靛玉红衍生物结构与抗肿瘤活性关系预测方程的建立

目的：建立一个方程,用于预测靛玉红衍生物（主要为靛玉红-3′-肟类）的体外抗肿瘤活性。方法：采用经典的二维定量构效关系研究方法,对24个靛玉红衍生物进行计算机模拟与统计分析。结果：得到靛玉红衍生物体外抗肿瘤活性的定量构效方程,且发现,该类靛玉红衍生物的活性与脂水分配系数、偶极矩、总电荷绝对值和最大负电荷呈负相关,与分子体积呈正相关。结论：所得方程能有效预测该类靛玉红衍生物的活性,且对其类似物的设计与改造具有指导意义。     

抗白血病药物靛玉红以及靛蓝和异靛蓝衍生物的合成

靛玉红是我国用于临床治疗慢性粒细胞白血病的一个药物⁽¹⁾。前报⁽²⁾已报道了N_1′取代靛玉红衍生物的合成。为了研究靛玉红分子内氢键(N₁取代)和两个吲哚环连接位置对于抗肿瘤活性的影响。我们合成了N₁-取代和双取代的靛玉红衍生物(Ⅰ₁,Ⅰ₂,Ⅰ₃)和六个靛蓝、异靛蓝衍生物(Ⅱ_1～3,Ⅲ_1～3)。其中,N-乙基靛蓝和N-甲基或乙基异靛蓝都对Walker癌肉癌256具有抑制作用,而它们的母体化合物则没有抗肿瘤活性。N₁-取代的靛玉红(Ⅰ_1～2)无活性,但N,N′-双甲基靛玉红确又有一定的抗肿瘤活性。     

抗白血病药物靛玉红的N1′-取代物的合成

为提高靛玉红在体内的吸收及其治疗白血病的疗效,从增加化合物的溶解度着手,设计合成了16个N₁′,-取代的靛玉红衍生物。N₁′,的取代增加了化合物的脂溶性。4个衍生物(Ⅲ,Ⅳ,Ⅻ和ⅩⅤ)对大鼠瓦氏癌肉瘤的抑制率在与靛玉红等克分子剂量下较母体的高。在同一实验中化合物Ⅲ的抑制率为58%,而靛玉红为30.8%。     

靛玉红对ATP引起的巨噬细胞吞噬抑制、 ROS产生和细胞死亡的影响

为研究靛玉红对ATP引起的巨噬细胞免疫反应的影响, 采用中性红摄入法检测细胞吞噬功能, 用MTT法检测细胞活力, 通过DHE探针检测ROS的产生。结果表明: 细胞外ATP可抑制巨噬细胞吞噬、导致细胞死亡并促进ROS产生, 靛玉红对ATP引起的以上免疫反应有抑制作用。为了解靛玉红的作用机制, 进一步研究其对ATP引起的 [Ca²⁺]_i 升高和P2X7受体介导的膜通透性增加的影响。结果显示: 靛玉红可降低ATP引起的 [Ca²⁺]_i 升高, 抑制ATP诱发的EB进入。结果提示, 靛玉红对P2X7的活化有阻断作用, 其对ATP引起的免疫反应的抑制效果可能是通过抑制P2X7受体实现的。     

靛玉红及其乙基和十八烷基衍生物在动物体内命运的比较

N₁′-乙基靛玉红(79002)对动物移植性肿瘤的抗癌活性优于靛玉红;而N₁′-十八烷基靛玉红(79005)则较靛玉红差。本文比较了³H-靛玉红及³H-79002和³H-79005在小鼠及大鼠的体内命运。结果表明,³H-79002吸收最易,瘤内放射性最高,组织内存留时间较长;而³H-79005吸收最难,给药后以胃肠分布的放射性最高,组织内存留时间最短。这些结果表明三者体内过程的差别与其抗癌活性的差别相一致。     

靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的探讨靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞增值和凋亡的影响。方法分别用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法检测细胞抑制率;用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24h后收集样品,采用流式细胞术法检测细胞周期及其凋亡率。结果 MTT法测定靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞的增殖具有抑制作用,且表现出剂量和时间的依赖性,随着浓度升高时间加长,抑制明显(P<0.01)。流式细胞术测定也表明靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞有诱导凋亡的作用,凋亡随着靛玉红甲肟浓度的增大不断地增加。细胞形态学方面也可观察出细胞随着靛玉红甲肟剂量和时间的增大而逐渐出现越来越多的凋亡,细胞核染色质深染,聚集于核膜下呈新月形,细胞膜突起呈小泡样,小泡脱落形成含核小体片段的凋亡小体。结论靛玉红甲肟确实可以诱导HepG2细胞凋亡,但靛玉红甲肟对肝癌细胞作用机制还不明确,需要作进一步的深入研究。     

Box-Behnken响应面法优化青黛炮制条件

目的 利用Box-Behnken响应面法优化青黛炮制参数。方法 分别以靛蓝、靛玉红产率为响应值,在单因素试验基础上,采用响应面试验设计方法优化青黛炮制条件。用Expert Design 8.0.6软件分析数据。结果 由回归模型预测的定向生成靛玉红的最佳条件为物料比1：10,盐酸浓度3%,通O₃时间73 s,提取温度79℃,提取时间33 min;在此条件下得到的靛玉红产率为0.758 mg·g^-1。由回归模型预测的定向生成靛蓝的最佳条件为物料比1：10,盐酸浓度3.4%,提取温度79℃,提取时间33 min;在此条件下得到的靛蓝产率为2.07 mg·g^-1。结论 本实验系统优化了定向生成靛玉红、靛蓝的青黛炮制条件,提高了青黛品质。     

抗白血病药物靛玉红的N_(1′)-取代物的合成

为提高靛玉红在体内的吸收及其治疗白血病的疗效,从增加化合物的溶解度着手,设计合成了16个N_1′,-取代的靛玉红衍生物。N_1′,的取代增加了化合物的脂溶性。4个衍生物(Ⅲ,Ⅳ,Ⅻ和ⅩⅤ)对大鼠瓦氏癌肉瘤的抑制率在与靛玉红等克分子剂量下较母体的高。在同一实验中化合物Ⅲ的抑制率为58%,而靛玉红为30.8%。     

HPLC同时测定五福化毒丸中靛蓝、靛玉红和甘草酸的含量

目的 建立同时测定五福化毒丸中靛蓝、靛玉红和甘草酸含量的高效液相色谱法。方法 采用Eclipse XDB-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.2 mol·L^-1乙酸铵-冰醋酸(65∶35∶1),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为288,250 nm,柱温：25 ℃。结果 靛蓝、靛玉红和甘草酸依次在2.501~25.01,0.633~6.330,5.10~51.02 μg·mL^-1内与峰面积呈良好线性关系,相关系数r分别为1.000 0,0.999 5,1.000 0,加样回收率(n=9)分别为98.3%,98.4%和98.2%。结论 本方法简便,准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

5′-碘靛玉红的抗肿瘤作用

5′-碘靛玉红是靛玉红苯环5′位碘取代的衍生物。对大、小鼠急性毒性试验表明,未见与靛玉红有明显差异。对大鼠W256的实验治疗表明,二药等克分子剂量(2mM/kg)或等剂量(800mg/kg)灌胃,本品的抑瘤率为57～72％(P<0.01),靛玉红为30～34％(P<0.05),二者有显著差异。本品的ID_(50)为490±32.9mg/kg,CI大于10;而靛玉红的抑瘤率低于50％。本品还能明显延长L7212小鼠的存活时间41～73％(P<0.01);而靛玉红无活性。P388瘤细胞体外试验表明,二药均能抑制~3H-TdR参入瘤细胞的DNA,但本品的IC_(50)明显低于靛玉红,分别为6.4和17.0μg/ml。以上结果证明了,5′-碘靛玉红的抗癌活性比靛玉红高。     

蚯蚓蛋白对NIH3T3细胞的促进增殖作用研究

目的探讨蚯蚓蛋白(EFP)对NIH3T3细胞的促进增殖作用。方法 MTT法测定EFP对大鼠成纤维细胞(NIH3T3)的促进增殖作用;细胞划痕法测定EFP促进NIH3T3细胞划痕创面愈合作用;测定NIH3T3细胞培养液中胶原降解产物羟脯氨酸的含量。结果 EFP具有促进NIH3T3细胞的增殖作用,促进划痕创面愈合作用,增加了NIH3T3细胞培养液中羟脯氨酸的含量。结论 EFP具有促进NIH3T3细胞增殖和划痕创面愈合作用。     

