淫羊藿苷抑制亮氨酸拉链蛋白表达调节糖皮质激素诱导的MC3T3-E1成骨基因的表达失衡

目的考察成骨细胞MC3T3-E中亮氨酸拉链蛋白（GILZ）的表达与淫羊藿苷（icraiin,ICR）和糖皮质激素地塞米松（dexamethasone,DEX）之间的关系以及对部分成骨相关基因的表达影响。方法将诱导成熟分化的MC3T3-E1细胞分为3组,分别为DEX组、ICR组以及ICR＋DEx组,通过Real—TimeRT—PCR来检测不同组中GILZ、骨保护素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）、骨钙素（Oc）和碱性磷酸酶（ALP）mRNA表达。结果DEX能够提升GILZ、RANKL和ALP的表达,降低OPG、OC的表达,提高RANKL／OPG表达比率。ICR能够抑制G[LZ、RANKL和ALP的表达,提升OPG、OC的表达,降低RANKL／OPG表达比率。并且ICR能够抑制DEX诱导的GILZ、RANKL和ALP表达升高,逆转DEX诱导的OPG、OC的表达抑制。同时显著降低了RANKL／OPG表达比率。结论ICR通过抑制GILZ的mRNA表达,降低RANKL／OPG的表达比率,抑制破骨细胞成熟激活。ICR通过抑制ALP表达和提高OC表达提高成骨细胞的增殖能力。     

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素(osteoprotegerin,OPG)和NF-кB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-кB ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平。结果:10-6～10-12mol·L-1的α-ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加ALP活性(P<0.05),但不同剂量间存在作用时间差异;并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.05)。结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物。     

葛根素基于内质网蛋白核心 /信号分子 /C/EBP同源蛋白通路对脂多糖诱导成骨细胞骨保护素及核因子 -κB受体 mRNA表达的影响

目的 探讨基于内质网蛋白核心/信号分子/C/EBP同源蛋白(GRP78/PERK/CHOP)通路研究葛根素对脂多糖(LPS)诱导成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子-κB受体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 体外培养小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1,采用随机数字表法分为对照组、模型组、4-苯基丁酸钠盐(内质网应激抑制剂,4-PBA)组、葛根素组、葛根素+4-PBA组,除对照组,其余各组以LPS处理MC3T3-E1细胞建立成骨细胞炎症模型,以茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒分别检测各组细胞矿化结节相对比例、ALP活性,判定细胞成骨分化情况;以酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组细胞培养基上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;以实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞成骨相关基因(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)mRNA水平及OPG、RANKL mRNA水平;以免疫印迹检测细胞GRP78、PERK、CHOP蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组MC3T3-E1细胞矿化结节相对比例[(8.23±1.18)％比(100.00±0.00)％]、ALP活性[(0.49±0.12)U/mgprot比(1.57±0.35)U/mgprot]、细胞Runx2[(0.41±0.05)比(1.01±0.13)]、OPN[(0.39±0.04)比(1.02±0.15)]、OCN[(0.40±0.03)比(0.99±0.14)]及OPG mRNA[(0.41±0.11)比(1.03±0.17)]水平明显降低(P<0.05),细胞培养基上清液中TNF-α[(602.43±20.01)pg/mL比(381.86±18.16)pg/mL]及IL-6水平[(483.63±16.61)pg/mL比(280.15±11.18)pg/mL]、细胞RANKL mRNA[(3.03±0.62)比(0.99±0.13)]水平及GRP78[(1.31±0.24)比(0.19±0.05)]、PERK[(1.23±0.27)比(0.33±0.08)]、CHOP蛋白[(1.21±0.28)比(0.31±0.07)]表达明显升高(P<0.05).与模型组相比,4-PBA组、葛根素组、葛根素+4-PBA组MC3T3-E1细胞矿化结节相对比例、ALP活性、细胞Runx2、OPN、OCN及OPG mRNA水平均升高(P<0.05),细胞培养基上清液中TNF-α及IL-6水平、细胞RANKL mRNA水平及GRP78、PERK、CHOP蛋白表达均降低(P<0.05).与4-PBA组、葛根素组分别相比,葛根素+4-PBA组MC3T3-E1细胞矿化结节相对比例、ALP活性、细胞Runx2、OPN、OCN及OPG mRNA水平均升高(P<0.05),细胞培养基上清液中TNF-α及IL-6水平、细胞RANKL mRNA水平及GRP78、PERK、CHOP蛋白表达均降低(P<0.05),4-PBA组与葛根素组上述各项指标比较均差异无统计学意义(P>0.05).结论 葛根素可上调OPG mRNA水平,下调RANKL mRNA水平,降低LPS诱导的成骨细胞炎症反应,拮抗LPS对成骨细胞成骨分化的抑制作用,可能是通过下调GRP78/PERK/CHOP通路实现的.     

