p38蛋白激酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞活化中的作用

目的探讨p38蛋白激酶在脂多糖(LPS)刺激肺泡巨噬细胞激活机制中的作用.方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组、LPS刺激组、SB203580干预组(SB203580 LPS组).分别采用免疫组织化学和原位分子杂交方法检测p38蛋白质及其mRNA的表达,用放射免疫分析法检测细胞培养上清TNF-α、IL-8的含量.结果LPS刺激肺泡巨噬细胞p38胞核染色阳性细胞百分比、胞浆p38mRNA的表达以及培养上清TNF-α、IL-8含量显著升高,分别为正常对照组的5.75倍、1.44倍、3.57倍和3.22倍;加入SB203580预处理后,上述指标均较LPS刺激组显著下降,较正常对照组稍高,但差异无显著性.肺泡巨噬细胞p38蛋白质胞核染色阳性细胞百分比及其mRNA的表达与培养上清TNF-α、IL-8含量均呈显著正相关.结论LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子可能是通过p38蛋白激酶介导的,抑制p38的活性可能成为治疗炎症反应的一条新途径.     

ERK1／2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

 【目的】研究瘦素（1epfin）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PM）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响，以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs，按瘦素不同浓度和，或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α水平。用蛋白印迹（Westem blot）方法测定细胞内p-ERK1／2、p-p38，以及p-JNK的表达水平，用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α，在瘦素质量浓度为75ng／mL时TNF-α表达至峰值，是对照组的6．6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路，瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2．3、2．4和2．6倍。ERK1／2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1／2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α mRNA增加，两者的联合作用可以强烈抑制TNF-α mRNA的表达，而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1／2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。     

ERK1／2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

【目的】研究瘦素（1epfin）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PM）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响,以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs,按瘦素不同浓度和,或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α水平。用蛋白印迹（Westem blot）方法测定细胞内p-ERK1／2、p-p38,以及p-JNK的表达水平,用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α,在瘦素质量浓度为75ng／mL时TNF-α表达至峰值,是对照组的6．6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路,瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2．3、2．4和2．6倍。ERK1／2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1／2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α mRNA增加,两者的联合作用可以强烈抑制TNF-α mRNA的表达,而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1／2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在丙泊酚器官保护中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在对细胞外刺激因素进行应答时发挥着重要作用,介导多种细胞行为的变化。其中,p38信号通路是MAPK家族中关键通路之一,其介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。丙泊酚除具有麻醉作用外,还可作用于一些MAPK,包括细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK,从而发挥抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗凋亡等积极作用。该文通过总结p38MAPK信号通路在丙泊酚对器官保护中所发挥的作用,为丙泊酚的临床器官保护作用机制提供一种新的研究思路。     

高糖环境下cGAS-STING通路在巨噬细胞活化中的作用

目的 探讨高糖环境下cGAS-STING通路在巨噬细胞活化及炎性反应中的作用。方法 免疫组织化学及免疫荧光双染法检测糖尿病肾病(DN)患者肾脏M1型巨噬细胞及STING的表达及定位。体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,分为:①正常对照组(NG组):培养基葡萄糖浓度为5.5mmol/L;②高糖组(HG组):葡萄糖浓度为30mmol/L; ③HG+C-176组:加入STING抑制剂C-176(1μmol/L);④NG+C-176 组。培养24h,流式细胞术检测M1型及M2型巨噬细胞比例;Western blot法检测cGAS、STING及p-p65 NF-κB表达量;RT-PCR检测细胞cGAS、STING、p-p65 NF-κB及TNF-α、IL-1β的表达量。结果 DN患者肾脏CD86⁺ M1型巨噬细胞明显浸润、STING表达量增加,二者存在共定位。流式细胞术结果表明,与NG组比较,HG组M1型巨噬细胞比例明显增加(P<0.05);Western blot法检测及RT-PCR结果表明,HG组cGAS、STING、p-p65 NF-κB的蛋白及mRNA表达量均明显高于NG组(P<0.05),TNF-α、IL-1β的mRNA水平也显著高于NG组(P<0.05)。STING抑制剂C-176可明显抑制HG组M1型巨噬细胞活化及STING、p-p65 NF-κB、TNF-α,IL-1β的表达(P < 0.05)。结论高糖环境下,巨噬细胞cGAS-STING信号通路被激活、该通路可进一步介导M1型巨噬细胞活化、促进下游炎性反应。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在溃疡性结肠炎中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在溃疡性结肠炎(UC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用。 方法 ①7只Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、DSS结肠炎组、p38MAPK选择性抑制剂SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日饮用5% DSS溶液,干预组小鼠则在饮用5% DSS溶液72 h后,加用SB203580[1 mg/(kg·d)]进行腹腔注射。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数(DAI);7 d后处死小鼠,观察各组小鼠肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。②收集36例活动性UC患者的肠黏膜组织标本,并以18例结肠癌旁的正常组织标本作对照,通过体外组织培养,观察SB203580对UC患者肠黏膜活检组织中TNF-α和IL-1β表达的影响。 结果 ①DSS结肠炎小鼠的DAI评分、肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P均<0.01),经SB203580干预后,其DAI评分、TNF-α、IL-1β的水平均明显降低,但仍然高于正常对照组(P均<0.01)。②体外组织培养结果显示,与未用SB203580处理的UC组比较,SB203580处理后UC患者肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.01)。 结论 SB203580能阻断p38MAPK信号转导通路,从而降低促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的释放。     

