新跨膜蛋白非转移性黑色素瘤糖蛋白B在肾癌组织中的表达及意义

目的：探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B（glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,GPNMB）在肾癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用组织芯片、免疫组织化学方法检测GPNMB在75例不同阶段肾癌及对应癌旁正常组织中的相对表达量,分析其表达量与肾癌患者年龄、性别、临床分期及病理分级的相关性;利用Western blot法检测GPNMB在肾癌组织及对应癌旁正常组织的表达情况。结果：GPNMB在肾癌组织表达水平低于癌旁正常肾组织,差异具有统计学意义（P=0.022）;Western blot结果显示,GPNMB在肾癌组织表达下调。结论：GPNMB在肾癌组织表达降低,可能参与肾癌的发生、发展及转归。     

白血病细胞中Beta-Arrestin1与EZH2分子结合研究

目的：检测急性淋巴细胞白血病细胞（acute lymphoblastic leukemia,ALL）CCRF-CEM和Raji细胞中Beta-抑制蛋白1（Beta-Arrestin1）与Zeste增强子同源物-2蛋白（enhancer of Zeste homolog 2,EZH2）是否存在结合。方法：白血病细胞中,Western blot检测Beta-Arrestin1与EZH2表达水平,激光共聚焦（Confocal）检测 Beta-Arrestin1与EZH2在细胞中的位置与共定位;免疫共沉淀（CO-IP）检测Beta-Arrestin1与EZH2结合能力。结果：Beta-Arrestin1与EZH2在白血病K562、CCRF-CEM和Raji细胞中均有表达。激光共聚焦结果显示Beta-Arrestin1与EZH2均在K562、CCRF-CEM和Raji细胞内共定位,CO-IP结果显示在K562,CCRF-CEM和Raji细胞中Beta-Arrestin1与EZH2结合。结论：在CCRF-CEM和Raji中,Beta-Arrestin1可与EZH2结合。     

猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因片段的合成和真核表达

目的获得猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因,并分析其表达特性。方法利用基因合成的方法合成B病毒gB蛋白胞外区的基因片段,经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体。将构建的pEGFP-N3-GB合重组质粒转染到293细胞。提取蛋白用Western blot检测其在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦分析在细胞内的表达定位。结果 pEGFP-N3-GB合重组质粒能在293细胞内正常表达,并且在细胞膜上表达。结论利用真核表达系统,可以产生B病毒gB蛋白的特异性抗原重组蛋白,且在细胞膜上表达。     

RBM7在乳腺癌细胞BT474中的表达及其与P21的关系

目的：探索RNA结合蛋白7（RNA binding protein 7，RBM7）在人源性乳腺癌细胞BT474中的过表达及干扰后的表达改变，并研究其与P21之间的关系。方法：在人源性乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒（实验组）和相应对照慢病毒（对照组），从而构建稳定转染的细胞株，用qRT?PCR和Western blot实验分别验证转染后的RBM7的表达情况。用CCK?8实验、流式细胞周期实验分别评估RBM7表达改变后对乳腺癌细胞增殖能力和细胞周期分布的影响。通过qRT?PCR和Western blot实验观察BT474细胞中RBM7表达改变后对P21表达的影响。进一步通过RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验来研究RBM7与P21之间的关系。结果：在乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒48 h后，通过荧光显微镜检测细胞的绿色荧光表达情况；经嘌呤霉素稳定筛选后，获得RBM7过表达及干扰的稳转细胞株。CCK?8和流式细胞周期实验显示，过表达RBM7后可促进乳腺癌细胞的增殖，而干扰RBM7后能抑制乳腺癌细胞的增殖。qRT?PCR和Western blot实验显示，过表达RBM7能下调P21的mRNA（P < 0.05）及蛋白的表达，干扰RBM7能上调P21的mRNA（P < 0.05）及蛋白的表达。RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验显示，RBM7能直接结合P21的mRNA从而发挥其对P21的调节作用。结论：RBM7在人乳腺癌细胞BT474中通过结合P21的mRNA从而下调P21的表达。     

