胃饥饿素对高糖下人视网膜血管内皮细胞的保护作用及机制

目的：探讨胃饥饿素(ghrelin)对高糖下的人视网膜血管内皮细胞的保护作用及机制。

方法：以人视网膜血管内皮细胞为研究对象,建立高糖损伤模型。胃饥饿素处理细胞后,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度胃饥饿素对高糖下细胞增殖的影响,以筛选最佳浓度。将细胞分为正常对照组(NC)、胃饥饿素组(ghrelin)、高糖组(HG)和胃饥饿素+高糖组(ghrelin+HG)。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,Annexin-APC/7-AAD试剂盒检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18的表达。

结果：与NC组(100.00%±0.00%)相比,HG组细胞增殖率(69.87%±0.68%,P<0.05)明显下降。与HG组相比,ghrelin+HG组细胞增殖率(92.31%±3.62%,P<0.05)明显升高。与NC组(4.94%±0.15%)相比,HG组细胞凋亡率(28.33%±1.37%,P<0.05)明显升高。与HG组相比,ghrelin+HG组细胞凋亡率(14.24%±0.32%,P<0.05)明显降低。与NC组相比,HG组细胞表达NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18蛋白均明显升高(均P<0.05)。与HG组相比,ghrelin+HG组细胞表达NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18蛋白均明显下降(均P<0.05)。

结论：胃饥饿素能对高糖损伤的视网膜血管内皮细胞起到保护作用,可能是通过抑制NLRP3炎症小体信号通路发挥其功能。     

原发性急性闭角型青光眼患者外周血IL-2和IL-6水平与视神经损伤相关性分析

目的：检测原发性急性闭角型青光眼与对照组围手术期外周血IL-2和IL-6水平差异,探讨细胞因子水平与原发性急性闭角型青光眼视神经损伤的相关性。

方法：收集2013-05/2014-10我院眼科住院原发性急性闭角型青光眼患者作为病例组,按视神经损伤程度分为轻、中、重3组。同期住院白内障患者作为对照组,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定研究对象外周血IL-2、IL-6浓度,分别比较病例组、对照组患者间以及不同视野损伤程度三组患者间细胞因子质量浓度的差异,分析原发性急性闭角型青光眼患者机体中细胞因子水平与视神经损伤程度的相关性。

结果：病例组血清中IL-2、IL-6浓度显著低于对照组(P<0.05)。重度视神经损伤组 IL-2、IL-6浓度显著低于轻度视神经损伤组(P<0.05)。视野损伤程度不同的三组IL-2、IL-6水平与视神经损伤严重程度进行多重线性回归分析,IL-2水平差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：原发性急性闭角型青光眼患者机体内IL-2、IL-6水平降低。原发性急性闭角型青光眼患者IL-2水平可能与视神经损伤有关。     

NLRP3/IL-1β通路在增殖性糖尿病视网膜病变中的作用机制

目的：探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/白介素-1β(IL-1β)通路在增殖性糖尿病视网膜病变中的作用机制。

方法：收集2015-09/2018-03我院眼科收治的增殖性糖尿病视网膜病变患者49例49眼(研究组)和特发性黄斑裂孔患者41例41眼(对照组)。检测研究组患者视网膜增殖前膜与对照组患者黄斑前膜中NLRP3蛋白表达情况、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)活性,测定两组患者玻璃体中IL-1β与IL-18浓度。

结果：研究组患者视网膜增殖前膜中NLRP3蛋白阳性表达率明显高于对照组患者黄斑前膜(90% vs 5%,P<0.05),且研究组患者视网膜增殖前膜中ROS与MDA水平明显升高,而SOD活性明显降低。研究组患者玻璃体中IL-1β、IL-18浓度(30.84±7.15、97.61±15.73pg/mL)均明显高于对照组(4.63±0.92、52.07±11.38pg/mL)。

结论：NLRP3与IL-1β在增殖性糖尿病视网膜病变组织中呈高表达,NLRP3/IL-1β通路可上调炎性因子与氧化因子表达水平,促进疾病发展。     

视网膜色素上皮细胞表达IL-1β和IL-6与细胞自噬的关系

目的：研究细胞自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮(RPE)细胞表达炎性因子IL-1β和IL-6中的作用。

