骨关节炎欠骨细胞凋亡调控基因的研究

目的 比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞ｂａｘ、ｂｃｌ－２的表达及细胞凋亡状况。方法 取９例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本,以６例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照,采用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测dirｂａｘ、ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达,免疫组化检测ｂａｘ、ｂｃｌ－２蛋白;应用ＴＵＮＥＬ方法进行凋亡细胞原位检查。结果 骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达ｂａｘ、     

骨关节炎软骨细胞凋亡调控基因的研究

目的　比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞bax和bcl 2的表达及细胞凋亡状况。　方法　取 9例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本 ,以 6例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照 ;采用逆转录 /聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bax和bcl 2mRNA表达 ,免疫组化检测bax和bcl 2蛋白 ;应用TUNEL方法进行凋亡细胞原位检测。　结果　骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达bax和bcl 2mRNA ;骨关节炎关节软骨细胞baxmRNA表达量较正常对照显著增高 (P <0 0 1) ,bcl 2mRNA表达量也高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,两组间bax/bcl 2表达量的比值差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;免疫组化可检测到相应表达水平的蛋白 ;骨关节炎软骨细胞凋亡 (4%～ 14% )多于正常对照 (0～ 2 % )。　结论　软骨细胞凋亡受bax和bcl 2共同调节 ;bax和bcl 2的共同调节结果可能是OA患者软骨细胞凋亡增加 ,但凋亡率不高、病理过程进展缓慢的一个重要的原因     

骨关节炎软骨细胞凋亡机制的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的关节退行性疾病,严重影响人类健康.近年研究显示,软骨细胞过度凋亡在OA的发病中产生了重要影响.软骨细胞凋亡的机制目前尚不明确,一般认为,体内外各种凋亡诱导因子通过刺激细胞内多条信号转导通路,导致下游凋亡途径的激活,最终大多汇集为caspase级联放大反应这一共同通路.阐明关节软骨细胞凋亡的机制,将有助于OA的防治.为此,本文针对这方面的研究现状作了简要的综述.     

JAK2信号通路介导人恶性黑素瘤A375细胞的自噬和凋亡机制研究

目的:探讨JAK2/STAT3信号通路介导人恶性黑素瘤A375细胞的自噬和凋亡活性,为黑素瘤的发生机制和潜在干预靶点提供理论依据。方法:人恶性黑素瘤A375细胞经复苏和传代后随机分为对照组和JAK2抑制剂干预组,比较两组细胞培养12h、24h、48h和72h的增殖率(采用MTT定量法)及凋亡率(采用流式细胞术),培养72h的细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、LC3B和p-STAT3蛋白相对表达量(采用Western blot法),检测IL-6和TNF-α水平(采用ELISA法),检测Caspase-3和Bax/Bcl-2 mRNA相对表达量[采用反转录PCR(RT-PCR)法]。结果:两组培养12h、24h、48h和72h的细胞增殖率比较,干预组各时间点均明显小于对照组,而凋亡率明显大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组培养72h的细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量、IL-6和TNF-α水平明显低于对照组,但LC3B蛋白、Caspase-3和Bax/Bcl-2 mRNA相对表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:JAK2/STAT3信号通路异常激活可能是人黑素瘤A375细胞恶性增殖的重要通路之一,靶向干预JAK2/STAT3信号通路可以促进细胞自噬和凋亡活性上调,有望成为临床干预的重要靶点。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的实验研究

目的 研究Yes相关蛋白（YAP）通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的机制。 方法 用siRNA分别沉默YAP基因和LATS1基因来调控YAP的活性,通过Real-time PCR 检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及SOX9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测SOX9的表达和GSK3β的磷酸化水平。 结果 沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少,c-Myc和Nanog基因表达减少,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默LATS1基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加,c-Myc和Nanog基因表达增加,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的SOX9表达上调。 结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9的表达。     