胃癌及癌前病变中的细胞凋亡与Bcl-2蛋白、P糖蛋白的表达及相关性研究

目的：探讨胃癌及癌前病变中细胞凋亡及Bcl-2蛋白与P糖蛋白（P－glycoprotein,P-gp)表达的变化规律及相互关系。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)介导的dUTP缺口原位末端标记法（TUNEL）与免疫组织化学S－P法，分别检测细胞凋亡指数（Apoptotic Index,AI)及Bcl-2蛋白和P糖蛋白的表达。结果：AI和Bcl-2蛋白，P－gp的表达在30例慢性浅表性胃炎（CSG），11例慢性萎缩性胃炎（CAG），12例重度肠上皮化生（IM）三种吵的比较差异无显著性（P＞0．05），而在12例IM，13例中重度不典型增生（Dys),32例胃癌（GC）三组中的比较差异有显著性（P＜0．05），AI依次减少，Bcl-2蛋白与P－糖蛋白表达依次增加，AI与Bcl-2蛋白，P糖蛋白表达呈负相关（P＜0．05），Bcl-2蛋白与P糖蛋白呈正相关（P＜0．05），结论：癌前病变转化为胃癌与细胞凋亡与Bcl-2蛋白，P－gp的表达变化有关，同时P－gp,Bcl-2蛋白具有抗凋亡，耐药的双重作用，P－gp与Bcl-2蛋白可能存在协同作用。     

Bmi⁃1通过下调NF⁃κB信号通路防治小鼠萎缩性胃炎

目的：明确Bmi?1是否有防治萎缩性胃炎的作用及其机制。方法：针对7周龄Bmi?1基因缺失（Bmi?1 knock out,BKO）纯合子小鼠和同窝野生型（wild type,WT）小鼠,利用组织学切片、免疫组织化学和 Western blot比较分析胃的表型差异。结果：与WT小鼠相比,BKO小鼠表现为胃壁变薄、腺体萎缩和炎症浸润的萎缩性胃炎表型。免疫组化结果显示白细胞介素6（interleukin 6,IL?6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF?α）阳性细胞面积和核因子?κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）阳性细胞数明显增加;Western blot 结果显示IL?6、TNF?α和NF?κB?p65蛋白表达水平明显升高。结论：在小鼠中,Bmi?1可通过下调NF?κB信号通路防治萎缩性胃炎。     

S100钙结合蛋白A16在胃癌转移中的作用和机制

目的：研究S100钙结合蛋白A16（S100 calcium binding protein A16,S100A16）对胃癌细胞迁移的影响及其分子机制。方法：慢病毒感染构建稳定过表达S100A16的胃癌细胞株SGC?7901和MGC?803;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞的迁移能力;SGC?7901细胞通过脂质体转染S100A16 siRNA,Western blot检测E?钙黏蛋白和波形蛋白;免疫共沉淀检测S100A16和闭合小环蛋白2（zonula occludens 2,ZO?2）的结合情况;免疫荧光观察S100A16和ZO?2在胃癌细胞中的定位。结果：S100A16在胃癌细胞中表达高于胃上皮细胞;稳定过表达S100A16的胃癌细胞SGC?7901和MGC?803构建成功;过表达S100A16促进胃癌细胞SGC?7901和MGC?803迁移;转染S100A16 siRNA抑制SGC?7901细胞中S100A16表达,E?钙黏蛋白表达升高,波形蛋白下调;S100A16和ZO?2存在相互作用,并在空间上存在共定位。结论：S100A16过表达促进胃癌细胞迁移,其作用机制可能是通过和ZO?2相互作用而实现。     

PSME3-NF-?资B途径介导三阴性乳腺癌的侵袭与转移

目的：研究蛋白酶体活化复合物3（proteasome activator complex subunit 3,PSME3）对三阴性乳腺癌侵袭及转移的影响及其机制。方法：收集临床三阴性乳腺癌患者标本,免疫组织化学检测PSME3蛋白的表达;以三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231为对象,利用慢病毒包装系统构建PSME3过表达及干扰稳定株。Real-time PCR法检测PSME3的mRNA表达,Western blot检测PSME3的蛋白表达。实验分为PSME3过表达（expression of PSME3,exPSME3）组、PSME3干扰（short hairpin RNA targeting PSME3,shPSME3）组和野生型对照组。在以Western blot法进行稳定株鉴定时,为排除载体本身对PSME3表达的影响,特增加PSME3过表达阴性对照（expression negative control,exNC）组、PSME3干扰阴性对照（short hairpin RNA targeting negative con－trol,shNC）组。划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot进一步检测迁移相关蛋白血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）在各组的表达情况。细胞爬片免疫荧光与Western blot分别检测核因子-?资B（nuclear factor-?资B,NF-?资B）及其活性基团,磷酸化的P65蛋白（phosphorylated-P65,P-P65）的表达。结果：免疫组织化学结果显示PSME3在三阴性乳腺癌患者肿瘤组织表达明显高于癌旁组织（t=36.700,P=0.000）。划痕实验结果显示exPSME3组的迁移能力高于对照组（P=0.000）,shPSME3组的迁移能力低于对照组（P=0.009）。迁移相关蛋白检测示VEGF-A、MMP9均在exPSME3组高表达,在shPSME3组低表达,与对照组相比有统计学差异。Transwell实验结果显示exPSME3组的侵袭能力高于对照组（P=0.000）,shPSME3组的侵袭能力低于对照组（P=0.000）。细胞爬片免疫荧光结果提示各组间NF-?资B蛋白表达无明显差异,而exPSME3组P-P65表达明显高于对照组（P=0.001）,shPSME3组P-P65表达低于对照组（P=0.001）,Western blot检测结果与之一致。结论：PSME3- NF-?资B途径可介导三阴性乳腺癌的侵袭及转移。     

