Beclin 1蛋白增强三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的研究

目的 探讨Beclin 1蛋白与三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的关系.方法 应用慢病毒介导pLenO-GTP-BECN1表达载体稳定转染至BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞,设立对照组.使用不同浓度5-Fu处理各组细胞,MTT法比较细胞对5-Fu的敏感度;流式细胞术和Hoechst33342实验检测细胞凋亡情况;Westem blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8表达情况.结果 成功构建稳定表达Beclin 1蛋白的BT-549细胞株.pLenO-GTP-BECN1组对5-Fu敏感度显著高于其他两组;5-Fu作用48 h后,pLenO-GTP-BECN1组的IC50为(3.54±0.20)μg/ml,显著低于空白载体pLenO-GTP组(14.45±1.81) μg/ml和空白组(79.40±8.34)μg/ml (F=207.902; P＜0.00).5-Fu作用前,pLenO-GTP-BECN 1组凋亡率为(12.14±0.76)％,同pLenO-GTP组(13.57±1.04)％和空白组(13.75±1.29)％(F=2.096;P=0.204)之间差异并无统计学意义;5-Fu作用48 h后,pLenO-GTP-BECN1组凋亡率为(51.01±3.26)％,显著高于pLenO-GTP组(42.17±4.6)％和空白组(38.42±2.93)％(F=9.32;P＜0.01);接受5-Fu处理后,pLenO-GTP-BECN1组细胞核凋亡特征改变较其他两组更明显.5-Fu作用后,pLenO-GTP-BECN1组细胞Caspase-3相对表达量为(0.57±0.0028),显著高于pLenO-GTP组(0.42±0.010)和空白组(0.30±0.046)(F=46.134;P＜0.01);pLenO-GTP-BECN1组细胞Caspase-8相对表达量为(0.44±0.0038),显著高于pLenO-GTP组(0.18±0.0095)和空白组(0.27±0.00060)(F=1006.757;P＜0.00).结论 Beclin 1显著提高三阴性乳腺癌细胞对5-Fu的敏感度,其中促进凋亡发生可能是重要机制之一.     

自噬相关基因Beclin1 在乳腺癌发生发展及治疗中的作用

乳腺癌是女性最常见的、发病率位居恶性肿瘤首位的肿瘤。自噬是一种高度保守的溶酶体依赖性分解代谢途径,参与细胞的生理和病理过程,是细胞维持自稳态的重要机制之一,并对肿瘤的生物学有着复杂且重要的作用。Beclin1 是第一个在哺乳动物中发现的与自噬相关的抑癌基因,其作为自噬体形成过程中的重要分子之一,是调控细胞自噬活性的关键靶点。近年来的研究发现,Beclin1 与乳腺癌的发生发展及预后密切相关。其不仅可以降低乳腺癌的发生概率,也能促进乳腺癌的进展。同时,Beclin1 也参与影响乳腺癌的辅助治疗效果,既可以影响化疗药物诱导的乳腺癌细胞的凋亡,也是乳腺癌内分泌治疗耐药的主要原因之一。Beclin1 与HER2 之间的相互作用也影响着靶向药物的疗效。因此本文就Beclin1 与乳腺癌的发生发展及其在治疗中的作用进行综述。     

mTOR蛋白和Beclin 1蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨三阴性乳腺癌组织中mTOR蛋白、Beclin 1蛋白的表达,以及二者与三阴性乳腺癌各临床病理参数之间的关系。方法:检测mTOR蛋白和Beclin 1蛋白在80例三阴性乳腺癌组织及62例癌旁组织中的表达情况,并分析其表达与患者临床病理参数之间的关系,以及两种蛋白之间的相关性。结果:mTOR和Beclin 1蛋白在三阴性乳腺癌组织中阳性率分别为67.5%（54/80）及30%（24/80）,在癌旁组织中阳性率为35.5%（22/62）及93.5%（58/62）,差异具有统计学意义;mTOR蛋白的阳性表达与淋巴结转移呈正相关（P＜0.05）;Beclin 1蛋白阳性表达与组织学分级呈负相关,与Ki67的表达及TNM分期呈正相关,mTOR蛋白和Beclin 1蛋白表达呈负相关（P＜0.05）。结论:mTOR蛋白和Beclin 1蛋白的异常表达可能参与三阴性乳腺癌的发生发展。     

自噬相关基因Beclin1与乳腺癌病理相关性分析

目的 探讨自噬相关基因Beclin1在乳腺癌中的表达情况和与乳腺癌相关病理的相关性.方法 选取120例乳腺癌患者作为研究对象,将其分为恶性组,所有患者均行手术或空心针穿刺病理证实为乳腺癌患者,取同期120例良性乳腺肿瘤患者作为良性组,另取同期120例健康者的乳腺组织进行分析,将其分为对照组.分析三组患者自噬相关基因Be...     