双醋瑞因对破骨细胞性骨破坏的抑制作用及机制

目的考察双醋瑞因对破骨细胞生成及骨破坏功能是否具有抑制作用，以及双醋瑞因抑制破骨细胞的作用是否与影响成骨细胞中OPG及RANKL的表达有关。方法MC3T3-E1细胞与骨髓前体细胞共培养生成破骨细胞，将TRAP染色阳性、细胞核数目≥3个的细胞作为破骨细胞，计数生成的破骨细胞。计数IL-1β作用前后典型的骨吸收陷窝以观察破骨细胞的活性。应用Western blotting法、流式细胞术及RT-PCR法在蛋白水平及基因水平观察MC3T3-E1细胞中RANKL及OPG的表达。结果双醋瑞因可显著抑制IL-1β作用下破骨细胞的生成及其骨陷窝形成功能，sRANKL的加入可逆转双醋瑞因的上述作用。双醋瑞因可在基因及蛋白水平上调MC3T3-T1细胞中OPG/RANKL的比例。结论双醋瑞因具有抑制IL-1β诱导的破骨细胞性骨破坏的作用，这一作用可能与其抑制MC3T3-E1细胞中RANKL表达同时促进OPG表达有关。     

白藜芦醇对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用

目的 探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用.方法 采用CCK-8法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞的细胞增殖活性,对硝基苯磷酸盐法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞ALP活性.将MC3T3-E1成骨细胞分为空白组(基础培养基)、对照组(LPS 2 μg/mL)和实验组(LPS 2μg/mL+白藜芦醇20 μmol/L).采用qRT-PCR检测三组成骨相关基因Runx2、ALP、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达,Western blot法检测三组细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)蛋白表达.结果 白藜芦醇20 μmol/L是MC3T3-E1成骨细胞最适成骨浓度(P＜0.05).与空白组比较,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平均降低(P＜0.05);与对照组相比,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过提高Runx2、ALP、OCN、OPN和SIRT1相关成骨因子的表达对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞发挥骨保护作用.     

淫羊藿苷基于雌激素受体对糖皮质激素诱导的MC3T3-E1成骨抑制的影响

目的 研究淫羊藿苷(icariin,ICR)对雌性激素受体(estrogen receptor,ER)与地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的MC3T3-E1成骨抑制效应的影响。方法 分别以DEX 10^-5 mol·L^-1、ICR 10^-6 mol·L^-1、雌激素(E2)10^-8 mol·L^-1及ICI182780(IN)10^-5 mol·L^-1干预MC3T3-E1成熟分化过程,并通过real-time RT-PCR、Westen blot、MTT和茜素红染色法分别测定对应组各指标变化情况。结果 ICR和E2一样能够明显提高成骨细胞ALP、OPG、OC和Runx2的表达,并能够显著降低RANKL和Dickkopf的表达,对应的OPG和RANKL蛋白的表达量与mRNA的表达量相一致。ALP活性、细胞增殖能力以及Ga²⁺结节数量与对照组相比也有明显提高。同时ICR和E2都能够有效回复DEX诱导的成骨抑制效应,这种调节效应能够被IN有效的阻断。结论 ICR具有促成骨细胞增殖分化和抑制破骨细胞激活效应,并能够有效的缓解DEX诱导的成骨抑制效应;其促成骨效应具ER依赖性。     

葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E1细胞周期及细胞内钙离子浓度的影响。RT-PCR检测葛根素对TRPM3基因m RNA表达的影响。结果 0.1、1、10μmol·L~(-1)葛根素能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,使G1期细胞比例减少,G_2+S期细胞比例增加,其中0.1μmol·L~(-1)浓度效果最为明显;与正常对照组相比较,0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的ALP活性和矿化结节面积均明显提高;0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的TRPM3 m RNA表达水平和细胞内钙离子浓度明显降低。结论葛根素可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,可降低TRPM3 mRNA表达水平和细胞内钙离子浓度。     

杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法 采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型, 通过MTT法测定细胞增殖, ELISA方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性, 观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10^-6 mmol/L, 桃叶珊瑚苷则为10^-5 mmol/L;10^-4 μmol/L京尼平苷在干预后4 d, 才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素(10^-5、10^-3 mmol/L)、京尼平苷(10^-3 mmol/L)和桃叶珊瑚苷(10^-3 mmol/L)可增加MC3T3-E1 ALP活性。结论 槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化, 且作用强度具有浓度相关性和时间相关性, 可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。     

卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化和Ⅰ型胶原基因表达水平影响。方法在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、RT-PCR的方法观察卡托普利对MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果 10-11 mol.L-1浓度的卡托普利作用24 h能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,作用3 d能明显促进MC3T3-E1细胞表达碱性磷酸酶。卡托普利可刺激MC3T3-E1细胞表达Ⅰ型胶原,以10-11 mol.L-1作用最强。结论卡托普利有促进MC3T3-E1细胞增殖、促进碱性磷酸酶表达和增加Ⅰ型胶原mRNA表达的作用。     

大花红景天介导PI3K/AKT-HDAC2轴对人胚肺成纤维二倍体细胞衰老的调控作用

目的 探究大花红景天中杞柳苷（salipurposide,Sali）、红景天苷（salidroside,Sal）、异柳糖苷（isotachioside,Isota）对人胚肺成纤维二倍体细胞（2BS）衰老调控作用及可能机制。方法 显微镜下观察并选取年轻28代龄2BS （28PD）细胞和衰老50代龄2BS （50PD）细胞。MTT试验测定1.25,2.5,5.0,7.5,10.0 μmol·L^–1 Sal,2.5,5.0,7.5,10.0,12.5 μmol·L^–1 Sali以及Isota对50PD细胞活性的影响。根据MTT结果,5.0 μmol·L^–1 Sal和10.0 μmol·L^–1 Sali、Isota用于进行后续实验。28PD和50PD细胞分为28PD组、50PD组、50PD+Sali组、50PD+Sal组、50PD+Isota组,各组相应药物干预24 h。测定细胞衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence associated-beta-galactosidae,SA-β-gal）表达情况,细胞丙二醛（malondialdehyde,MDA）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活性情况,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞磷脂酰肌醇三羟基激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B （AKT）、组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）的mRNA表达以及PI3K、磷酸AKT （p-AKT）、HDAC2蛋白表达情况。结果 与28PD组比较,50PD组细胞SA-β-gal表达增加,MDA、ROS含量增加,SOD、GSH-PX活性降低,PI3K、AKT、HDAC2的mRNA以及相应蛋白表达降低（P<0.01）。50PD细胞经Sali、Sal、Isota干预后,SA-β-gal表达显著降低（P<0.01）,MDA、ROS含量显著降低（P<0.01）,SOD、GSH-PX活性显著提高（P<0.01）,PI3K、AKT、HDAC2的mRNA以及相应蛋白表达均显著增加（P<0.05或P<0.01）。结论 大花红景天中Sali、Sal、Isota能降低50PD细胞SA-β-gal表达,其作用可能与抑制氧化应激、调控PI3K/AKT-HDAC2轴表达有关。     

Influence of adjunctive interferon-γ on treatment of gentamicin- and vancomycin-resistant Enterococcus faecalis infection in mice

Increasing antibiotic resistance and the development of multidrug-resistance in the enterococci has complicated the treatment of serious enterococcal infections. It has been demonstrated in vitro that interferon-gamma (IFN-γ) significantly augments the activities of gentamicin and vancomycin against Enterococcus faecalis resistant to these antibiotics. The present study was aimed at determining whether this beneficial effect of IFN-γ on antienterococcal antibiotic activity can be validated in vivo. Following intraperitoneal inoculation in mice with a gentamicin- and vancomycin-resistant E. faecalis clinical isolate, the animals received IFN-γ, antibiotic or a combination of both agents, subcutaneously, at determined dosing regimens. Treatment with IFN-γ alone significantly improved survival of infected animals in a dose-dependent manner. High dose IFN-γ was not beneficial and the level of enterococcal infectious burden influenced the effectiveness of the cytokine. The addition of IFN-γ to therapy with gentamicin or vancomycin, or a combination of both antibiotics was associated with a marked increase in survival of infected non-neutropenic mice compared to treatments with the agents alone. However, the same treatments made in infected neutropenic mice did not show an enhancement effect by IFN-γ after a combination therapy with antibiotics. In a study to examine pharmacokinetic interactions, concurrent administration with IFN-γ significantly modified the disposition of gentamicin but not that of vancomycin. The results of this study suggest that the use of IFN-γ in combination with vancomycin or gentamicin is a new treatment option that might improve the outcome of therapy of multidrug-resistant E. faecalis infections.     

