地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株P15~(INK4B)及甲基化转移酶表达的影响

目的探讨地西他滨(DAC)和三氧化二砷(As_2O_3)对肝癌SMMC-7721细胞株P15~(INK4B)抑癌基因及甲基化转移酶表达的影响。方法 MTT方法检测地西他滨和三氧化二砷对SMMC-7721细胞株的抑制率。RT-PCR方法检测P15~(INK4B)、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达。结果 2.0mmol/LDAC和2.0μmol/L As_2O_3联用,肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖抑制率均较4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组增强[(72h:(69.9±1.2)%比(33.8±0.7)%、(47.9±2.5)%,P0.05)]。地西他滨和As_2O_3作用细胞72h后P15~(INK4B)抑癌基因表达增强,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[(0.74±0.14)比(0.57±0.15)、(0.56±0.11),P0.05];甲基化转移酶表达水平下调,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[DNMT3A:(0.28±0.11)比(0.36±0.13)、(0.41±0.13),P0.05;DNMT3B:(0.32±0.13)比(0.39±0.12)、(0.45±0.16),P0.05;DNMT1:(0.31±0.15)比(0.44±0.19)、(0.44±0.12),P0.05]。结论地西他滨和三氧化二砷可能通过抑制肝癌SMMC-7721细胞株甲基化转移酶,增加P15~(INK4B)基因表达来抑制肝癌细胞增殖。     

地西他滨对淋巴瘤细胞株Raji中P15INK4B基因的去甲基化作用

目的 探讨Burkitt淋巴瘤细胞系Raji中P15INK4B基因甲基化状态,地西他滨对Raji细胞P15INK4B基因去甲基化作用及生长增殖的生物学影响。方法 用不同浓度地西他滨作用淋巴瘤细胞株Raji,用台酚蓝拒染法研究药物对Raji细胞生长曲线的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用聚合酶链反应(RT PCR)检测P15INK4B表达,用甲基化特异PCR(MSP) 方法检测P15INK4B 基因的甲基化程度。结果 地西他滨对Raji细胞有生长抑制作用,作用后细胞凋亡增加,P15INK4B基因表达增加,地西他滨使其甲基化程度下降。结论 在Raji细胞中P15INK4B高度基因甲基化,并且表达下降,地西他滨通过去甲基化抑制淋巴瘤增殖。     

地西他滨联合全反式维甲酸对SKM-1 MDS细胞株的体外研究

目的:探讨去甲基化制剂地西他滨和全反式维甲酸对MDS-RAEB细胞株SKM-1的体外影响及其机制。方法:SKM-1细胞经药物处理后,用台酚蓝拒染法观察SKM-1细胞生长曲线的变化;用硝基四氮唑蓝还原试验和流式细胞术观察药物对SKM-1细胞的诱导分化作用;用Annexin Ⅴ-FITC标记了解细胞的早期凋亡;用RT-PCR研究细胞DNMT3A和P15INK4B基因表达的变化。结果:地西他滨和ATRA抑制SKM-1细胞生长,增强SKM-1细胞的还原能力,增加细胞表面CD14、CD11b表达,促进细胞凋亡,两药联合应用具有协同作用;地西他滨可使SKM-1细胞P15INK4B mRNA表达增加,DNMT3A mRNA表达减少。结论:地西他滨和ATRA均可以促进SKM-1细胞凋亡和分化,二者有协同作用;地西他滨的作用可能与DNMT3A和P15INK4B基因表达有关。     

尿多酸肽对高危组骨髓增生异常综合征细胞株p15INK4B基因的去甲基化作用

目的探讨尿多酸肽(CDA-2)对高危组骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株p15INK4B基因的去甲基化作用。方法检测不同浓度CDA-2作用下,MDS-RAEB细胞株MuTz-1的细胞存活率(MTT法);p15INK4B基因、甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达(RT-PCR);p15INK4B基因甲基化程度(甲基化特异PCR,MSP)。结果CDA-2呈剂量依赖性抑制MuTz-1细胞生长;伴随CDA-2剂量增加,p15INK4B基因甲基化程度逐渐减弱,其mRNA表达逐渐增加;且CDA-2可显著降低MuTz-1细胞中DNMT1和DNMT3BmRNA的表达。结论CDA-2可能通过下调DNMT1和DNMT3BmRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降,恢复其在细胞周期中的调节作用,进而抑制MDS细胞的过度增殖。     