三阴乳腺癌细胞中Atg13基因的过表达与化疗耐药的研究

目的 探讨自噬相关基因13（Atg13）与三阴性乳腺癌的化疗耐药之间的关系。方法 间歇刺激法构建对阿霉素耐受的MDA-MB-231 TNBC细胞株（命名为MDA-MB-231/Dox）,并采用药物敏感实验和细胞凋亡实验（TUNEL染色）对耐药细胞株MDA-MB-231/Dox的耐药表型进行鉴定;蛋白免疫印迹实验检测敏感细胞MDA-MB-231和耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达情况,免疫荧光法测定细胞内的LC3B荧光斑点数;脂质体转染重组干扰质粒sh-Atg13至耐药细胞MDA-MB-231/Dox中,并经嘌呤霉素筛选得到稳转细胞（命名为MDA-MB-231/Dox + sh-Atg13）,蛋白免疫印迹实验检测稳转细胞MDA-MB-231/Dox+sh-Atg13及空载体对照细胞MDA-MB-231/Dox+control plasmid中的Atg13蛋白表达水平,同时检测细胞内的自噬水平（自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达量及LC3B荧光斑点数）及各组细胞对Dox的药物敏感性。结果 成功构建对Dox耐药的TNBC细胞株MDA-MB-231/Dox,并且发现耐药细胞中的基础自噬水平显著高于亲本细胞MDA-MB-231（P<0.05）。重组干扰质粒sh-Atg13抑制Atg13基因表达后,使得耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬体标志分子LC3B蛋白表达量显著降低（P<0.05）,且耐药细胞对Dox的药物敏感性增加（IC50值显著降低,P<0.05）。结论 在TNBC细胞MDA-MB-231中,Atg13参与了细胞对Dox获得性耐药的产生。     

ZIC1过表达对三阴性乳腺癌细胞增殖及药物敏感性的影响

目的探讨ZIC家族成员1(Zic family member 1,ZIC1)过表达对三阴性乳腺癌细胞增殖及药物敏感性的影响。方法将转染ZIC1基因和空载体的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分别作为A组和B组,将转染ZIC1基因和空载体的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468分别作为C组和D组。分别采用蛋白质印迹(Western blot)法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ZIC1蛋白和ZIC1 mRNA的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力及对化疗药物顺铂、环磷酰胺、多西他赛、姜黄素、斑蝥素和芹菜素的敏感性。结果A组细胞中ZIC1 mRNA和ZIC1蛋白的相对表达量均明显高于B组(P﹤0.01),C组细胞中ZIC1 mRNA和ZIC1蛋白的相对表达量均明显高于D组(P﹤0.01)。培养24、36、48、60、72 h时,A组细胞的光密度(OD)值均低于同时间点B组细胞(P﹤0.05),C组细胞的OD值均低于同时间点D组细胞(P﹤0.05)。环磷酰胺、多西他赛、芹菜素对A组细胞的半数抑制浓度(IC50)均低于B组细胞(P﹤0.05),多西他赛和芹菜素对C组细胞的IC50均低于D组细胞(P﹤0.05)。结论ZIC1基因过表达能有效抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的增殖,并能增强乳腺癌细胞对环磷酰胺、多西他赛及芹菜素的药物敏感性。     

自噬/Beclin1调节因子1通过Akt-Bad-Bcl-2通路降低乳腺癌化疗敏感性

目的 检测自噬/Beclin1调节因子1(Ambra1)在乳腺癌中的表达及对化疗敏感性的影响,并探讨可能的机制。方法 (1)临床标本测定：回顾性收集2018-03-01-2019-12-30在广西医科大学第二附属医院行手术切除的42例乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学方法检测Ambra1的表达。(2)细胞实验：通过Ambra1慢病毒表达载体(OE),使Ambra1在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞高表达,以空载(Empty)作为对照。蛋白质印迹法分别检测细胞内Akt/pAkt、Bad/pBad^s136、Bcl-2和Bax的表达,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Akt mRNA表达;同时,细胞用紫杉醇(PTX)处理后,细胞计数盒8(CCK8)法和流式细胞术分别检测细胞存活和凋亡。为了研究pAkt的作用,细胞在感染OE的同时,使用GSK690693(GSK)抑制Akt磷酸化,蛋白质印迹法检测Bad/pBad^s136、Bcl-2和Bax表达,流式细胞术和CCK8法分别检测紫杉醇诱导的凋亡和细胞存活。结果 (1)临床标本测定...     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的机制研究

