维生素E对哮喘大鼠气道重塑的影响

目的：探讨维生素E对哮喘大鼠气道结构重塑的影响。方法：24只清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组、哮喘组和维生素E组,每组8只。哮喘组和维生素E组用卵白蛋白致敏并激发建立哮喘模型,对照组以等量生理盐水处理;第15天起,维生素E组予维生素E 100 mg/（kg·d）灌胃,其余组用等量生理盐水灌胃;第69天激发后处死大鼠,采集血清及肺组织标本。大鼠肺组织行HE染色观察其病理改变,气管壁及平滑肌厚度经计算机图像分析系统检测,ELISA法测定血清缺氧诱导因子?1α（hypoxia inducible factor?1α,HIF?1α）、基质金属蛋白酶?9（matrix metalloproteinase?9,MMP?9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子?1（tissue inhibitor of metalloproteinase?1,TIMP?1）,免疫组化法测定肺组织MMP?9、TIMP?1表达。结果：哮喘组气管壁及平滑肌厚度较对照组显著增加;维生素E组上述指标较哮喘组有所减轻;与对照组比较,哮喘组血清HIF?1α、MMP?9、TIMP?1及肺组织MMP?9、TIMP?1明显增加,而维生素E组上述指标较哮喘组显著减少（P < 0.05）。结论：维生素E可能经抑制HIF?1α、MMP?9、TIMP?1来改善哮喘气道结构重塑。     

内皮素1及内皮素受体A拮抗剂对人肾间质成纤维细胞的作用

目的 探讨内皮素1（ET－1）受体A拮抗剂（ETaRA）对人肾间质成纤维细胞（hRIF）的作用。方法 在体外培养的hRIF中进行如上试验：（1）MTT比色法检测细胞增殖情况。（2）逆转录多聚酶链反应法（RT－PCR）观察Ⅰ型胶原（ColⅠ）、转化生长因子β（TGF－β）、基质金属蛋白酶1（MMP－1）、金属蛋白酶组织抑制物1,2（TIMP－1,TIMP－2）mRNA表达的变化。结果 （1）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,24h）可以促进hRIF增殖,10^-7mol/L增殖最显著（P＜0.05）,呈剂量相关;10^-7mol/L刺激8h,hRIF即明显增殖,24h达高峰（P＜0.01）。（2）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,16h）可上调hRIFr ColⅠ、TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达,10^-7mol/L作用最显著（P＜0.05）,呈剂量相关。10^-7mol/L刺激hRIFs时,ColⅠmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;TGF－βmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）且达高峰;TIMP－1及TIMP－2mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;MMP－1mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,且达高峰。（3）上述作用可特异地被ETaRA阻断。结论 ET－1可刺激hRIF增殖,并上调ColⅠ、TGF－β、MMP－1、TIMP－1、TIMP－2mRNA的表达,ETaRA可抑制上述反应。ET－1可能在上参与肾间质纤维化过程。     

青蒿素对人皮肤瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用及相关机制初探

目的：探讨青蒿素对人皮肤瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用及相关机制。方法：进行人瘢痕疙瘩成纤维细胞的原代分离、培养和传代。不同浓度青蒿素分别预处理人瘢痕疙瘩成纤维细胞,每隔24 h用CCK?8法测定细胞增殖情况,连续测定5 d,观察药物处理的最佳浓度。后续实验分为空白组、青蒿素组、青蒿素+IL?6组、青蒿素+AG490组,流式细胞术检测各组早期细胞凋亡率,real?time PCR法检测各组基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2、MMP9、STAT3 mRNA的表达水平,Western blot法检测各组MMP2、MMP9、STAT3、p?STAT3蛋白的表达水平。结果：根据CCK?8实验结果选择150 μg/mL青蒿素作用48 h的细胞为后续实验干预浓度和时间。流式细胞术结果显示,青蒿素组、青蒿素+IL?6组、青蒿素+AG490组早期凋亡细胞百分比明显高于空白组,青蒿素+IL?6组的早期凋亡细胞百分比低于青蒿素组和青蒿素+AG490组（P < 0.01）。real?time PCR检测结果显示,与空白组比较,青蒿素组、青蒿素+IL?6组、青蒿素+AG490组中MMP2、MMP9 mRNA的表达均显著降低（P < 0.01）;MMP2、MMP9 mRNA在青蒿素组、青蒿素+AG490组的表达较青蒿素+IL?6组显著降低（P < 0.01）。Western blot检测结果显示,与空白组比较,青蒿素组、青蒿素+IL?6组、青蒿素+AG490组中STAT3、p?STAT3、MMP2、MMP9蛋白的表达均明显降低（P < 0.01）,p?STAT3、MMP2、MMP9蛋白在青蒿素组、青蒿素+AG490组中的表达低于在青蒿素+IL?6组中的表达（P < 0.01）。结论：青蒿素对瘢痕疙瘩起抑制作用,其机制可能通过抑制p?STAT3的过度激活来抑制MMP2、MMP9的表达。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物在db／db小鼠糖尿病肾病中的表达和活性

