屈洛昔芬对K562耐阿霉素细胞株耐药性的逆转作用(英文)

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对耐阿霉素(ADR)K562细胞株(K562/A02)多药耐药性(MDR)的逆转作用及逆转机制。方法:用DRO分别处理K562/A02和K562敏感株。MTT法观察DRO影响K562/A02对ADR化学敏感性的变化。DRO 10μmol/L处理K562/A02前后,通过RT-PCR和免疫细胞化学染色,分析MDR1、GSTπ基因表达的变化,采用流式细胞技术测定细胞内ADR浓度的变化。结果:DRO显著逆转K562/A02的MDR,在20、10和5μmol/L浓度时,对ADR的化学敏感性分别增加到14、13和4倍,逆转活性与维拉帕米相当。MDR1和GSTπ的mRNA和蛋白表达在DRO 10μmol/L处理后第2天开始下降,第5天明显降低。用20、10和5μmol/L浓度的DRO处理两株细胞,K562/A02细胞内ADR积累分别增加到2.9、2.3和1.5倍。但DRO不能明显增加K562细胞内的ADR的浓度。结论:DRO对K562/A02的MDR有较强的逆转活性,逆转强度与维拉帕米相当,其逆转机制有多种不同的途径。     

屈洛苷芬对K562耐阿霉素细胞株耐药性的逆转作用

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对耐阿霉素（ADR）K562细胞株（K562／A02)多药耐药性（MDR）的逆转作用及逆转机制。方法：用DRO分别处理K562／A02和K562敏感株。MTT法观察DRO影响K562／A02对ADR化学敏感性的变化。DRO 10μmol/L处理K562／A02前后,通过RT－PCR和免疫细胞化学染色,分析MDR1、GSTπ基因表达的变化,采用流式细胞技术测定细胞内ADR浓度的变化。结果：DRO显著逆转K562／A02的MDR,在20,10和5μmol/L浓度时,对ADR的化学敏感性分别增加到14、13和4倍,逆转活性与维拉帕米相当。MDR1和GSTπ的mRNA和蛋白表达在DRO 10μmol/L处理后第2天开始下降,第5天明显降低。用20、10和5μmol/L浓度的DRO处理两株细胞,K562／A02细胞内ADR积累分别增加到2．9、2．3和1．5倍。但DRO不能明显增加K562细胞内的ADR的浓度。结论：DRO对K562／A02的MDR有较强的逆转活性,逆转强度与维拉帕米相当,其逆转机制有多种不同的途径。     

环孢菌素A联合干扰素对白血病细胞株的多药耐药逆转的实验研究

目的：观察联合逆转剂对白血病细胞株多药耐药（MDR）的逆转作用，提高化疗的敏感性，方法：用环孢菌素A（CsA)和干扰素－α（INF-α）单独或联合逆转多药耐药细胞株K562／A02对柔红霉素（DNR）的耐药，药敏试验采用MTT法，同时用流式细胞仪检测逆转前后P糖蛋白（PgP)表达的变化及细胞内DNR浓度分布情况。结果：DNR对K562／A02及K562／S细胞的半数细胞抑制剂量（IC50）分别为7．3μg/ml和0．2μg/ml，CsA联合INF－α后明显增强DNR对K562／A02的细胞毒作用，IC60由7．3μg/ml降低到0．7μg/ml，而对K562／S细胞无影响，且逆转后细胞内DNR浓度明显增加，PgP表达无明显变化，结论：CsA和IFN－α联合能使白血病细胞株K562／A02对DNA的敏感性增加，具有逆转多药耐药的作用。     