中医药与p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路研究

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路广泛存在于哺乳动物细胞中,与机体多种生理病理过程(如糖尿病,心血管疾病,脑发育等)密切相关,是20世纪90年代以来生命科学研究的热点。MAPK分为4个家族,即细胞外调节激酶、c-jun氨基末端激酶、p38和大丝裂原活化蛋白激酶1/细胞外调节激酶5。综述近几年来从p38 MAPK信号通路角度进行的中医药研究,提示从细胞信号转导角度进行中医药研究有着十分广阔的发展前景。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对胰岛素作用的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用,p38MAPK作为其成员之一,可以调节细胞的多种生物学反应,在2型糖尿病胰岛素分泌和胰岛素抵抗发病机制中有重要的作用。p38δ-蛋白激酶D通路综合调节胰岛素分泌能力和胰腺β细胞的存活,p38 MAPK信号通路通过炎性因子、游离脂肪酸、氧化应激等对脂肪、骨骼肌作用,参与胰岛素抵抗。     

乙醇通过激活JNK和p38K引起成神经瘤细胞死亡

目的研究乙醇引起SK-N-SH成神经瘤细胞损伤的机制。方法采用MTT法检测细胞死亡率。DNA片段分析法、DAPI核染色及caspase-3活性分析检测细胞凋亡。免疫印迹分析JNK和p38K的表达。结果乙醇引起SK-N-SH细胞死亡率增加,该作用呈剂量依赖性。乙醇引起细胞发生凋亡样变化,表现为caspase-3激活、核DNA断裂及核碎裂。乙醇引起细胞死亡的机制部分与激活JNK和p38K通路有关。结论乙醇通过激活JNK和p38K通路引起SK-N-SH成神经瘤细胞死亡。     

免疫复合物抑制B淋巴细胞内Toll样受体9激活的JNK和p38通路

目的 观察B细胞内免疫复合物(immune complex, IC)抑制TLR9激动剂(CpG ODN)诱导的CD40和CD80高表达的信号转导通路。方法 给小鼠腹腔注射CpG ODN和IC后,利用磁珠法分选小鼠脾脏CD19+ B细胞,流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测B细胞表面CD40和CD80的表达。磁珠法分选野生型和FcγRIIb缺陷小鼠脾脏B细胞,体外用CpG ODN和/或IC刺激后,蛋白质印迹法检测细胞内相关蛋白激酶的磷酸化情况。用JNK和p38信号转导抑制剂作用后,FCM检测CpG ODN活化B细胞表面CD40和CD80的表达。 结果 体内实验发现IC抑制CpG ODN活化B细胞表面CD40和CD80的表达。IC抑制B细胞内CpG ODN诱导的JNK和p38的磷酸化,但不能抑制FcγRIIb缺陷小鼠B细胞内JNK和p38的磷酸化。使用JNK和p38抑制剂后,CpG ODN活化B细胞表面CD40和CD80的表达下调。 结论 B细胞内IC通过抑制JNK和p38通路从而抑制TLR9激动剂诱导的CD40和CD80表达。     