目的 探讨基质金属蛋白酶（MMP-s)和基质金属蛋白酶抑制物（TIMPs)在db/db小鼠糖尿病肾病发病机制中的应用。方法 6例db/db小鼠肾组织标本，用蛋白质印迹法检测MMP－2，MMP－9，TIMP－1，TIMP－2蛋白的表达，用白明胶酶谱法检测MMP－2和MMP－9活性。结果 与db/m小鼠相比，db/db小鼠肾脏MMP－2，MMP－9蛋白质的表达分别下降了55．4％和30．1％（P＜0．05）；而TIMP－1和TIMP－2蛋白质表达分别上升了272．5％和48．8％（P＜0．01）。db/db小鼠肾脏MMP－9的活性较db/m小鼠明显下降（85．9％，P＜0．01）；MMP－2的活性在db/db小鼠和db/m小鼠肾脏中均检测不同。结论 db/db小鼠肾脏中MMP-s-蛋白表达和活性下降，而TIMPs蛋白表达上升，使细胞外基质降解减少，积聚增多，是db/db小鼠糖尿病肾病主要发病机制之一。     

肝细胞生长因子对ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成细胞外基质、基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用

目的；观察重组人肝细胞生长因子（rhHGF)对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD)囊肿衬里上皮细胞合成细胞外项质（ECM），基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用。方法：采用放免法测定细胞合成层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP），采用ELISA法检测细胞合成Ⅳ型胶原(ColⅣ），采用RT－PCR方法测定细胞表达转化生长因子β1（TGFβ1），基质金属蛋白酶2（MMP－2），金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1），金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP－2）mRNA的情况，用蛋白质印迹方法检测细胞上清液中MMP－2蛋白表达，明胶酶谱法检测MMP－2活性。结果：rhHGF及rhHGF 抗TGFβ1抗体组ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN，ColⅣ显著增多，但两组比较无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF 抗HGF抗体组及rhHGF 抗TGFβ1抗体组各间合成PⅢNP值均无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF＋抗HGF抗体组各组比较TGFβ1mRNA表达无显著差异。与对照比较，rhHGF显著上调细胞MMP－2 mRNA和细胞上清液中MMP－2蛋白表达及MMP－2活性，显著下调细胞TIMP－1，TIMP－2 mRNA表达。结论：HGF促进了ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN和ColⅣ，增加MMP－2表达，抑制TIMP－1，TIMP－2的表达。这些改变可能参与了ADPKD囊肿的发生及发展。     

