TNF-α增强主动脉平滑肌细胞内1型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达参与感染性休克的发生机制

目的研究TNF-α对主动脉平滑肌细胞（VSMC）内1型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP,RI）表达的影响,揭示TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克的发生机制。方法原代分离培养大鼠VSMC。按TNF-α处理的不同时间点（0、4、8、24h）分4组。分别应用Westernblot、免疫荧光、RT-PCR、双荧光素酶检测方法,观察TNF-α对IP,RImRNA、蛋白表达及其启动子活性的影响。结果TNF-α处理组细胞内IP。R1分布未见变化,8、24h组荧光强度增强提示IP,RI蛋白含量增加,IP,RI蛋白表达升高（4h：1．059±0．005v81．000±0．002,P：0．010;8h：2．4164-0．042VS1．000±0．002,P〈0．01;24h：2．138±0．010vs1．000±0．002,P〈0．01,n：9）,IP,RImRNA表达明显增加（4h：2．260±0．889vs1．00±0．02,P=0．193：8h：5．449±2．279VS1．00±0．02,P=0．000;24h：3．0494-1．684VS1．00±0．02,P=0．042,n=9）。转染PGL,PGL3-IP3RIpromoter质粒后TNF-α组IP3RI启动子活性明显增强（3．564-0．65vs1．00±0．05,P=0．020,n=9）。结论TNF-α可上调IP,RI基因启动子活性,从而引起IP3RI蛋白表达升高,增强VSMC内IP,Rs系统介导的Ca2＋释放作用,这可能是TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克血管调控的机制之一     

脓毒症大鼠有核细胞PPARγ活性变化对TNF-α及IL-4的影响

【目的】 观察大鼠脓毒血症时有核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)活性,血浆促炎介质TNF-α及抗炎介质IL-4的变化,探讨其关系。【方法】 雄性SPF级SD大鼠90只,体质量280 ~ 300 g,随机分为正常对照组,假手术组,脓毒血症组,每组再分12 h,24 h,48 h三亚组,每组10只,采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作大鼠脓毒血症模型,ELASA方法测定有核细胞的PPARγ活性及血浆中IL-4的水平变化趋势。【结果】 脓毒血症组大鼠血浆促炎介质TNF-α与正常对照组和假手术组相比升高明显,分别为(162 ± 32 vs 31 ± 7, 32 ± 8) pg/mL,随时间延长有上升趋势,在术后24 h达高峰,后逐渐下降,但仍然处于较高水平状态,抗炎介质IL-4水平也明显较正常对照组和假手术组升高(分别为89 ± 25 vs 41 ± 7, 41 ± 7) pg/mL,并呈持续性升高(70 ± 5, 75 ± 8, 122 ± 11) pg/mL,存在促炎和抗炎平衡失调?脓毒血症组大鼠有核细胞PPARγ活性与正常对照组和假手术组相比明显降低,分别为(0.263 ± 0.017, vs 0.292 ± 0.005, 0.294 ± 0.007)并随病情加重而逐渐下降?脓毒血症组大鼠有核细胞PPARγ活性与血浆促炎介质TNF-α水平呈负相关, r = -0.655,P = 0.040。【结论】 脓毒血症大鼠存在炎症-抗炎系统失衡,有核细胞PPARγ活性下降,且与血浆促炎介质TNF-α呈负相关。     

重症急性胰腺炎大鼠肝损伤机制及褪黑素保护

目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝组织核因子κB表达活性与肝脏损伤的关系,探讨褪黑素(Mel)在大鼠急性胰腺炎肝脏损伤中的保护作用.方法 SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎(SAP)组,Mel干预(Mel)组及假手术(Sham)组,各32只.分别于造模成功后4、12、24、48 h处死大鼠,各时点各组8只.血样检测血清淀粉酶及丙氨酸氨基转移酶(ALT),ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)α的含量,免疫组化evision二步法检测肝脏组织核因子κB的表达,缺口末端标记技术(TUNEL法)检测肝脏细胞凋亡情况,留取肝组织苏木精咿红染色下观察肝组织病理变化.结果 4 h点Sham组、SAP组、Mel组TNF-α表达量差异均无统计学意义(pg/ml:161±9、166±14、161±4、均P>0.05),SAP组淀粉酶、ALT、TNF-α表达量和核因子κB活性及肝细胞凋亡指数各时点均高于Sham组(均P<0.05),并随着时间推移逐渐升高,于24 h达高峰(24 h点SAP组和Sham组核因子κB活性和肝细胞凋亡指数分别为62.8±4.4 vs 7.8±0.6,22.33±2.43 vs 0.81±0.16,均P<0.05),此时肝组织病理损伤以肝细胞凋亡为主;至48 h,SAP组核因子κB活性和肝细胞凋亡指数(30.5±2.1、11.67±0.55)较24 h有所下降,而血清TNF-α、淀粉酶及ALT的含量[(342±10)pg/ml、(3357±117)U/L、(574±32)U/L]仍继续升高,同时肝组织病理出现大片出血坏死及炎细胞浸润.Mel组上述指标各时间点均低于SAP组(均P<0.05),但高于Sham组(均P<0.05);Mel组相应各时点病理损伤亦较SAP组轻.结论 肝组织核因子κB的活化介导了重症急性胰腺炎肝脏损伤.Mel可抑制核因子κB活性和TNF-α表达,减轻了肝细胞凋亡和坏死,减轻了急性胰腺炎的肝脏损伤.     