目的:研究miR-520a-3p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响,并探索潜在的分子机制。方法:收集2015年4月至2017年10月在我院乳腺外科确诊的45例乳腺癌标本,实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-520a-3p的表达水平。分析miR-520a-3p与乳腺癌化疗耐受和肿瘤生物学特征的相关性。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABCG2）mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测ABCG2的表达。转染miR-520a-3p mimic后,采用细胞毒性实验观察乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miR-520a-3p升高后,ABCG2 mRNA和蛋白的表达变化。进一步采用双荧光素酶活性实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低（P＜0.05）,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与高TNM分期（III期）和淋巴结转移相关（P＜0.05）。miR-520a-3p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降（P＜0.05）,而ABCG2的表达水平则明显升高（P均<0.05）。上调miR-520a-3p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强（P＜0.05）,而ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因结果则证实ABCG2是miR-520a-3p的靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转MCF-7/Doc对多西他赛的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。     

自噬基因Beclin1在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，以手术、铂类和紫杉烷类药物为主的治疗方案已被确立为卵巢癌治疗的标准，但其死亡率仍位居妇科肿瘤之首。自噬是一种高度保守的细胞代谢过程，参与细胞的病理、生理等过程。近年来研究发现自噬与肿瘤有重要而复杂的关系。Beclin1是自噬体形成过程中重要的靶点，具有抑制肿瘤生长的作用，但目前Beclin1与卵巢癌的关系尚不清楚。本文将从Beclin1与卵巢癌发生发展、治疗及耐药的关系这三个方面进行综述，以期为卵巢癌早期诊断及肿瘤的治疗提供新的思路。     

胃癌组织Beclin1表达与幽门螺杆菌感染的相关性

目的:探讨胃癌组织自噬相关蛋白Beclin1的表达和临床意义,及与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性.方法:应用免疫组化法检测120例胃癌和配对正常胃组织中自噬相关蛋白Beclin1的表达;分析Beclin1的表达和临床病理学参数的关系;分析Beclin1的表达和无疾病进展生存(disease free survival,DFS)的相关性;应用碳14呼气试验检测胃癌患者幽门螺杆菌的感染,并分析Beclin1的表达和HP感染的相关性.结果:Beclin1在胃癌和正常胃组织的高表达率分别为59.2%(71/120)、36.7%(44/120),胃癌组织Beclin1的高表达率显著高于正常胃组织,差异有统计学意义(P=0.004).Beclin1的高表达与胃癌患者pTNM分期(P<0.001)和区域淋巴结转移(P<0.001)有显著负相关性.与Beclin1高表达的患者比较,Beclin1低表达患者的中位DFS显著缩短(21 vs 25个月,P=0.032).HP阳性胃癌组织的Beclin1高表达率显著高于HP阴性者(71.0%vs 43.1%,P=0.002);Spearmen相关性检验显示HP感染和Beclin1表达有显著相关性(γ=0.280,P=0.002);logistic回归分析显示HP感染对Beclin1表达有显著影响(P=0.009).结论:胃癌组织Beclin1表达水平增高;Beclin1高表达提示较好的预后;HP感染与Beclin1表达有显著相关性.     