基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其生理性抑制剂TIMP 1和转化生长因子β1(TGF β1)在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预的效果 .方法 :雄性SD大鼠随机分为 3组 :①对照组 ;②去甲肾上腺素 (nore pinephrine,NE)组 (1.0 6mg·kg-1·d-1× 15d) ;③NE +氯沙坦组 (10mg·kg-1·d-1× 15d) .NE腹腔注射 ,2次·d-1,连续15d ,建立心肌肥厚的模型 .应用超声心动图及病理学方法评价整体心肌肥厚和组织胶原的表达 .用逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR)及免疫组化方法检测MMP 9,TIMP 1和TGF β1mRNA和蛋白表达情况 .结果 :大鼠腹腔注射NE后发生左心室肥厚及纤维化 ,胶原的含量及MMP 9,TIMP 1和TGF β1的蛋白、mRNA的表达显著高于健康对照组 (P <0 .0 1) .氯沙坦能降低室间隔的厚度 ,减少左室心肌中总体胶原、I型、III型胶原的合成及MMP 9,TGF β1的表达 (P <0 .0 1) .结论 :MMP 9,TIMP 1和TGF β1与NE诱导的心肌细胞外基质重塑有关 .氯沙坦能有效的防治心肌肥厚及细胞外基质重塑 ,这一效应与其降低心肌中高表达的MMP 9和TGF β1有关 .     

移植Toll样受体3处理脐带间充质干细胞对小鼠狼疮性肾炎的治疗效果及其机制

目的 探讨Toll样受体3（TLR3）激活对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植治疗狼疮性肾炎（LN）的效果,并初步阐明其作用机制。 方法 培养hUC-MSCs并鉴定,10 mg·L^－1聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组,另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组;小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后,每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平;8周后采血并取肾组织,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中抗双链DNA（dsDNA）抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF?α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现,免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关蛋白表达水平。 结果 hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较,模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象,肾组织中IgG和C3沉积明显（P<0.05）,肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和酵母ATG6的同系物（Beclin1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较,给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低（P<0.05）,6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低（P<0.05）,血清中抗dsDNA抗体水平降低（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,肾组织病变有一定程度的改善,肾组织中IgG和C3沉积减少（P<0.05）,且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显;hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与hUC-MSCs组比较,TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用,可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。     

益肾汤联合强的松与依那普利对IgA肾病小鼠肾 MMP-9&#65380;TIMP-1表达的影响

 【目的】探讨中药“益肾汤”治疗IgA肾病(IgAN)的机理&#65377;【方法】用“口服牛血清白蛋白联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B”法复制小鼠IgAN模型&#65377;设正常组&#65380;模型组&#65380;益肾汤低浓度&#65380;益肾汤高浓度&#65380;强的松+依那普利&#65380;强的松+依那普利+益肾汤低浓度&#65380;强的松+依那普利+益肾汤高浓度7组&#65377;FQ*9鄄PCR法检测小鼠肾组织MMP*9鄄9&#65380;TIMP*9鄄1mRNA表达&#65380;免疫组化SABC法检测小鼠肾组织MMP*9鄄9&#65380;TIMP*9鄄1的含量&#65377;【结果】模型组小鼠肾间质MMP*9鄄9表达(PU值:6.9 ± 2.7 vs 5.8 ± 2.1;mRNA表达:0.297 ± 0.025 vs 0.107 ± 0.004)与正常组比较差异无显著性(P > 0.05),而模型组TIMP*9鄄1表达(PU值:18.0 ± 7.7 vs 5.2 ± 2.2;mRNA表达:0.884 ± 0.247 vs 0.109 ± 0.007)则较正常组明显上调(P < 0.05)&#65377;益肾汤低浓度组与高浓度组之间肾小管间质MMP*9鄄9&#65380;TIMP*9鄄1表达差异无显著性(P > 0.05),但益肾汤高浓度组与低浓度两组MMP*9鄄9表达均强于模型组(PU值:8.9 ± 3.0 vs 6.9 ± 2.7,8.9 ± 3.3 vs 6.9 ± 2.7;mRNA表达:0.397 ± 0.047 vs 0.297 ± 0.025,0.386 ± 0.027 vs 0.297 ± 0.025;P < 0.05),而TIMP*9鄄1的表达均弱于模型组(PU值:14.92 ± 6.07 vs 18.04 ± 7.70,15.55 ± 6.01 vs 18.04 ± 7.70;mRNA表达:0.665 ± 0.197 vs 0.883 ± 0.247,0.713 ± 0.221 vs 0.883 ± 0.247;P <0.05)&#65377;5个治疗组中强的松+依那普利+益肾汤高浓度组MMP*9鄄9 mRNA及其蛋白表达最强(PU值:34.3 ± 8.7;mRNA表达:1.265 ± 0.433)&#65380;而TIMP*9鄄1mRNA及其蛋白表达最弱(PU值:9.2 ± 3.4;mRNA表达: 0.293 ± 0.068)&#65377;【结论】益肾汤可促进IgAN小鼠肾组织MMP*9鄄9的表达&#65380;抑制TIMP*9鄄1的表达&#65377;强的松+依那普利+益肾汤的联合治疗方案较单用强的松+依那普利或单用益肾汤治疗IgAN有更好的疗效&#65377;     