方法：将体外培养的人RPE细胞系随机分为缺氧组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+缺氧组、氯喹(CQ)+缺氧组和对照组。培养24h后采用Western blot法检测各组细胞的自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、Beclin-1及p62的相对表达水平; 采用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-6的浓度。

结果：缺氧组IL-1β和IL-6的浓度明显高于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的相对蛋白表达量均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,缺氧组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ的相对蛋白表达量低于CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中p62相对蛋白表达量明显低于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。

结论：缺氧使RPE细胞LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达增强,p62表达减弱,并促进细胞分泌IL-1β和IL-6,自噬抑制剂3-MA和CQ能够减少RPE细胞表达IL-1β和IL-6。     

丹参川芎嗪注射液治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变临床分析

目的：回顾性研究丹参川芎嗪在非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)中的疗效及作用机制。

方法：随机选取NAION患者60例,对照组(30例)给予口服醋酸泼尼松片加颞浅动脉旁皮下注射复方樟柳碱注射液治疗; 试验组(30例)加用丹参川芎嗪注射液治疗,疗程14d。采用ELISA检测两组患者血浆中IL-1β和TNF-α水平,采用Western blot检测两组患者血浆中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。

结果：两组患者最佳矫正视力均有提高; 试验组患者治疗后血浆中IL-1β和TNF-α水平均比对照组降低(P<0.05); 试验组患者血浆Bcl-2、Caspase-3的表达与治疗前相比有差异(P<0.05),且两组间两个蛋白表达有统计学差异(P<0.05)。

结论：丹参川芎嗪通过降低体内的炎性水平,抑制细胞凋亡,促进视功能的恢复。     

Mcc950对H2O2诱导的ARPE-19细胞炎性损伤的保护作用

目的：探讨Mcc950对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)炎性损伤的保护作用。

方法：将ARPE-19细胞分为正常对照组、H₂O₂损伤组、单纯Mcc950给药组、Mcc950预处理+H₂O₂损伤组,采用 CCK-8法检测细胞活力并确定H₂O₂和Mcc950合适的实验浓度,ELISA法检测细胞分泌的IL-1β浓度,免疫印迹(Western blot)法检测细胞中NLRP3炎性小体相关蛋白的表达情况,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况。

结果：细胞活力随H₂O₂刺激浓度的增加逐渐下降,H₂O₂浓度为400μmol/L时细胞活力显著降低; 而0.1、1μmol/L Mcc950对细胞活力无显著影响,故选取400μmol/L H₂O₂和1μmol/L Mcc950作为合适的实验浓度。与正常对照组相比,H₂O₂损伤组细胞活力显著降低,细胞上清液中IL-1β浓度显著升高,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),而与H₂O₂损伤组比较,Mcc950预处理+H₂O₂损伤组细胞活力明显升高,细胞上清液中IL-1β浓度和细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,H₂O₂能够促进细胞中NLRP3、Pro-caspase1和caspase1的表达,而Mcc950预处理+H₂O₂损伤组细胞中NLRP3、Pro-caspase1依然保持高表达,但caspase1表达水平得到明显抑制,表明Mcc950能有效抑制NLRP3炎性小体的激活从而干扰具有细胞凋亡作用的成熟caspase1的产生。

结论：Mcc950能够有效抑制H₂O₂诱导的NLRP3炎性小体激活,恢复细胞活力,抑制细胞凋亡。     

新生血管性青光眼患者血清和房水中IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平及意义

目的：测定新生血管性青光眼(neovascular glaucoma,NVG)患者血清及房水中IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平,并探讨IL-6、IL-8、TNF-α在NVG发生发展中的意义。

方法：采用前瞻性病例分析方法,纳入2015-08/2017-03在我院诊治的NVG患者38例38眼,并按虹膜新生血管分级标准分为Ⅱ级8眼,Ⅲ级19眼,Ⅳ级11眼。选取同期原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)患者31例31眼、年龄相关性白内障患者33例33眼作为对照。分别于术前检测患者眼压水平,分别抽取患者静脉血及房水样本,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及房水中IL-6、IL-8、TNF-α含量。

结果：NVG组血清和房水中IL-6、IL-8、TNF-α水平均明显高于POAG组和白内障组,差异有统计学意义(P<0.05); POAG组血清和房水中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于白内障组(P<0.05)。Ⅳ级NVG组血清和房水中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于Ⅲ级患者,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ级患者血清及房水中IL-6、IL-8、TNF-α水平明显高于Ⅱ级,差异有统计学意义(P<0.05)。NVG患者血清及房水中IL-6、IL-8、TNF-α水平均与眼压水平呈正相关(P<0.05)。