miR-144和lncRNADNAJC3-AS1在乳腺癌组织中的表达及其在在乳腺癌 细胞MCF-7化疗耐药中的作用

目的：探讨miR-144及长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA）DNAJC3-AS1在乳腺癌（breat cancer, BC）组 织中的表达及其对BC MCF-7细胞化疗耐药的影响。方法：选取2012年1月至2016年12月于三二〇一医院肿瘤内科收治的 196例BC患者的肿瘤组织及其配对癌旁组织，采用qPCR法检测DNAJC3-AS1、DNAJC3及miR-144在BC组织中的相对表达量， 分析其对患者生存期的影响；荧光素酶报告基因实验验证DNAJC3-AS1与miR-144的靶向结合关系； 将DNAJC3-AS1过表达质 粒及miR-144 mimics转染MCF-7细胞，采用qPCR验证转染效果。CCK-8实验检测过表达DNAJC3-AS1及过表达miR-144对 MCF-7细胞增殖及顺铂敏感性的影响。结果：DNAJC3-AS1及其宿主基因DNAJC3在BC组织中均呈高表达（均P<0.01），且两 者表达水平呈正相关（r=0.451， P<0.01），并且高表达DNAJC3-AS1和DNAJC3的患者生存期较短（均P<0.01）；miR-144在BC组 织中呈低表达（P<0.01），且与DNAJC3-AS1呈负相关（r=–0.524， P<0.01)。转染后细胞中DNAJC3-AS1过表达平均倍数为13.47 倍（P<0.01），miR-144过表达平均倍数为20.27倍（P<0.01）；生物信息学分析和荧光素酶报告实验证实DNAJC3-AS1能够与miR-144 靶向结合。成功构建过表达DNAJC3-AS1和miR-14的MCF-7细胞，与对照组相比，DNAJC3-AS1过表达组细胞增殖能力显著增 强（P<0.01）、对顺铂的敏感性显著降低 （P<0.01），而 miR-144 过表达组细胞对顺铂的敏感性显著增加 （P<0.01）。结论：miR-144和 lncRNADNAJC3-AS1在BC组织中均高表达，miR-144可通过靶向DNAJC3-AS1从而提高BC MCF-7细胞对顺铂的敏感性。     

miR-340通过下调 CCND1 表达增加结直肠癌细胞对5-Fu的耐药

目的:探讨细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的编码基因CCND1 miR-340介导的逆转结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药的机制.方法:采用瞬时转染技术将结直肠癌细胞HCT116、SW480株分别转染si-CCND1和miR340-mimic.应用MTT法检测转染后的结直肠癌细胞对5-Fu敏感性的变化,应用双荧光素酶试验验证CCND1对miR340参与的影响结直肠癌细胞对5-Fu敏感性的影响.结果:瞬时转染siCCND1和过表达miR-340后,结直肠癌HCT116和SW480细胞的IC50值均显著低于对照组(10,10 vs 20 μmol/L和20,20 vs 40 μmol/L,均P＜0.05).共转染CCND1 3'UTR野生质粒和miR-340 inhibitor的结直肠癌HCT116和SW48细胞荧光素酶的活性显著高于共转染空载体和mimic细胞(P＜0.01).结论:CCND1作为不良因子通过抑制miR340的表达进而发挥增加结直肠癌细胞对5-Fu耐药的作用.     

miR-425 regulates lipophagy via SIRT1 to promote sorafenib resistance in liver cancer

Liver cancer is one of the most malignant cancer, with poor outcomes and a high incidence rate, and current treatment approaches to prevent tumor progression and development remain unsatisfactory. Therefore, it is urgent to explore novel methods to inhibit tumor growth and metastasis. Autophagy is a highly conserved process associated with metastasis and drug resistance. Lipids are selectively recognized and degraded via autophagy; thus, autophagy is a crucial process to maintain tumor self-protection. MicroRNA (miR)-425 is a tumor-associated gene involved in liver cancer development that can induce cell proliferation and drug resistance. Using Cell Counting Kit-8 assays, western blot analysis and immunofluorescence assays, the present study revealed that inhibition of miR-425 promoted lipophagy by mediating the autophagy process, which in turn helps to promote sorafenib resistance. Using a bioinformatics website, it was revealed that autophagy promoted lipophagy by targeting silent information regulator 2 homolog 1 (SIRT1). The results of luciferase reporter assays supported this finding, and rescue experiments provided additional evidence. Overall, the current results suggested that inhibition of miR-425 expression increased SIRT1 expression to promote lipophagy, leading to the inhibition of liver cancer cell proliferation.     

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制.方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平.利用脂质体转染技术分别将miR-361-5...     

miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的：探讨miR-216b-5p 对食管癌Eca109 细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR 法检测miR-216b-5p 在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109 和耐药细胞Eca109/DDP 中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic 及mimic NC、自噬相关蛋白5（ATG5）过表达质粒转染到Eca109/DDP 细胞中,用CCK-8、EdU 法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况, WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62 表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果：miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109 和Eca109/DDP 细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP 细胞的增殖并诱导凋亡（均P<0.05）,减少细胞中自噬小体数量（P<0.05）,下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62 蛋白水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达（P<0.05）,过表达ATG5 可使miR-216b-5p mimic 对Eca109/DDP 细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱（均P<0.05）,自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1 表达升高（均P<0.05）。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p 过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）。结论：miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。