IL⁃17A对小鼠实验性牙周炎骨破坏作用研究

目的：通过构建白介素?17A（interleukin?17A,IL?17A）基因敲除小鼠实验性牙周炎模型,初探IL?17A参与调控牙周炎骨破坏的机制。方法：选用雄性IL?17A基因敲除（knock out,KO）的C57BL/6小鼠和相同基因背景的野生型（wild type,WT）C57BL/6小鼠,通过结扎和喂菌诱导小鼠实验性牙周炎,WT小鼠及KO小鼠均分为正常对照组和牙周炎组。确认结扎4周后处死小鼠收集上颌骨,进行Micro?CT断层成像、HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate?resistant acid phosphatase,TRAP）染色、免疫组化和组织病理学分析。结果：在喂菌和结扎诱导的小鼠实验性牙周炎模型中,在Micro?CT的三维重建及近远中向截面上,KO小鼠较WT小鼠牙槽骨吸收减少,KO小鼠上颌第二磨牙牙槽嵴顶到釉牙骨质界的近中线性距离为（0.51 ± 0.11）mm,远中为（0.45 ± 0.04）mm,显著低于WT小鼠的近中（0.61 ± 0.09）mm和远中（0.65 ± 0.08）mm（P < 0.05）;KO小鼠骨体积分数比为41.88 ± 1.82,显著高于WT小鼠的36.55 ± 2.08（P < 0.05）;KO小鼠骨密度为84.39 ± 2.11,显著高于WT小鼠的76.90 ± 2.55（P < 0.05）;HE染色中可见牙槽骨吸收减少;TRAP染色中可见TRAP染色阳性细胞减少;免疫组化结果显示牙周组织核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL）的表达降低。结论：牙周炎中IL?17A可能有促进牙周炎发生发展及促进牙槽骨吸收的作用。     

尿毒清对阿霉素肾病大鼠致纤维化因子表达的影响

目的观察尿毒清对阿霉素（ADR）肾病大鼠肾脏转化生长因子 β1（TGF β1）、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP 1)、纤溶酶原激活物抑制物1 (PAI 1)和骨调素(OPN)mRNA 表达的影响,探讨尿毒清治疗慢性肾脏疾病的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,采用单侧肾切除加重复尾静脉注射ADR的方法制作ADR肾病模型,随机分为正常组（N组）、模型组（M组）、尿毒清组（Ni组）、贝那普利组（B组）4组,每组6只。用药第4、8周后观察各组大鼠24?h尿蛋白定量、血脂、血浆总蛋白（TP）、血浆白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的水平,实时荧光定量PCR测定第8周肾组织中TGF β1、TIMP 1、PAI 1及OPN mRNA的表达。结果尿毒清和贝那普利均能减少ADR肾病大鼠尿蛋白,降低BUN、Scr,升高血浆蛋白,纠正脂代谢紊乱,减少TGF β1、TIMP 1、PAI 1及OPN mRNA的表达,与M组相比有显著差异（P＜0.01）;而Ni组PAI 1 mRNA水平较B组显著降低（P＜0.01）。结论尿毒清可下调ADR肾病大鼠肾脏组织TGF β1、TIMP 1 、PAI 1及OPN mRNA的合成,可能是其治疗慢性肾脏疾病的重要机制之一。