高容量血液滤过对MODS猪肺TNF-α和 IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨高容量血液滤过(HVHF)后多器官功能障碍综合征(MODS)猪肺组织TNF-α、IL-8 mRNA表达水平的变化及意义.方法:雄性家猪25只,随机分为模型组(n=9)、滤过组(n=10)、对照组(n=6),前二组采用二次打击法建立MODS模型,滤过组采用HVHF治疗3d,对照组不作处理.测定各器官功能相关指标,实时荧光定量RT-PCR技术定量法检测肺组织TNF-α、IL-8 mRNA表达水平.结果:滤过组滤过后各器官功能有关指标水平均有不同程度的改善,器官衰竭发生率、动物病死率较模型组明显降低(20.0% vs 88.9%,20.0% vs 77.8%,P<0.05);滤过组TNF-α mRNA、IL-8 mRNA表达水平较模型组明显降低[(0.1042±0.0158) vs (0.1235±0.0188),P＜0.01;(0.1458 0.0199) vs (0.1991±0.0519),P＜0.05].结论:HVHF早期应用可以降低创伤引起的肺组织TNF-α和 IL-8 mRNA表达,表达水平与肺损伤的程度和肺衰竭发生率相关;同时可减少肺损伤,减少肺衰竭的发生.     

普鲁泊福对TNF-α诱导的小鼠脊髓神经元凋亡及Bax表达的影响

目的:研究普鲁泊福(propofol)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的小鼠脊髓神经元凋亡及Bax表达的影响.方法:脊髓神经元取自小鼠胎鼠,置于含B27的神经细胞培养基中培养,在培养第7天随机分为6组:对照组,50 μmol/L普鲁泊福组,TNF-α组,25 μmol/L普鲁泊福 TNF-α组,50 μmol/L普鲁泊福 TNF-α组,100 μmol/L普鲁泊福 TNF-α组.在相应组中加入不同终浓度的普鲁泊福,孵育30 min,再加入TNF-α至终末浓度为2 000 U/ml,培养24 h后,采用碘化丙锭(PI)/Hoechst33342双染法检测细胞凋亡,于荧光显微镜下观察凋亡细胞.采用免疫细胞化学的方法检测Bax的表达.结果:与对照组相比,TNF-α组细胞凋亡百分率明显升高[(21.8±1.1)% vs (2.8±0.8)%,P<0.01],Bax表达明显增加[(0.251±0.016) vs (0.141±0.015),P<0.01];而经不同浓度普鲁泊福(25,50,100 μmol/L)处理后再加入TNF-α的各组与TNF-α组相比,细胞凋亡百分率下降[(16.2±1.2)%、(15.3±0.6)%、(12.2±0.8)% vs (21.8±1.1)%,P<0.05、P<0.05、P<0.01],Bax的表达降低[(0.198±0.011)、(0.188±0.012)、(0.167±0.014) vs (0.251±0.016),P均<0.05],且呈现一定的剂量效应关系.结论:临床浓度的普鲁泊福可能通过调节Bax的表达进而抑制由TNF-α诱导的脊髓神经元凋亡.     

TNF-α激活NF-κB信号通路抑制培养成纤维细胞SDF-1α分泌

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活核因子-κB(NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响。方法小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养,将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组,处理后的细胞采用CCK-8方法检测细胞增殖情况、Western blot和细胞免疫荧光检测IκBα蛋白表达与定位、ELISA检测基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的分泌。结果 TNF-α在一定浓度范围内对成纤维细胞起到明显的促增殖作用,CCK-8检测显示TNF-α组在不同浓度和不同时相点MEF的光密度值与TNF-α+PDTC组及对照组相比差异显著(P<0.05);免疫荧光染色显示IκBα主要分布于细胞质,TNF-α组与对照组和TNF-α+PDTC组相比,IκBα荧光强度明显减弱。Western blot结果发现TNF-α刺激后30 min,TNF-α组和TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达[(3 070.0±39.0)vs(1 421.7±75.3),(3 212.2±57.5)vs(1 468.2±45.8),P<0.05]均降至最低值,随时间推移逐渐恢复,TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达显著高于TNF-α组[(3 112.3±89.7)vs(2 610.4±26.9),P<0.05];ELISA检测发现TNF-α作用后成纤维细胞SDF-1α的分泌呈减少趋势[(15.9±1.6)vs(12.7±0.6),P<0.05],TNF-α+PDTC组则能显著逆转TNF-α作用[(23.5±3.2)vs(15.0±1.2),(21.6±0.4)vs(12.7±0.6),P<0.05],促进SDF-1α分泌。结论 TNF-α能通过激活NF-κB通路,影响小鼠胚胎成纤维细胞的增殖并抑制SDF-1α分泌。     