索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B基因表达的影响

目的:探讨索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及其调控DNMT3B基因表达可能的分子 机制.方法:单独及联合给药后以MTT法测定SMMC-7721的增殖,Transwell检测其侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法观 察DNMT3B、p-Akt-Ser473及ERK蛋白的表达.结果:索拉非尼、5-Aza-CdR对肝癌SMMC-7721细胞半数抑制浓度(IC50)分别为11、6 μmol/L,联合用药选取(6+4)μmol/L作为后续用药浓 度.与对照组比较单药及联合用药均能抑制细胞侵袭、促进细胞凋亡、减少p-Akt-Ser473和DNMT3B蛋白的表达(P<0.05~P<0.01).结论:索拉非尼和5-Aza-CdR联合用药能有效降低索拉非尼用药浓度,降低肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B蛋白表达水平.     

槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC-7721的研究

目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC-7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用;半定量RT—PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。RT—PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度,发现0.100mg／mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后,P53 mRNA表达的相对强度增高（P〈0．01）。结论：擗寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。     

甘草次酸选择性抑制肝癌细胞的增殖

目的探讨甘草次酸对增殖速率不同的4株肝癌细胞SMMC-7721,SK-HEP1,HEPG2,HEP3B体外增殖的抑制作用及其 机制。方法通过MTT法测定肝癌SMMC-7721,SK-HEP1,HEPG2和HEP3B细胞株体外生长曲线;用梯度浓度甘草次酸（5、 10、20、30、40、60 μmol/L）分别刺激48 h后,MTT法检测甘草次酸对4种肝癌细胞株体外生长的影响,Western blot实验考察其对 4种肝癌细胞株总ERK蛋白,磷酸化ERK蛋白和拓扑异构酶Ⅱα蛋白表达的影响。结果4株肝癌细胞中SMMC-7721细胞增殖 速率最慢,而SK-HEP1 细胞增殖速率最快;甘草次酸刺激48 h 能浓度依赖性地抑制4 种肝癌细胞的生长,其中对慢增殖细胞 SMMC-7721 细胞抑制作用最强（IC50为28.04 μmol/L）;细胞内ERK的磷酸化,拓扑异构酶Ⅱα的表达与细胞增殖速率呈正相 关,SMMC-7721 细胞拓扑异构酶Ⅱα与p-ERK蛋白的表达在4 株细胞中最低,SK-HEP1 细胞表达最高。与阴性对照组相比, 50 μmol/L的甘草次酸可显著抑制4株细胞内拓扑异构酶Ⅱα与p-ERK蛋白的表达（P<0.05）,而25 μmol/L的甘草次酸可显著下 调SMMC-7721,HEPG2和HEP3B细胞拓扑异构酶Ⅱα与p-ERK蛋白（P<0.05）而对SK-HEP1细胞没有作用。结论甘草次酸 对不同肝癌细胞生长的抑制作用有选择性。其中对慢增殖肝癌的治疗具有较好的抑制效果。下调拓扑异构酶Ⅱα的表达与抑 制ERK通路的激活可能为其作用机制之一。     

丹皮酚诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨丹皮酚诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡作用及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)法检测丹皮酚的增殖抑制作用;Hoechst-33258染色法、DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡;逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测抑癌基因PTEN、致癌基因Akt mRNA表达水平。结果:丹皮酚在3.13~200.00 mg.L-1剂量之间均能抑制SMMC-7721的增殖;丹皮酚处理SMMC-7721后,光镜下可见明显的凋亡细胞;Hoches-33258染色、DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT-PCR检测示丹皮酚可使PTEN mRNA表达升高,Akt1、Akt2 mRNA表达下降。结论:丹皮酚能显著抑制SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过抑制PI3K通路来实现的。     