姜黄素衍生物C15对白血病K562/A02细胞多药耐药的逆转作用

目的: 探讨姜黄素衍生物C15对人白血病K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MOR)的逆转作用及其作用机制。方法: 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)外排泵功能和细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达;P-gp-Glo^TM Assay System试剂盒检测P-gp ATP水解酶(ATPase)活性。结果: C15对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC₅₀)大于50 μmol·L^-1。对K562/A02细胞无明显细胞毒的浓度为2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1的C15逆转对K562/A02细胞对阿霉素(ADR)耐药的倍数分别为2.60,5.39,11.39,对长春新碱(vincristine, VCR)耐药的倍数分别为4.50,18.07,124.35,但是对非P-gp底物的化疗药物顺铂(cisplatin, CIS)和敏感细胞K562基本无逆转效果。2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1 C15可以增加耐药细胞K562/A02胞内罗丹明123(Rh-123)的蓄积量分别为1.93,2.30,2.47倍。C15增加阿霉素(adriamycin, ADR)在K562/A02细胞中的蓄积水平,降低P-gp介导的Rh-123外排速率。2.5,10.0 μmol·L^-1 C15与300 nmol·L^-1VCR联合作用后,可使K562/A02细胞的G2/M期比例从9.36%增加到67.57%和69.38%。C15对P-gp蛋白和ATPase的活性没有抑制作用。结论: C15可能是P-gp的非衣物型抑制剂,且具有逆转K562/A02细胞MDR的作用,该作用与其抑制细胞P-gp的外排泵功能有关。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的:研究中华眼镜蛇毒组分CⅡ(FCⅡNNAV)对多药耐药白血病细胞K562/A02的抑制作用及机制。方法:应用MTT法观察FCⅡNNAV体外对K562和K562/A02的毒性作用,流式细胞仪法观察FCⅡNNAV体外对K562/A02细胞Pgp,Bcl2蛋白表达的影响,比色法检测Caspase3活性变化。结果:FCⅡNNAV对耐药K562/A02及敏感K562细胞均有抑制作用,IC50分别为0.75±0.01μg·ml-1和0.67±0.11μg·ml-1。流式细胞仪检测发现FCⅡNNAV能使K562/A02细胞的Pgp,Bcl2蛋白表达明显下调;Caspase3活性明显增强。结论:FCⅡNNAV对细胞K562/A02及细胞K562均有较强的抑制作用,且抑制作用与剂量呈正相关,FCⅡNNAV可能通过抑制K562/A02细胞Pgp,Bcl2蛋白表达,激活Caspase3活性而诱导K562/A02细胞凋亡。     

木犀草素对白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制研究

目的 探究木犀草素（Lut）对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素（ADR）处理24 h后，采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后，采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用。取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组，采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化；RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达；谷胱甘肽（GSH）试剂盒检测细胞内GSH的含量。结果 与K562细胞相比，K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性，耐药倍数为53.69倍。与0μmol/L Lut相比，不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后，细胞生长均受到不同程度的抑制（P<0.05），其中2、4μmol/L Lu...     

半夏水提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的观察非细胞毒性浓度半夏水提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法采用MTT法测定半夏水提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏水提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白P170表达的变化.结果半夏水提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,非细胞毒性浓度半夏水提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的IC50,显著降低细胞膜糖蛋白P170的表达.结论半夏水提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.     

PHⅡ-7逆转肿瘤细胞K562/A02耐药机制的研究

目的阐明PHⅡ-7逆转肿瘤耐药的机制。方法用MTT法测定阿霉素、PHⅡ-7及二者联合用药对人白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562/A02的IC50值,提取不同浓度PHⅡ-7作用48h后K562和K562/A02细胞RNA,以实时定量PCR的方法分析PHⅡ-7对MDR1基因表达水平的影响,最后通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察PHⅡ-7作用前后,K562和K562/A02细胞内阿霉素浓度的改变。结果 PHⅡ-7本身具有抗肿瘤活性,对K562和K562/A02IC50值分别为(1.37±0.37)μmol·L-1;(1.48±0.34)μmol·L-1。此外PHⅡ-7还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,K562组CDI值为0.22,K562/A02组CDI值为0.09,其对耐药细胞的协同作用更为明显。阿霉素和PHⅡ-7同时作用于K562/A02,随着PHⅡ-7作用剂量的增加,K562/A02细胞MDR1基因表达水平逐渐下降;细胞内阿霉素浓度伴随PHⅡ-7作用时间的延长而逐渐提高。结论 PHⅡ-7不仅本身是有效的肿瘤细胞化疗药物,还具有下调MDR1耐药基因表达的作用,从而有效逆转K562/A02细胞的耐药现象,增强化疗药物阿霉素的细胞杀伤作用。     

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。     

川芎嗪脂质体对人白血病细胞株K562多药耐药逆转作用的研究

目的:研究川芎嗪脂质体在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用和对多药耐药的逆转作用,并研究脂质体剂型对上述作用的影响.方法:MTT法检测川芎嗪脂质体以及川芎嗪原料对照组、空白脂质体对照组对耐阿霉素的人白血病细胞株(K562/ADM)的细胞毒性和多药耐药逆转作用.结果:川芎嗪脂质体对K562/ADM有明显的细胞毒作用.非细胞毒性剂量(生长率≥95%)为2.0μg·ml-1,该浓度下可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为11.2倍.低毒剂量(生长率85～90%)为2.6μg·ml-1,抗药性逆转为178倍.2.0μg·ml-1的川芎嗪原料对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为7.9倍;同比稀释的空白脂质体对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为4.9倍.结论:川芎嗪脂质体体外对人白血病细胞K562/ADM有明显的细胞毒作用和MDR逆转作用;在一定浓度范围内川芎嗪脂质体的细胞毒性与逆转作用有剂量依赖性;脂质体本身对逆转有增效作用.     

