caspase-3的表达。结果 与对照组相比,丙泊酚组出生后3～7 d幼鱼mbp mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）;丙泊酚组少突胶质细胞凋亡增多,并伴随caspase-8、caspase-9和caspase-3 mRNA和蛋白的表达上调。结论 丙泊酚抑制MBP表达具有短期持续性,其机制可能与少突胶质细胞凋亡相关。     

星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响

目的：体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用，以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43（GAP-43）表达的影响，探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性。方法：采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育，分为共育组和对照组，应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素和GAP-43表达的影响。结果：共育组培养4d，大部分PC12细胞已具备神经元形态，PC12有突细胞／总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组（P〈0．01）；NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多，与对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触。     

氟西汀对抑郁模型大鼠海马CA1区少突胶质细胞作用的研究

目的：探讨抗抑郁药物氟西汀对抑郁症慢性不可预知性应激（chronic unpredictable stress,CUS）模型大鼠海马CA1区内CNPase+少突胶质细胞的作用。方法：选用青年雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（4~6周龄）,随机分为对照组（12只）和模型组（38只）,给予模型组大鼠连续4周的CUS干预。随后依据大鼠的糖水偏好百分比筛选出模大鼠,随机分为CUS组（12只）和CUS+fluoxetine组（FLX组）（12只）,第5~7周CUS组和FLX组继续给予慢性应激,同时FLX组大鼠给予5 mg/（kg·d）氟西汀腹腔注射,对照组和CUS组给予等量生理盐水腹腔注射。干预结束后利用免疫组织化学方法结合现代体视学对大鼠海马CA1区CNPase+少突胶质细胞的数量进行精确的三维定量研究。结果：实验发现,CUS模型组大鼠的体质量（251.4±15.9） g较对照组（323.3±25.9） g明显下降（P=0.00）,但与FLX组大鼠的体质量（257.9±22.7） g相比无差异（P=0.473）。CUS组大鼠的糖水偏好百分比（62.0±14.2）%明显低于对照组（89.2±4.8）%（P=0.000）及FLX组（78.2±12.8）%（P=0.020）。CUS组大鼠海马CA1区CNPase+细胞数量（18 650.7±1 812.0）明显低于对照组（33 606.9±4 471.4）（P=0.007）及FLX组（29 080.7±2 877.5）（P=0.042）。结论：大鼠海马CA1区内少突胶质细胞在抑郁症发病过程中可能起着重要作用,氟西汀治疗可防止抑郁症模型大鼠海马CA1区的CNPase+少突胶质细胞的丢失。本研究结果为探索新的抗抑郁策略提供了形态学基础。