Synthesis of tritium labelled (R) and (S)-3-aminoquinuclidine: A ubiquitous component of serotonin receptor ligands,part II

(S)-3-Aminoquinuclidine-³H 10c-S having a specific activity of 66 Ci/mmol was prepared in eight steps from Isonicotinic acid ( 2 ). Reduction of 2 with carrier free tritium gas over PtO₂ in DMF gave isonipecotic acid-³H 3c . Conversion to α-bromo ketone 5c followed by cyclization afforded 3-quinuclidone-³H 6c . Racemic 3-aminoquinuclidine-³H 8c was prepared by conversion of 6c to oxime 7c followed by reduction with NaBH₄/NiCl₂·6H₂O. Racemic 8c was resolved with (R)-methylbenzyl isocyanate. Hydrolysis of 9c-S.R afforded (S)-3-aminoquinuclidine-³H 10c-S . The enantiopurity was >99.5% (S).     

双位酶免疫法测定NT-3cDNA-CHO细胞上清中rNT-3含量

目的：定量测定ＮＴ－３ｃＤＮＡ／ＣＨＯ细胞增减上清中基因重组ＮＴ－３的含量。方法：利用的ＮｏＡｂ,建立了双位ＥＩＡ法。结果：该法检测限为５．０ｐｇ／ｍｌ,批内差的系数为６．２％～１１．４％（ｎ＝６）,批间差变异系数为５．４％～８．２％（ｎ＝６）。４株阳性细胞增减上清中有高水平的目的产物。结论：该ＥＩＡ法简单准确;用该法成功筛选到一最高表达基因重组ＮＴ－３的单克隆细胞株。     

Synthesis of 1,4-dihydropyridine carboxylic acids (III)

2,6-Dimethyl-4-(3′-nitrophenyl)-3-methoxylaminocarbonyl-1,4-dihydropyridine-5-carboxylic acid methylester,3b reacted with 2-cyanoethanol or benzylalcohol to give the corresponding cyanoethylurethane compound6c in 40.6% yield and benzylurethane compound6d in 32% yield. The cyanoethylurethane6c was hydrolized in ethanolic NaOH to give 2,6-dimethyl-4-(3′-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridine-3-amino-5-carboxylic acid 5-methyl ester. HCl8 in 64.8% yield. Another acid hydrolysis of benzylurethane6d gave 2,6-dimethyl-4-(3′-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridine-3-amino-5-carboxylic acid 5-methylester. HBr11 in 54.7% yield.     

DDPH 衍生物α1-受体拮抗活性三维定量构效关系的研究

目的和方法应用计算机模拟Apex3D软件研究DDPH及其衍生物拮抗α1受体活性的三维定量构效关系。结果结果表明芳氧烷胺结构中芳环邻、对位取代对生物活性有重要影响。结论我们所构建的药效团和三维定量构效关系方程不仅能帮助理解药物与受体的相互作用,而且为设计活性更好的新化合物提供参考。     

2-脱氧-L-核糖重要中间体2-脱氧-α-1，3，4-O-苯甲酰-L-阿拉伯吡喃糖的合成工艺改进

目的合成2-脱氧-L-核糖的重要中间体2-脱氧-α-1，3，4-O-苯甲酰-L-阿拉伯吡喃糖。方法以L-厂阿拉伯糖为起始原料，经酰化、溴化、氢化三步反应合成目标化合物。结果改进后总收率由文献的30％提高到41．2％。其结构经质谱、氢谱测试确证。结论该工艺与文献相比操作简便，易于工业化大生产，收率高。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Reh细胞增殖及RUNX3基因甲基化状态的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对白血病细胞系Reh细胞增殖抑制作用及对RUNX3基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨Reh细胞RUNX3基因的失活机制及EGCG对RUNX3基因表达的调控。方法:体外培养Reh细胞,用5、10、15和20μg/mL EGCG与Reh细胞孵育,采用MTT法检测EGCG对Reh细胞增殖活性的影响;采用流式细胞术检测EGCG对Reh细胞凋亡的影响;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测RUNX3基因启动子区域的甲基化情况;采用RT-PCR、Western blot法分别检测RUNX3 mRNA、蛋白的表达。结果:EGCG对Reh细胞生长有明显的抑制作用,并有时间及剂量依赖性;EGCG可促进Reh细胞发生凋亡,随着EGCG浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;MSP法结果显示EGCG处理后RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生去甲基化,EGCG能够诱导Reh细胞RUNX3基因mRNA和蛋白的重新表达,具剂量依赖性。结论:EGCG可明显抑制Reh细胞的增殖,并诱导Reh细胞中异常甲基化的RUNX3基因去甲基化,使RUNX3基因恢复表达,这可能是其抗肿瘤的重要机制。     