结论：IL-6、IL-8、TNF-α在NVG患者血清及房水中高表达,可能参与虹膜新生血管生长和眼压升高。     

OCT联合分离格栅视觉诱发电位在POAG诊治中的应用

目的：分析光学相干断层扫描(OCT)联合分离格栅视觉诱发电位(Ic-VEP)在原发性开角型青光眼(POAG)诊治中的应用价值。

方法：前瞻性队列研究。选取2014-10/2018-05就诊我院的可疑青光眼患者32例32眼、早期POAG患者30例30眼、中晚期POAG患者25例25眼及正常人30例30眼，所有纳入人员均进行OCT、Ic-VEP、视野检查，对结果进行分析。

结果：Ic-VEP在早期POAG组敏感性为83%，特异性为93%； 信噪比(SNR)组间两两比较，8%SNR：早期POAG组与可疑青光眼组差异无统计学意义(P>0.05)，其余组间差异均有统计学意义(P<0.05)； 16%SNR及32%SNR：正常组与中晚期POAG组比较、可疑青光眼与中晚期POAG组比较、早期POAG组与中晚期POAG组比较，差异均有统计学意义(P<0.01)，其余组间差异均无统计学意义(P>0.05)。四组视网膜神经纤维层厚度(RNFL)参数均随病情加重变薄，各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。四组视野平均缺损(MD)逐渐减小，可疑青光眼组与正常组差异无统计学意义(P=0.08)，其余组间差异有统计学意义(P<0.05)。8%SNR、平均RNFL及MD的ROC曲线下面积在可疑青光眼组分别为0.824、0.846、0.661； 在早期POAG组分别为0.898、0.969、0.889。

结论：OCT与Ic-VEP对POAG的早期变化有较高的诊断能力，并能评估视神经的损伤程度，可联合用于POAG的早期诊断和病情评估。     

TNF-α和IL-6在新生血管性青光眼发病过程中的作用

目的：通过检测新生血管性青光眼(neovascular glaucoma,NVG)患者血清及房水中TNF-α、IL-6的浓度,探讨它们在NVG发病中的作用。

方法：选择2017-01/2018-01期间在我院眼科住院治疗的新生血管性青光眼患者64例64眼作为试验组,同期住院开角型青光眼(POAG)、年龄相关性白内障(ARC)患者作为对照组,检测三组患者血清及房水中TNF-α、IL-6水平,进行单因素方差分析和相关性分析。

结果：NVG组患者血清与房水中TNF-α、IL-6水平明显高于POAG组,差异均有统计学意义(P<0.05); 与ARC组比较,差异有显著的统计学意义(P<0.01); NVG组患者房水及血清中TNF-α与IL-6呈显著正相关(r=0.642、0.415,P<0.05)。

结论：NVG患者血清及房水中TNF-α、IL-6均显著升高,TNF-α、IL-6在视网膜新生血管的发生、发展中起重要作用。     

眼表化学伤患者泪液炎症细胞因子浓度与预后的相关分析

目的：探讨眼表化学伤患者泪液中炎症介质TNF-α,IL-1β和IL-6浓度变化与眼表化学伤病情轻重及预后的相关性。

方法：眼表化学伤患者66例80眼,按Roper-Hall标准分度将眼表化学伤分为4度,其中Ⅰ和Ⅱ度35 例44眼,Ⅲ度22 例25眼、Ⅳ度9 例11眼,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定泪液中TNF-α,IL-1β和IL-6的浓度,并以12例健康成年人作为对照。

结果：眼表化学伤组 TNF-α,IL-1β和IL-6水平均高于对照组(P<0.01); 眼表化学伤患者中Ⅳ度组>Ⅲ度组>Ⅰ和Ⅱ度组(P<0.01); Ⅳ度组致盲率高于Ⅲ组和Ⅰ,Ⅱ组(P<0.05)。

结论：眼表化学伤患者TNF-α,IL-1β和IL-6水平明显升高,且随着Roper-Hall标准分度增高而增高。TNF-α,IL-1β和IL-6水平越高,致盲率则越高。炎症细胞因子水平对判断眼表化学伤患者病情严重程度及预后有重要意义。