核转录因子κB在急性髓细胞性白血病患者中调控多药耐药基因转录的研究

近年来，发现核转录因子κB（NF—κB）在多种肿瘤细胞中都是组成型活化的，并与肿瘤的耐药有密切关系。MDR1基因编码产物的P-糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）为能量依赖性的运输泵，它能将细胞内的药物泵出细胞外，因此P—gp的过表达能使细胞内药物浓度降低，是引起化疗失败的重要因素之一。荧光染料Rho123可作为底物被P—gp泵出细胞外，造成细胞内荧光分布减少，常被用来检测P—gp离子泵的功能。最近的研究发现NF—κB可以结合于MDR1基因的第一个内含子区域，并且在大     

GCN5调控sublytic C5b⁃9诱导大鼠肾小球系膜细胞表达Cyclin D1及致SOX9的乙酰化修饰

目的：探讨GCN5调控sublytic C5b?9刺激大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）诱导Cyclin D1基因表达以及GCN5乙酰化修饰SOX9转录因子的作用。方法：先用Western blot检测Thy?1肾炎（Thy?1 nephritis,Thy?1N）大鼠的肾组织和sublytic C5b?9 刺激的GMC中GCN5、SOX9和Cyclin D1的表达。然后分别将pIRES2?GCN5过表达和shGCN5小干扰质粒或将这些质粒与Cyclin D1启动子质粒行不同组合转染GMC,用荧光素酶报告基因实验和real?time PCR、Western blot检测过表达或沉默GCN5后对Cyclin D1表达的影响。同时用免疫共沉淀（Co?IP）和Western blot检测sublytic C5b?9刺激或分别转染GCN5过表达和酶活性突变质粒（ΔGCN5）的GMC中SOX9的乙酰化修饰。结果：Thy?1N大鼠肾组织和sublytic C5b?9刺激的GMC中GCN5、SOX9、Cyclin D1蛋白水平均明显上调,而过表达GCN5基因能上调Cyclin D1的启动子活性、mRNA和蛋白表达;敲低GCN5表达则得到了相反的结果。此外,sublytic C5b?9刺激和过表达GCN5基因促进了SOX9的乙酰化修饰,而沉默GCN5后则降低了SOX9的乙酰化水平。结论：GCN5可上调GMC中Cyclin D1的表达,并促进SOX9的乙酰化修饰。     

gp96多肽复合物对树突状细胞成熟及功能的影响

目的探讨gp96多肽复合物对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及功能的影响.方法应用液相层析技术从胃癌组织中提取gp96多肽复合物,用SDS-PAGE和Western blot进行性质鉴定,将提取的gp96多肽复合物加入外周血来源的单个核细胞诱导培养DCs,采用流式细胞技术检测DCs的表型变化,用3H-TdR掺入法检测DCs诱导的混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果从1 g湿重的胃癌组织中可提取gp6多肽复合物30～50μg,用gp96多肽复合物诱导培养的DCs其表面分子的表达明显增高,并具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论从胃癌组织中可以提取出gp96多肽复合物,gp96多肽复合物可促进DCs分化成熟,使其具有更强的抗原提呈能力.     

胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节

目的 探讨胰岛索样生长因子结合蛋白 -3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节.方法 采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响.结果 谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3 与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核.通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01).结论 IGFBP-3通过与 TRα1 相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3 在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据.     

氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡时NF-κB和Bak的表达变化

目的：探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型（alveolar type Ⅱ,ATⅡ）上皮细胞的凋亡情况及核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB） p65和Bak 表达变化。方法：原代培养大鼠ATⅡ细胞,用过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）500 μmol/L处理不同时间,建立氧化损伤性细胞模型。相差显微镜下观察细胞形态变化。流式细胞仪检测H2O2 刺激后细胞凋亡率的变化。蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测 ATⅡ细胞受 H2O2刺激后NF-κB p65和Bak的表达变化。免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观察NF-κB p65的变化和细胞内分布情况。结果：受H2O2刺激 3 h后,ATⅡ细胞体积减小,胞内颗粒数目减少,细胞核固缩。与正常对照组比较,受H2O2刺激1 h和3 h 后,ATⅡ细胞的凋亡率明显上升（P=0.000,P=0.000）。Western blot检测发现H2O2刺激3 h后,细胞核内NF-κB p65的表达明显增加（P=0.000）,ATⅡ 细胞 Bak 蛋白的表达增加（P=0.000）。激光共聚焦显微镜观察发现正常细胞NF-κB p65表达微弱,H2O2刺激3 h后,NF-κB p65 表达明显增强,主要集中分布于细胞核。结论：氧化应激能诱导ATⅡ细胞凋亡,在此过程中 NF-κB p65 在细胞核内的表达增加,Bak 的表达也增加,两者参与了 ATⅡ 细胞的凋亡。     

miR⁃29c过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的：探讨microRNA?29c（miR?29c）过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响及机制。方法：体外传代培养P19细胞,利用细胞转染技术构建miR?29c过表达细胞（mimic组）。CCK?8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期;Hoechst染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡情况,定量PCR和蛋白质免疫印迹（Western blot）检测凋亡相关因子Bax/Bcl?2表达情况;二甲亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化,定量PCR检测心肌特异性标志基因肌球蛋白重链（α?myosin heavy chain,αMHC）,转录因子GATA4和心肌增强因子2c（myocyte enhancer factor 2c,Mef2c）表达情况,明确miR?29c过表达对P19细胞分化的影响;生物信息学分析结合荧光素酶报告实验和Western blot明确miR?29c的靶基因。结果：与对照组相比,miR?29c过表达组细胞增殖速率较慢,细胞周期S期比例降低;miR?29c过表达组细胞凋亡率增高,Bax表达水平增高,而Bcl?2表达无明显差异;P19细胞分化第6天和第8天miR?29c过表达组αMHC、GATA4和Mef2c的表达水平显著高于对照组;Akt3被证实为miR?29c的靶基因。结论：miR?29c过表达可能是通过调控Akt3来抑制P19细胞增殖、促进P19细胞的凋亡和分化。     

胃癌及癌前病变P—糖蛋白的表达及意义

目的：研究胃癌及癌前病变组织中P－糖蛋白（P－glycoprotein,P-gp)的表达。方法：用免疫组化S－P法对65例胃癌,20例萎缩性胃炎伴肠上皮化生,18例不典型增生和10例正常胃粘膜中P－gp的表达进行检测。结果;20例胃癌（30．8％）,3例萎缩性胃炎伴肠上皮化生（15．0％）,3例不典型增生（16．7％）和1例正常胃粘膜（10．0％）呈阳性表达,胃癌与正常胃粘膜中P－gp的表达有显著性差异（P＜0．05）。胃癌中淋巴结转移及癌细胞浸润浆膜、浆膜外者P－gp表达率明显高于无淋巴结转移及浆膜内浸润者。结论：P－糖蛋白的表达与胃癌原发性耐药的产生有关,且对胃癌细胞的浸润、淋巴结转移可能有促进作用。     