miR-143调控DNMT3B表达对肝细胞癌耐阿霉素敏感性的影响

目的:构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,探讨miR-143在调控肝细胞癌耐阿霉素中的作用机制。方法:采用逐步递增阿霉素浓度法构建耐阿霉素细胞株SMMC-7721/ADM,评估其IC₅₀值;采用荧光定量PCR技术检测miR-143、DNA甲基转移酶3B （DNMT3B）、多耐药基因1（MDR1）变化、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;Western blotting检测DNMT3B蛋白表达;通过转染miR-143 mimics上调耐药细胞株SMMC-7721/ADM中miR-143表达水平后,检测耐药细胞IC₅₀、侵袭能力、细胞凋亡、DNMT3B、MDR1变化。应用脂质体-2000瞬时转染miR-143 mimics于耐药细胞株,观察上述指标变化。结果:成功构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,IC₅₀值升高78.97倍（P<0.01）,miR-143表达量降低,DNMT3B、MDR1、Bax、Bcl-2表达量升高（P<0.05~P<0.01）。转染miR-143 mimics后耐药细胞株IC₅₀值降低57%,侵袭能力下降,细胞凋亡增加,DNMT3B表达减少,MDR1 mRNA表达减少（P<0.01）。结论:miR-143可能通过降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞侵袭性的体外研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,为As2O3用于原发性肝癌的治疗提供实验依据。方法：以0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育24、48和72h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察As2O3对细胞生长的影响;应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察As2O3对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果：应用As2O3处理后人肝癌SMMC-7721细胞生长受到抑制,且有时间-浓度依赖性;同时肝癌细胞过膜细胞数减少,侵袭能力受到抑制。结论：As2O3在体外能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和侵袭能力,且有浓度依赖性。     

三氧化二砷在肿瘤治疗中的应用

三氧化二砷是中药砒霜的主要成分,它被作为药物使用已经有2000多年的历史,最初的应用是治疗梅毒、肺结核等;从20世纪70年代在治疗复发性和难治性急性早幼粒细胞性白血病(APL)中取得较好疗效后,其药用价值开始受到了人们的关注,本世纪初,美国的FDA 批准三氧化二砷用于治疗APL、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS).自此国内外掀起了研究三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制的热潮,并进行了大量实验,本文就其在抗肿瘤方面的研究进展作一综述.     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的滑膜B型细胞(成纤维细胞样细胞)是增殖滑膜的增殖细胞,表达c-myc基因。本项实验研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)是否影响体外培养的RA滑膜B型细胞的增殖及c-myc基因表达。方法分离、培养RA滑膜B型细胞;用含As2O3浓度分别为2μmol/L和5μmol/L的培养液,分别作用于培养细胞24h和48h;采用流式细胞仪测定细胞死亡情况;采用流式细胞仪测定c-myc蛋白水平。结果2μmol/L As2O3和5μmol/L As2O3作用于RA滑膜B型细胞24h均可使死亡细胞百分率增加,2μmol/L As2O3致细胞死亡率高于5μmol/L As2O3致细胞死亡率,而48h死亡细胞百分率较24h减少,;5μmol/L As2O3作用于细胞48h促进RA滑膜B型细胞增殖,并使c-myc蛋白水平增高。结论As2O3依据作用时间和浓度的不同既可诱导RA滑膜B型细胞死亡,又可促进RA滑膜B型细胞增殖,并上调c-myc基因表达。     

三氧化二砷对心肌细胞的毒性及其机制的探讨

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对H9c2心肌细胞株凋亡的诱导及其机制.方法 H9c2细胞培养,不同浓度As2O3干预后,采用MTT、AO/EB染色法、CaspACE检测系统观察细胞存活率、形态并检测凋亡.结果 As2O3(2～10 μmol/L)使H9c2心肌细胞株活力下降;AO/EB染色法观察可见细胞凋亡的特征形态;Caspase-3阻断剂AcDEVD-CHO可以阻断As2O3诱导的凋亡.结论 As2O3诱导的H9c2心肌细胞株凋亡,Caspase-3的激活是其所致凋亡的机制之一.     

三氧化二砷抗肝癌血管新生作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液抗肝癌血管新生的作用及其相关机制。方法:采用MTT法、透射电镜观察、免疫组化、鸡胚尿囊膜(CAM)血管形成实验等方法,观察As2O3注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长、超微结构、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达以及对CAM血管形成的影响。结果:As2O3能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变;As2O3对SMMC-7721细胞和ECV304细胞VEGF、EGFR的表达均有抑制作用;As2O3能抑制CAM血管形成。结论:As2O3注射液具有显著抗肝癌血管新生作用,其机制与抑制血管内皮细胞生长、诱导血管内皮细胞凋亡、调控肿瘤血管新生相关因子VEGF和EGFR的表达密切相关。     