氧化铜纳米颗粒经p38和ERK信号通路诱导巨噬细胞自噬性损伤

目的：分析氧化铜纳米颗粒（copper oxide nanoparticles,CuONPs）对Raw264.7巨噬细胞自噬的影响,并探讨调节自噬的相关信号通路。方法：用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）观察CuONPs的形态特征;利用Raw264.7巨噬细胞进行体外实验;不同浓度梯度的CuONPs处理巨噬细胞24 h,用MTS法检测细胞活力;TEM观察自噬小体的形成情况;自噬小体报告质粒GFP-LC3瞬时转染细胞,激光共聚焦显微镜观察CuONPs处理前后Raw264.7细胞胞质中GFP-LC3蛋白绿色点状聚集情况;利用Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达情况及相关的p38和ERK信号通路磷酸化水平。结果：CuONPs可显著抑制Raw264.7细胞活力,并呈一定的剂量依赖关系（F=35.987,P=0.000）;TEM结果显示,CuONPs颗粒沉积于自噬体;激光共聚焦结果表明GFP-LC3转染细胞后,CuONPs处理组GFP-LC3点状聚集明显多于对照组,此外Western blot结果显示LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平明显呈剂量依赖性上升（F=156.585,P=0.000）,上述结果说明CuONPs能促进巨噬细胞中自噬小体的生成;而且Western blot结果表明10 μg/mL的CuONPs处理细胞,能明显上调p-p38、p-ERK蛋白水平,并呈现时间依赖性升高（p-p38：F=72.899,P=0.000;p-ERK：F=123.300,P=0.000）。结论：CuONPs能抑制细胞活力,并诱导巨噬细胞自噬活化,并且p38和ERK通路可能参与了自噬的分子调控。     

JNK/SAPK和p38信号转导通路在高渗透压介导的兔髓核细胞凋亡中的作用

 目的 观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法 根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinases,P-p38 MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK, P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果 高渗透压［600 mOsm/kg H2O(mOsm)］可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600 mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而阻断组凋亡细胞明显减少;而400 mOsm时各刺激组和阻断组凋亡细胞与对照组相比差异均无统计学意义;免疫荧光结果显示P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK在髓核细胞质和细胞核中均有表达;经高渗透压(600 mOsm)刺激后P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著高于对照组(P<0.01),而相应阻断组P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著降低。结论 高渗透压通过激活JNK/SAPK和p38信号转导通路导致体外培养的兔髓核细胞凋亡,同时髓核细胞对轻度的渗透压升高具有一定的适应性。     

Rapid activation of JNK and p38 by glucocorticoids in primary cultured hippocampal cells

Rapid activation of JNK and p38 and their translocation to the cell nucleus by glucocorticoids, corticosterone （Cort）, and bovine serum-conjugated corticosterone （Cort-BSA） were studied in primary cultured hippocampal cells by using immunobloting and immunofluorescence confocal microscopy. The rapid activation occurred 5 rain after stimulation and was maintained at plateau for as long as 2 4 hr; i. e. ,     

Rapid activation of JNK and p38 by glucocorticoids in primary cultured hippocampal cells

Rapid activation of JNK and p38 and their translocation to the cell nucleus by glucocorticoids, corticosterone （Cort）, and bovine serum-conjugated corticosterone （Cort-BSA） were studied in primary cultured hippocampal cells by using immunoblotting and immunofluorescence confocal microscopy. The rapid activation occurred 5 min after stimulation and was maintained at plateau for as long as 2-4 hr; i. e. , the response persisted for 2 hr after washing out the 15-min application of Cort-BSA. The activation occurred at a minimal concentration of 10-9 M for Cort and 10-8 M for Cort-BSA. GDPbetaS blocked the activation, but RU38486, a nuclear glucocorticoid receptor antagonist, could not block the activation, indicating the involvement of the membrane-delineated receptor in this reaction. The protein kinase C （PKC） inhibitor Go6976 blocked the response, whereas the protein kinase A inhibitor H89 could not, implying the involvement of PKC in the intracellular signal transduction pathway. The nongenomic nature of the responses and the transduction pathway and the significance of persistent action and biological significance are discussed.     