苦瓜蛋白逆转K562／AO2细胞多药耐药性的研究

目的：研究非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对耐阿霉素的人红白血病细胞株K562／AO2多药耐药性的逆转作用和促凋亡作用。方法：采用CCK-8法测定苦瓜蛋白的细胞毒性及其对K562／AO2细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测K562／AO2细胞经不同药物处理后细胞的凋亡情况。结果：苦瓜蛋白对K562／AO2细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为5μg／mL,非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对K562／AO2细胞对阿霉素、长春新碱（VCR）和柔红霉素的耐药性都有部分逆转作用（分别为5．4、6．5和4．0倍）;5μg／mL苦瓜蛋白联合VCR诱导K562／AO2细胞凋亡,凋亡率为（19．38±1．06）％,而对照组为（1．64±0．27）％,单一苦瓜蛋白组为（3．79±0．82）％,单一VCR组为（9．83±0．98）％。结论：苦瓜蛋白能部分逆转人红白血病K562／AO2细胞对阿霉素、VCR和柔红霉素的耐药,一定剂量的苦瓜蛋白与VCR联合应用可增加肿瘤细胞凋亡率。     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

联合应用化疗药物对三氧化二砷耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的:探讨化疗药物联合应用对三氧化二砷(As2O3)耐药白血病细胞(K562/AS2)的毒性作用。方法:细胞毒实验采用MTT法,二药合用时细胞毒性作用采用ChouTalalay联合指数法分析,细胞表面P糖蛋白(Pgp)和细胞内柔红霉素(DNR)浓度测定采用流式细胞术测定。结果:K562/AS2细胞对三氧化二砷、柔红霉素、鬼臼乙叉苷(VP16)、三尖杉酯碱(H)、米托蒽醌(NVT)和阿糖胞苷(AraC)的耐药倍数分别为7.4、2.9、3.8、3.6、2.8和1.1。K562细胞和K562/AS2细胞的细胞表面Pgp或细胞内任意荧光强度无显著的统计学意义(P>0.05)。As2O3与DNR、VP16、H或NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和Pgp表达的白血病细胞(K562/A02)细胞的联合指数均大于1。异搏定与DNR联合应用时,对K562和K562/AS2细胞的联合指数均大于1,但是对K562/A02细胞的联合指数均小于1。结论:K562/AS2细胞对As2O3、DNR、VP16和NVT耐药,其机制与Pgp表达无关。异搏定联合应用DNR可以逆转K562/A02对DNR的耐药性,不能逆转DNR对As2O3耐药细胞的耐药性。As2O3与DN、VP16、H和NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和K562/A02细胞的毒性均为拮抗作用。     

五味子甲素对K562/ADR、HL60/ADR、MCF-7/ADR多药耐药逆转机制的研究

目的探讨五味子甲素(schizandrin A or deoxyschizan-drin,schA)对白血病细胞K562/ADR、HL60/ADR、乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法 MTT法检测schA对耐药细胞的逆转作用;流式细胞仪检测schA对细胞内柔红霉素、罗丹明-123含量和细胞表面P-gp表达水平的变化;用Real-time PCR方法检测schA对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达;生化检测法检测schA对细胞内GSH含量的变化。结果耐药逆转实验显示:不同浓度的schA对作用机制不同的化疗药物耐药产生不同的逆转效果;蓄积实验表明schA可增加柔红霉素、罗丹明123在耐药细胞内的蓄积,并且有良好的剂量依赖关系;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞24 h后,能降低P-gp蛋白和mdr1、mrp1基因的表达;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞4 h后,可降低细胞内谷胱甘肽含量。结论 schA对耐药机制不同的细胞株K562/ADR、HL60/ADR均有耐药逆转作用,推测可能是与抑制细胞表面的P-gp蛋白功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内谷胱甘肽含量有关,schA通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用。     

克班宁对耐药细胞K562/HHT逆转作用的研究

目的　对克班宁 (CRE)逆转白血病耐药细胞系K5 6 2 /HHT的耐药性进行研究。方法　细胞毒试验采用MTT法 ,细胞内柔红霉素 (DNR)积累采用荧光分光光度法测定。结果　克班宁 5 μmol·L-1时显著增加高三尖杉酯碱(HHT)对K5 6 2 /HHT的细胞毒 ,细胞毒作用增强 13 0倍 ,同等条件下 8μmol·L-1维拉帕米为 19 4倍。克班宁能显著增加K5 6 2 /HHT细胞内DNR浓度。结论　克班宁通过增加多药耐药细胞内药物积累而调节多药耐药性     

Sambutoxin sensitizes K562/ADR to adrimycin by inhibiting expression of P-glycoprotein