Susceptibility of Polish clinical strains of Yersinia enterocolitica serotype O3 to antibiotics

A total of 199 clinical strains of Yersinia enterocolitica serotype O3, biotype 4 were tested for their susceptibility to antibiotics (158 strains carried the virulence plasmid pYV and 41 strains did not). A total of 114 isolates were tested by a standard disk diffusion method for 21 antibiotics. Almost all strains tested were resistant to ampicillin and cefazolin and susceptible to amoxycillin/clavulanate, cefaclor, cefamandole, cefuroxime, cefotaxime, ceftriaxone, aztreonam, imipenem, gentamicin, amikacin, netilmicin, tetracycline, doxycycline, chloramphenicol, ciprofloxacin, sulphamethoxazole, trimethoprim, co-trimoxazole and furazolidone. In addition, minimal inhibitory concentrations of 15 antibiotics were determined by the agar dilution method for all 199 strains (158 carrying plasmid pYV and 41 strains that did not). Third-generation cephalosporins such as cefotaxime and ceftriaxone and a fluoroquinolone (ciprofloxacin) were the most active antimicrobial agents tested followed by aztreonam, imipenem, trimethoprim, tetracycline, gentamicin, chloramphenicol, amoxycillin/clavulanate, cefaclor, cefuroxime, amikacin, furazolidone and sulphamethoxazole. The present study demonstrated a high susceptibility of clinical strains of Y. enterocolitica to most of the tested antibiotics. In general there was no significant difference between susceptibility to antibacterial agents of strains with or without plasmid pYV.     

刺异叶花椒化学成分研究

目的　研究刺异叶花椒(Zanthoxylum dimorphophyllum Hemsl. var spinifolum Rhed . et Wils)的化学成分。方法　采用现代色谱技术进行化学成分的分离,运用光谱方法确定所分离化合物的结构。结果　分离得到5个化合物,分别鉴定为6-(3′-甲基2′,3′-丁二醇基)-7-乙酰氧基香豆素(I) ,6-(3′-甲基-2′,3′-丁二醇基) 香豆素-7-O-β-D-吡喃葡糖苷(II) ,正二十六烷酸(III) ,葡萄内酯(IV) ,5 ,3′-二羟基-4-甲氧基-二氢黄酮-7-[O-β-D-吡喃葡萄糖(6→1)-α-L-鼠李糖]苷(V)。结论　化合物I -V均为首次从该植物中分得,其中I为新化合物     

大黄、枳实、厚朴不同炮制品对小承气汤中药效组分的影响

目的研究大黄、枳实、厚朴饮片变化对小承气汤药效组分的影响,以期为临床的合理应用和饮片的质量标准提供参考。方法采用HPLC法分别测定各类成分。大黄游离蒽醌类(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–0.1%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长254 nm。大黄结合蒽醌类(番泻苷B、番泻苷A):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;柱温30℃;进样量10μL;检测波长340 nm。枳实黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温40℃;进样量10μL;检测波长283 nm。厚朴木脂素类成分(和厚朴酚、厚朴酚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长294 nm。结果小承气汤配伍剂量(大黄12 g–炒枳实9 g–姜厚朴6 g)不变,大黄、枳实、厚朴饮片改变时,小承气汤药效组分总量变化规律为:大黄–枳实–姜厚朴酒大黄–炒枳实–姜厚朴熟大黄–炒枳实–姜厚朴大黄炭–炒枳实–姜厚朴≈小承气汤大黄–炒枳实–厚朴,变化率分别为酒大黄组(6.561%)、熟大黄组(4.222%)、大黄炭组(0.118%)、枳实组(30.186%)、厚朴组(-11.218%)。除大黄炭组外,其余组的药效组分总量皆明显变化,其中枳实组变化最明显。结论同一味药材的不同炮制品在小承气汤处方中药效组分不同,对其他药味的影响亦不同,在小承气汤处方配伍中不可随意替代。     