CTGF诱导的人胚肺成纤维细胞转分化中PI3K/Akt与p38MAPK磷酸化的关系

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的活动状态以及相关性的研究.方法 将体外培养的HFL-I分成4组:(1)CTGF处理组(20 ng/ml);(2) LY294002(10 μmol/L)预处理60min,再行CTGF刺激(20 ng/ml):(3)SB203580 (10 μmol/L)预处理60 min,再行CTGF刺激(20 ng/ml); (4)LY294002(10 μmol/L)和SB203580(10 μmol/L)联合作用60 min,再加入CTGF(20 ng/ml).选取不同时相点,Western blot测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p-Akt和Akt的蛋白表达:RT-PCR检测PI3K和p38MAPKmRNA表达.结果 与对照组相比,CTGF诱导15 min后p-Akt水平升高,30 min时达至顶峰(P＜0.01).CTGF诱导24h后α-SMA表达显著升高(P＜0.01),可被LY294002阻断.LY294002和SB203580单独或联合预处理后,显著抑制CTGF诱导的p-Akt活化(P＜0.01).结论 CTGF诱导的成纤维细胞-肌成纤维细胞转分化中有PI3K/Akt通路的激活,PI3K和p38MAPK均可以调节Akt的活性,其特异性抑制剂均可阻断Akt的磷酸化.     

火针对类风湿性关节炎大鼠踝关节JNK、p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 观察火针对类风湿性关节炎（RA）模型大鼠踝关节c-junN末端激酶（c-jun N-terminal kinease,JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）表达的影响,探讨火针治疗RA的作用机制。方法 采用雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、火针组、药物（甲氨蝶呤,MTX）组,每组各10只。模型组、火针组、药物组大鼠分别给予建立佐剂性关节炎模型,正常组不造模。火针组点刺腰部夹脊穴和阿是穴,共治疗2次。分别于实验第1、2、4、6、8天检测大鼠右后足足跖肿胀度。实验第9天取血测大鼠血清TNF-α和IL-1β,取踝关节滑膜组织做关节组织病理学切片观察及局部滑膜组织蛋白JNK、p38的免疫组化,Western blot法测定局部滑膜组织JNK、p38的蛋白表达的影响。结果 实验第2天,模型组、火针组、药物组足跖肿胀度均与正常组有明显差异(P<0.01),实验第8天,火针组的足跖肿胀度明显低于模型组 (P<0.05);模型组大鼠血清TNF-α和IL-1β（P<0.05）含量高于正常组,滑膜细胞增生及炎性细胞浸润明显增多,而火针组、药物组较模型组血清TNF-α和IL-1β（P<0.05）含量有降低,滑膜细胞增生及炎性细胞浸润减少;与正常组比较,模型组大鼠局部滑膜组织JNK、p38的表达均有所升高（P<0.05～0.01）,与模型组比较,火针组、药物组JNK水平均表现为明显下降（P<0.05）,这种改变在相应的免疫组化镜下图片中均有所体现。结论 火针治疗可以有效地调节丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号系统中JNK、p38蛋白活性的表达,降低MAPK活性,这可能是火针治疗RA起效的作用机制之一。      

致癫痫大鼠海马中JNK/p38信号转导通路的激活及其作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)和p38通路在癫痫持续状态(SE)大鼠海马中的活性变化规律及其意义.方法 建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,在不同时间点用免疫组化法检测海马结构JNK和p38磷酸化状态,并观察组织病理学改变.结果 对照组P-JNK极少活化而p38在海马各结构广泛活化.SE 30 min后JNK和p38在海马神经元强烈激活,2 h时达到高峰,6 h后各区均明显减少,12 h后降至基础水平,在所有时间点,JNK和p38在齿状回的活化程度均显著高于CA1和CA3区.海马结构各区可见到许多神经元发生变性和坏死.结论 JNK和p38信号转导通路在氯化锂-匹罗卡品致痫过程中被激活,并可能在发作后参与海马神经元损伤的病理生理过程.