SBi4211通过抑制S100B/RAGE表达减轻gp120诱导的中枢神经损伤

目的 研究S100B 抑制剂SBi4211（heptamidine）在人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）包膜蛋白gp120损伤中枢神经系统的作用。方法 通过U251细胞和SH-SY5Y细胞建立非接触式星形胶质细胞-神经元共培养体系,由gp120蛋白处理U251细胞激活神经炎症反应造成神经元损伤,体外水平探讨SBi4211在gp120诱导的中枢神经毒性中的作用;体内实验中,以8月龄gp120转基因小鼠模拟HIV相关神经认知障碍（HAND）模型,实验分为对照组、gp120组以及gp120+SBi4211组（SBi4211处理组）。采用CCK-8、流式细胞术检测神经元活性及凋亡情况,ELISA检测S100B及炎症因子IL-6、TNF-α表达水平,Western blot和免疫组织化学染色分析RAGE、GFAP、NeuN、Syn、MAP-2蛋白表达情况。结果 体外实验结果显示SBi4211可以显著抑制gp120刺激后U251细胞S100B、RAGE的表达（P<0.001）,降低炎症因子iNOS、IL-6和TNF-α的表达水平（P<0.001）,维持神经元相关标记蛋白NeuN、Syn的表达（P<0.001）。体内实验结果显示SBi4211显著降低gp120转基因小鼠S100B、RAGE表达及炎症水平（P<0.05）,并且抑制脑内星形胶质细胞活化,保护神经元的完整性（P<0.05）。结论 SBi4211可能通过下调S100B/RAGE表达,抑制gp120引发的神经炎症反应,继而阻断gp120的中枢神经毒性作用。     

颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应

目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚。文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建GZMB以及丝甘蛋白聚糖(serglycin; SRGN)过表达载体(oe-GZMB;oe-SRGN)和GZMB干扰质粒(si-GZMB)并转染到RA-FLSs中,RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰效率。CCK-8实验以及EdU检测细胞增殖水平。使用ELISA试剂盒检测炎性因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平。免疫共沉淀(CO-IP)实验检测GZMB和SRGN之间的相互作用。Western blot检测NF-kappaB信号通路相关蛋白表达水平。结果 与正常人的滑膜细胞(NC-FLSs)相比,GZMB在RA-FLSs细胞中表达上调(P<0.01);过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.01),而敲除GZMB则显著抑制RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<...     

钙离子结合蛋白S100A16对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨钙结合蛋白S100A16在胃癌组织和细胞中的表达,及其对胃癌细胞SGC?7901增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法：应用免疫组织化学染色法检测S100A16在胃癌和相应癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常胃上皮细胞GES?1以及胃癌细胞MGC?803和SGC?7901中S100A16的表达水平。将S100A16高表达质粒和干扰质粒分别转染至人胃癌细胞株SGC?7901中,用Western blot检测各组细胞中S100A16的表达。采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果：在胃癌组织及胃癌细胞中,S100A16的表达量明显高于相应癌旁组织及正常胃上皮细胞。SRB染色和克隆形成实验显示,过表达S100A16会增加SGC?7901细胞的增殖能力,敲低S100A16后增殖能力降低。划痕实验Transwell实验显示,过表达S100A16会增加SGC?7901细胞的迁移和侵袭能力,敲低S100A16则会降低。免疫共沉淀实验显示在胃癌细胞SGC?7901中,S100A16与YBX?1存在结合。结论：胃癌组织及细胞中S100A16的表达明显上调,S100A16在胃癌中的异常表达可能是由于与YBX?1的相互结合,进而促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭从而影响胃癌的发生发展。     

Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF⁃κB信号转导的影响

目的：研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物（small ubiquitin?related modifier,SUMO）修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子?6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）介导的核因子κB（nuclear factor κB,NF?κB）信号转导的影响。方法：构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素（ubiquitin,Ub）质粒共转染至HEK?293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α（inhibitor of NF?κBα,IκBα）的磷酸化和NF?κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF?κB信号通路的影响。结果：与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF?κB P65的核转位,转染使Pellino1 SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF?κB信号激活。结论：Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,最终促进TRAF6介导的NF?κB信号通路的激活。     

人G蛋白偶联受体107表达载体构建及细胞定位的研究

目的 克隆人G蛋白偶联受体107(GPR107)基因以构建真核表达载体,并探讨GPR107在真核细胞中的亚细胞定位.方法 通过分子克隆技术克隆人GPR107基因的cD-NA;利用真核细胞表达载体pCMV-Tag2B构建重组载体pC-MV-Tag2B-GPR107,瞬时转染至293T 细胞,Western blot 检测GPR107的表达变化;采用免疫荧光标记,激光共聚焦显微镜观察GPR107在细胞中的定位.结果 经过基因测序证实获得人GPR107的cDNA;成功构建真核表达载体pCMV-Tag2B-GPR107;Western blot结果显示,与未转染组比较,转染组GPR107表达量明显上调.激光共聚焦显微镜观察显示GPR107主要表达于细胞质.结论 GPR107在293T细胞中过表达,并定位于细胞质.