NUDT15c.415C>T和TPMT*3C基因多态性检测方法的比较与临床应用

目的 建立准确、快速、经济的方法,检测NUDT15 c.415C>T和TPMT*3C基因多态性,探讨临床应用价值。方法 收集2017年5月-2018年5月期间福建汉族患者服用硫唑嘌呤2周以上的血清样本,提取DNA或白细胞后分别采用PCR-RFLP法、PCR-Sanger测序法和荧光定量PCR法对NUDT15 c.415C>T和TPMT*3C进行基因多态性分型,比较这3种方法的准确性、简便性及经济性。根据白细胞值分组,结合临床资料,探讨基因多态性等因素与硫唑嘌呤致白细胞减少的相关性。结果 共纳入129例患者,其中硫唑嘌呤致白细胞减少15例（11.6%）。3种方法的基因多态性检测结果一致,TPMT*3C未发现突变纯合子。携带NUDT15c.415C>T突变等位基因者服用硫唑嘌呤致白细胞减少的风险高于携带野生等位基因者（OR=6.2,95%CI：2.5~15.4,P=0.000 054）,而携带TPMT*3C突变等位基因者与野生等位基因者出现白细胞减少比例并无显著性差异（P=0.393）。NUDT15c.415C>T基因多态性预测白细胞减少敏感度为53.3%,特异度为85.1%,ROC曲线AUC为0.69。结论 3种方法都可用于临床检测NUDT15 c.415C>T和TPMT*3C基因多态性。PCR-RFLP法不需要专用试剂盒,也不需要昂贵的仪器设备,成本较低,过程简单,易于操作,特别适合条件有限的单位开展工作。福建汉族患者在服用硫唑嘌呤前进行NUDT15c.415C>T基因多态性检测比TPMT*3C更具临床价值。     

3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对HepG2细胞体外抑制作用研究

目的探讨3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞体外抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法考察药物对肝癌细胞Hep G2、宫颈癌细胞He La、结肠癌细胞HT-29、心肌细胞H9C2、犬肾上皮细胞MDCK和血管内皮细胞HY926的细胞毒性,利用细胞染色法观察不同浓度3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞形态的影响,流式细胞术评价该化合物诱导Hep G2细胞的凋亡。结果 3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯具有较好的抑制Hep G2细胞增殖活性作用,其半数有效抑制浓度(IC50)为8.28μmol/L,明显强于甘草次酸的活性(IC5050μmol/L)。3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯及其合成原料甘草次酸、3-甲氧基肉桂酸对非肿瘤细胞MDCK、HY926、H9C2细胞毒性较弱(IC5024μmol/L)。3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯浓度在12.5μmol/L时,对MDCK、HY926、H9C2细胞抑制率分别为17.05%、16.08%、4.66%,与对Hep G2细胞的抑制效果相比差异明显。不同浓度3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞Giemsa染色、H33342染色的细胞形态有明显差异。随着3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯浓度的升高,早期凋亡率逐渐增加,而晚期凋亡率无明显变化,提示3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯可以有效地诱导细胞早期凋亡,并呈现一定的量效关系。结论 3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯具有良好的抗肿瘤作用,对Hep G2细胞抑制效果最好,对非癌细胞MDCK、HY926、H9C2没有明显抑制效果,该作用主要通过诱导Hep G2细胞凋亡,且呈现一定的量效关系。     

夏天无提取物在小鼠体内药动学研究

目的 建立测定阿片碱在小鼠血浆中浓度的LC-MS/MS方法,并将该方法用于夏天无提取物在小鼠体内的药动学研究。方法 采用LC-MS/MS法。色谱条件采用安捷伦Zorbax C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm）,流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱;体积流量：0.2 mL/min;柱温：35 ℃;进样量：5 μL。质谱条件采用离子源：ESI源,正离子检测,高纯氮气用作干燥气（15 L/min）和气帘气（50 L/min）,气体温度340 ℃;以多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）为扫描模式。采用回归方程计算小鼠血浆中阿片碱。小鼠ig给予夏天无提取物的羧甲基纤维素钠混悬液,制备血药质量浓度-时间曲线,计算药动学参数。结果 阿片碱在0.4～200.0 ng/mL线性关系良好,精密度RSD均小于15%,准确度在±15%以内,提取回收率在90%以上,基质效应在90%～110%。药动学参数最大血药浓度（C_max）和达峰时间（t_max）分别为134.6 ng/m、1.5 h。结论 该方法适合小鼠ig夏天无提取物后阿片碱在小鼠体内的药动学研究。     

New palytoxin-like molecules in Mediterranean Ostreopsis cf. ovata (dinoflagellates) and in Palythoa tuberculosa detected by liquid chromatography-electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry

A rapid, high resolution liquid chromatography coupled with ElectroSpray Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry (ESI/TOF/MS) method was developed for the determination of the toxin pattern in cultured cells of Ostreopsis cf. ovata from the Mediterranean Sea. The samples were separated on a Phenomenex Luna 3μ HILIC 200A (150 × 2.00 mm) and analyzed by LC/TOF/MS with electrospray ionization (ESI) interface in positive ion mode. The method developed here provides the capability for a fully automated analysis, which requires relatively easy sample preparation and gives clean and simple chromatograms. The method was successfully applied to the determination of ovatoxin-a, mascarenotoxin-a and four new palytoxins in O. cf. ovata. Another new palytoxin was detected in the standard material from Palythoa tuberculosa provided by Wako Chemicals.