曲格列酮对肿瘤坏死因子α诱导肾小球系膜细胞的作用及其机制

目的：探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小球系膜细胞增殖的影响及机制。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白组,TNF-α组、TNF-α+曲格列酮组,MTT法检测各组系膜细胞的增殖情况,ELISA法测定各组系膜细胞上清液中细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达,免疫组化法测定各组系膜细胞核因子κB (NF-κB)的表达情况。结果 TNFα组肾小球系膜细胞6 h、12 h、24 h和48 h增殖的OD值分别为(0.198±0.025)、(0.241±0.028)、(0.286±0.030)、(0.267±0.042),空白组分别为(0.159±0.021)、(0.161±0.019)、(0.164±0.023)、(0.170±0.020),TTNF-α+曲格列酮组分别为(0.187±0.023)、(0.184±0.017)、(0.172±0.018)、(0.168±0.026),TNF-α组肾小球系膜细胞增殖的OD值明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率为(62.34±10.26)%,空白组为(29.97±4.88)%,TNF-α+曲格列酮组为(45.67±8.36)%,TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率明显高于空白组,而TNF-α+曲格列酮组则明显低于TNF a组,高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度为(967.8±77.4) pg/mL,空白组为(571.2±69.6) pg/mL,TNFα+曲格列酮组为(787.5±81.2) pg/mL,TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,但仍高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进肾小球系膜细胞增殖,促进NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达,曲格列酮能够抑制肾小球系膜细胞增殖,降低NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达。     

定位大鼠下丘脑视上核方法的改良

目的 改良大鼠立体定向斜向穿刺法.方法 取18只SD大鼠,随机分为实验组(斜穿刺组)和对照组(垂直穿刺组).实验组从左侧偏转与矢状面成20°角进行斜穿刺,对照组从垂直方向穿刺视上核,比较两组手术时间、并发症发生情况以及死亡率.结果 斜穿刺组核团定位时间长于垂直穿刺组(59.55±3.64 s vs 27.44±2.18 s,P=0.000).术后24 h死亡斜穿刺组率低于垂直穿刺组(0 vs 44.4％,P=0.082).术中上矢状窦破裂率斜穿刺组率低于垂直穿刺组(11.1％ vs 88.9％,P=0.003).开颅后止血时间(52.89±24.05 s vs 157.44±38.19 s,P=0.000)、穿刺后止血时间(24.33±10.60 s vs 133.89±28.81 s,P=0.000)、手术完成时间(178.89±35.22 s vs 362.44±66.52 s,P=0.000)均少于垂直组.结论 改良后定位视上核的方法操作简单,稳定性和重复性好,能够根据不同实验需求有效地避开脑内重要血管以及核团,也为不同实验操作者提供更多手术路径,值得在动物实验中推广.     

人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠TNF-α、MCP-1表达的影响

目的 观察人参皂甙Rg1对糖尿病肾病大鼠尿蛋白以及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、人参皂甙Rg1治疗组、厄贝沙坦(ARB)治疗组.采用链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型.于动物处死前1 d测血糖,用代谢笼收集24 h尿液,记录尿量行24 h尿蛋白定量和肾功检查.光镜及电镜观察肾组织的病理变化.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血MCP-1、血及肾TNF-α水平;免疫组织化学检测肾脏组织MCP-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测肾脏组织中MCP-1、TNF-α基因水平的表达.结果 模型组大鼠镜下见肾小球体积增大,基底膜增厚及系膜物质增多,足细胞较正常对照组减少(P<0.01).两治疗组与模型组分别比较,肾小球基底膜未见明显增宽,足细胞数增加(P<0.05).两治疗组之间无明显差异.模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白、血肌酐水平升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).两治疗组与模型组相比,血糖水平无明显变化(P>0.05),但24 h尿蛋白、血肌酐水平均有所改善(P<0.05).免疫组织化学、ELISA和real-time PCR结果表明,与对照组相比,模型组MCP-1、TNF-α的表达增加(P<0.05),两治疗组MCP-1、TNF-α表达较模型组减少(P<0.05),但两治疗组无明显差异.相关性分析提示MCP-1、TNF-α水平与24 h尿蛋白水平(r=0.7802,0.6963)、肾小球硬化指数(r=0.8296,0.7413)、足细胞基底膜厚度(r=0.7678,0.6701)成正相关(P<0.05).结论 人参皂甙Rg1能降低TNF-α、MCP-1的水平,改善糖尿病肾病大鼠足细胞及肾脏的病理损害,能显著减少糖尿病大鼠24 h尿蛋白,具有一定的肾保护作用.     

小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨小于扰RNA(siRNA)抑制核因子κB(NF-κB)信号通路对细菌脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒(siRNA病毒组)及乱序(Scramble)对照序列逆转录病毒质粒(Scramble病毒组).用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-α mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量.结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平(0.97±0.02,0.89±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.01±0.03,0.97±0.01,均P＜0.05);LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平(0.95±0.04,0.94±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.07±0.06,1.03±0.05,均P＜0.05).LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-α mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(0.92±0.02比0.98 ±-0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P＜0.05).LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组(均P＜0.01).结论 针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值.     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。