OBJECTIVE To investigate the reverse effects of sambutoxin, a representative derivative of 4-hydroxy-2-pyridone with antibacterial, antifungal and antitumor effects, on multidrug resistance(MDR) of K562/ADR cells to adriamycin(ADR) and to elucidate its potential molecular mechanism. METHODS We first investigated the dose-dependent cytotoxic effects of sambutoxin as single treatment on K562 and K562/ADR cells by MTT and CCK-8 assay in order to select the suitable dosage of sambutoxin in the combination treatment. The cytotoxicity of ADR combined with sambutoxin on K562 and K562/ADR cells were also determined by MTT and CCK-8 assays. Then, effects of sambutoxin on the intracellular accumulation of ADR in K562/ADR cells were determined using flow cytometry. The effect of sambutoxin on the efflux function and expression of P-gp in K562/ADR cells was evaluated by Rhodamine123(Rh123) accumulation assay and Western blotting assay respectively. 3 D interactions of human P-gp with sambutoxin, verapamil and adriamycin predicted by docking studies conducted using Sybyl2.1 sofware. Next, the effect of combination treatment of sambutoxin and ADR on the apoptosis of K562/ADR cells was determined by Hoechst 33342 nuclear staining. The expression of the apoptosis related proteins were detected by Western blotting assay. Effect of sambutoxin and ADR on reactive oxygen species(ROS) level in K562/ADR cells was evaluated detected by the DCFH-DA method using fluorescence microscopy and flow cytometry. Effect of sambutoxin and ADR on EGFR/MAPK and PI3 K/AKT/m TOR signaling pathways in K562/ADR cells was evaluated by Western blotting assay. RESULTS Sambutoxin treatment potently enhanced the susceptibility of K562/ADR cells to ADR in a dose manner and the reversal effect was much more prominent in K562/ADR cells. Sambutoxin increased the intracellular accumulation of ADR and Rh123 in K562/ADR cells. Sambutoxin inhibited protein expression of P-gp through Akt/NF-κB pathway in K562/ADR cells. Molecular docking display sambutoxin with P-gp(PDB code:6 QEX) formed two hydrogen bonds with GLN-725 and ASN-721, total Score was 8.29. Co-administration ADR with sambutoxin remarkably increased ADR-induced apoptosis through mitochondrial pathway, including down-regulation of anti-apoptotic protein Bcl-2, up-regulation of proapoptotic protein Bax, up-regulation of cleaved caspase3, and cleaved PARP, augmented ROS in K562/ADR cells. Moreover, ADR combined with sambutoxin could down-regulate the EGFR/MAPK and PI3 K/AKT/m TOR survival pathway in K562/ADR cells. CONCLUSION Sambutoxin reverses MDR of K562/ADR cells to ADR by downregulating P-gp expression and increasing ROS level, as well as, inducing apoptosis. These fundamental findings provide evidence for further clinical research in application of sambutoxin as an assistant agent for chemotherapy of cancer.     

阿霉素纳米粒对白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用

目的:研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用.方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果:阿霉素纳米粒和阿霉素对K562细胞细胞毒作用相似,K562/ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2.63倍,细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素.结论:阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药.     

青蒿琥酯抑制FOXP3基因对K562/ADR细胞增殖、 凋亡及多药耐药的影响

目的 探讨青蒿琥酯（Artesunate）抑制FOXP3基因表达对慢性髓系白血病（CML）耐阿霉素（ADR）细胞株 K562/ADR增殖、凋亡及多药耐药的影响,并探讨其作用机制。方法 实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测 FOXP3 mRNA在K562和K562/ADR细胞中的表达;蛋白印迹法（Western blot）检测FOXP3蛋白的表达;青蒿琥酯不同 质量浓度（2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 mg/L）处理K562/ADR细胞24 h,利用CCK-8法检测不同浓度青蒿琥酯对K562/ADR 细胞的细胞毒性,筛选无细胞毒性浓度的青蒿琥酯完成后续实验;RT-PCR法、Western blot法检测无细胞毒性浓度青 蒿琥酯处理下FOXP3 mRNA、FOXP3蛋白表达变化;CCK-8法检测ADR对细胞毒性的变化;流式细胞术（FCM）检测 ADR平均荧光强度,即蓄积浓度变化。结果 FOXP3基因在CML耐药细胞株K562/ADR中表达升高;无毒剂量浓度 青蒿琥酯（2.5、5.0、7.5 mg/L）处理下K562/ADR细胞FOXP3 mRNA、蛋白表达受抑制（P＜0.05）;K562/ADR细胞胞内 ADR毒性增强,浓度升高（P＜0.05）。结论 FOXP3基因在CML K562/ADR耐药细胞株中高表达;青蒿琥酯可以通过 抑制FOXP3基因表达,增加K562/ADR胞内ADR浓度,逆转多药耐药,且呈一定的剂量依赖性。