三氧化二砷对小鼠恶性黑素瘤抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As₂O₃)对小鼠B₁₆细胞实体瘤的生长抑制作用及对端粒酶活性表达的影响,旨在为临床治疗黑素瘤提供理论和实验依据。方法:以不同浓度As₂O₃作用的鼠黑素瘤B₁₆细胞荷瘤小鼠,用TRAP-PAGE-银染法检测药物作用后瘤体组织端粒酶活性的表达;通过测定荷瘤小鼠瘤体大小和肿瘤组织内微血管密度来反映不同剂量As₂O₃的抑瘤作用。结果:As₂O₃能抑制鼠B₁₆细胞实体瘤的生长,破坏肿瘤组织微血管的形成(P<0.01);As₂O₃能明显抑制鼠B₁₆细胞实体瘤端粒酶的活性。结论:As₂O₃对于B₁₆细胞实体瘤的生长有显著的抑制作用,这可能与其抑制肿瘤组织内微血管的形成和端粒酶表达活性有关。     

三氧化二砷抗实体肿瘤的研究概况

三氧化二砷(As2O3)临床治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)有极好的疗效，在此基础上国内外开展了将其应用于实体瘤的研究。初步结果显示，As203对肝癌、食管癌、胃癌等消化系统肿瘤有明显的治疗作用；对宫颈癌、卵巢癌、膀肮癌等泌尿生殖系统肿瘤，以及肺癌、乳腺癌、前列腺癌等其他肿瘤，也显示了抑制细胞增殖并诱导凋亡的作用，本文对此进行了综述。     

正交设计优化三氧化二砷纳米粒的制备工艺

目的 制备三氧化二砷纳米粒,并通过正交实验对其处方因素进行优化.方法 以聚乳酸/羟基乙酸共聚物[Poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]为载体材料,利用溶剂转移法制备三氧化二砷纳米粒,将粒径分布、载药量、包封率作为优化指标,通过正交实验优化处方,得到制备三氧化二砷纳米粒的条件和工艺.结果 ...     

As2O3及联合紫杉醇对胃癌MGC803细胞的生长和耐药性的影响

目的研究三氧化二砷及联合紫杉醇对胃癌细胞株MGC803的生长和耐药性变化。方法MTT法观察MGC803细胞的生长变化;免疫组化检测p—gP,bcl-2蛋白的表达;电镜观察超微结构变化。结果随着As20,或联合紫杉醇作用时间的延长,对肿瘤细胞的抑制率逐渐增强,除0．5μmol／LAs,0,作用外,其余各组随药物浓度的升高,其抑制率就越高,与对照组比较有明显差别（P〈0．05）,且同-As2O3浓度下联合用药对肿瘤细胞的抑制作用均强于单一用药（P〈0．05）;免疫组化分析显示As2O3或联合用药能同时下调P—gp和bcl-2蛋白;电镜下肿瘤细胞出现凋亡改变,并伴有坏死。结论三氧化二砷对人胃癌MGC803细胞具有明显的抑制作用．同时能够通过下调p＇gp,bcl-2蛋白的表达,并且与紫杉醇具有协同作用,延缓耐药性的发生。     

三氧化二砷在肺癌治疗中的研究进展

肺癌是当今发病率及死亡率极高的恶性肿瘤之一,日益威胁着人类的健康。化疗效果不理想,寻求新的化疗药物,或者提高肺癌对化疗药物的敏感性,是目前研究的热点之一。三氧化二砷是中药砒霜的主要成分,主要通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导细胞凋亡发挥抗癌作用,并且具有逆转肿瘤细胞对化疗药物耐药的作用,近来引起了国人对其抗肿瘤作用的重视。因其在祖国医学中应用已久,具有安全、相对低毒的特点,有望成为新的高效、低毒的抗癌药物。     

三氧化二砷临床应用的毒副反应及护理

目的对三氧化二砷(As2O3)临床应用的毒副反应进行观察和护理。方法对16例急性早幼粒细胞性白血病(APL)患者进行三氧化二砷治疗,治疗前后对患者体重、皮肤、神经、消化、呼吸、心血管、血液、泌尿等方面进行观察,注意血尿常规、肝肾功能的变化情况,与治疗前进行对比。结果本组患者在治疗过程中,大多出现了不同程度的不良反应,但程度均较轻,一般无需停药,给予适当支持治疗和护理后症状缓解,继续治疗。结论治疗剂量的注射液不良反应多为轻度,针对其不良反应进行对症护理,同时加强相关的健康指导,可保证化疗的顺利完成。