高速逆流色谱分离纯化远志中3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A

目的研究制备型高速逆流色谱从远志中分离纯化3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A。方法采用分析型高速逆流色谱摸索制备型高速逆流色谱的分离条件。根据化合物的光谱数据,鉴定结构。结果选择乙酸乙酯-正丁醇-水（4：1：5,v/v/v）为制备型高速逆流色谱分离的溶剂系统,从400mg远志样品中得到3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A分别为24.6mg和45.2mg,HPLC检测纯度分别为93%和95%。结论本法简单快速,为远志及同属植物中糖酯类化合物的制备提供了一种新的分离方法 。     

Effect of earthworm active protein on fibroblast proliferation and its mechanism

Context: Earthworms have been used as a traditional medicine in China from thousands of years. In recent years, research has demonstrated that earthworm extracts might promote wound healing; however, its mechanism is still unknown.

Objective: The study investigates the mechanism and effects of earthworm active protein (EAP), on mouse embryonic fibroblast (NIH/3T3) proliferation.

Materials and methods: The effects of earthworm active protein (EAP) in different concentrations (0, 25, 50, 100, 150, and 200?μg/mL) on NIH3T3 cell were detected by the MTT and Brdu incorporation assay (50, 100, and 150 μg/mL). The effects of EAP (37.5, 75, and 150?μg/mL) on the cell cycle were detected by flow cytometry. The cell signaling pathways of EAP-promoting NIH3T3 cell proliferation were studied by the MTT and Western blot by using different signaling pathway inhibitors.

Results: The results showed that EAP (50, 100, and 150 μg/mL) could promote NIH3T3 fibroblasts proliferation (36.4 ± 4.4%, 59.1 ± 4.9%, and 71.5 ± 5.7%). The mechanism of EAP promoting NIH3T3 cell proliferation should be as follows: EAP elevated cyclin D1 expression by activating MEK/ERK signaling pathway, and then promoted cell cycle from G1 to S phase, finally caused the proliferation of NIH3T3 cell. PI3K signaling pathway may be the upstream of MEK/ERK signaling pathway.

Discussion and conclusion: The study demonstrates that EAP is effective in promoting effects on proliferation and migration activity of NIH3T3 cell, and the proliferation activity of EAP on NIH3T3 cell may be achieved through the PI3K→Rac→PAK→MEK signaling pathway.     

PI3K-Akt-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响

目的研究PI3K-Akt-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响。方法将SPF级昆明系小鼠60只随机分为对照组(A)和实验组(B、C、D),B、C、D三组分别灌胃雷帕霉素0.2、0.4、0.6 mg.d-1,A组每天予以无菌水灌胃,共3周。3周后,无菌条件下心脏采血,EDTA抗凝,分离脾脏,制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞水平(CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分比),RT-PCR检测小鼠脾细胞Foxp3mRNA的表达,免疫组织化学SP法染色观察小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的变化,并利用计算机图像分析技术测量各实验组及对照组中p-mTOR蛋白表达的平均光密度。结果 Foxp3 mRNA在实验组(B、C、D)小鼠脾脏中表达的程度分别为(0.4853±0.0574、0.7886±0.1085、0.9639±0.2015),明显高于对照组A(0.1345±0.0271)(P<0.05);实验组(B、C、D)小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的平均光密度分别为(0.2326±0.0431、0.1156±0.0223、0.0556±0.0041),明显低于对照组A(0.4223±0.0534)(P<0.05);两指标经pearson相关分析,小鼠脾脏中Foxp3mRNA的表达与p-mTOR蛋白表达呈负相关。结论抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路会促使Foxp3的表达增强;PI3K-Akt-mTOR信号通路的激活程度与Foxp3的表达程度呈负相关。