治疗型关节炎护膝对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2及p53的影响

目的：通过检测OA护膝对日本大耳白兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2、p53mRNA表达的影响,探讨OA护膝防治兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的分子生物学机制。方法：健康6月龄日本大耳白兔54只,雌雄各半,空腹体重2～2．2kg,采用改良Huhh法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,即正常组、模型组、对照组（微波组）、实验1组（电组）、实验2组（热组）、实验3组（护膝组）．正常组10只,常规饲养;模型组9只,造模后常规饲养;对照组9只,微波仪治疗30min,每日1次;实验1组9只,电（疏密波）治疗30min,每日1次;实验2组8只,热（热软膜）治疗30min,每日1次;实验3组9只,电热（OA护膝）治疗30min,每日1次,连续治疗16周时处死。采用荧光定量RT—PCR法检测各组膝关节软骨细胞Bcl-2、p53mRNA的表达水平。结果：16周时,各组所有抽提的兔关节软骨组织总RNA的OD260／OD280值均在1．80～2．00范围内,表明RNA纯度高：模型组、对照组、实验1组、实验2纽、实验3组关节软骨细胞p53的mRNA相对呈高表达,而关节软骨细胞Bcl-2的mRNA相对低表达,与正常组差异有统计学意义（P〈0．01）：关节软骨细胞Bcl-2、p53的mRNA相对表达水平,对照组、实验1组、实验2组、实验3组与模型组差异有统计学意义（P〈0．01）;对照组、实验1组、实验2组与实验3组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：OA护膝能提高关节软骨细胞Bcl-2 mRNA表达,减弱软骨细胞p53mRNA表达,从而抑制软骨细胞凋亡,延缓膝关节软骨的退变：     

柚皮苷抑制骨关节炎软骨细胞凋亡实验研究

目的研究柚皮苷在炎症环境下对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法采用不同浓度（0、0．1、1、10、100 mg／L）柚皮苷对 OA 软骨细胞进行预处理2 h 后,加入或不加入炎症因子混合液（白细胞介素-1β5 ng／ml 和肿瘤坏死因子-α20 ng／ml）共作用24 h。首先检测柚皮苷对炎症环境下软骨细胞活性和凋亡的影响,然后检测软骨细胞在柚皮苷作用下的一氧化氮（NO）水平及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3、caspase-8活性变化情况。结果柚皮苷预处理后软骨细胞在炎症因子刺激下发生凋亡显著减轻,且其抑制细胞凋亡作用具有浓度依赖性。进一步分子生物学检测显示,柚皮苷对 NO 生成及激活的 caspase 信号转导通路具有明显抑制作用。结论柚皮苷能有效抑制人 OA 软骨细胞凋亡,其作用机制可能是柚皮苷阻断了 NO 产生并抑制了下游的 caspase 信号通路,有望应用于 OA 治疗新药的研发。     

不同浓度地塞米松对人骨关节炎软骨细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响

目的糖皮质激素会破坏软骨,通过观察地塞米松对人骨关节炎软骨细胞(human articular chondrocytes,HACs)凋亡及Fas/FasL基因表达的影响,探讨其促进HACs凋亡的作用机制。方法取行人工膝关节置换的膝骨关节炎患者自愿捐赠软骨组织,体外分离培养HACs,取第2代细胞进行实验。将HACs分别置于含浓度为0.125、1.25、12.5、25及50μg/mL地塞米松培养液中,培养48 h后采用MTT法选择地塞米松最佳工作浓度进行后续实验。将HACs分别采用最佳工作浓度地塞米松(实验组)及不含地塞米松培养液(对照组)培养,0、24、48 h后行TMRE/Hoechst/Annexin V-FITC/7-AAD四重染色检测细胞凋亡,48 h后行实时定量PCR检测Fas/FasL mRNA表达,0、24、48 h后行免疫组织化学染色检测Fas/FasL蛋白表达。结果 25μg/mL浓度组细胞抑制率显著高于50μg/mL浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);与其他浓度组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05);选择25μg/mL浓度作为后续实验工作浓度。培养0、24、48 h,实验组HACs凋亡细胞百分比分别为5.8%±0.3%、27.0%±2.6%、36.0%±3.1%,呈明显时间依赖性(P<0.05)。培养48 h后实验组及对照组Fas mRNA相对表达量分别为(8.93±1.12)×10—3及(3.31±0.37)×10—3,FasLmRNA相对表达量分别为(5.92±0.66)×10—3及(2.31±0.35)×10—3,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随培养时间延长,实验组Fas及FasL蛋白表达逐渐增加,且各时间点均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论地塞米松可促进HACs细胞凋亡及上调凋亡基因Fas/FasL表达,为进一步探讨Fas/FasL信号通路在地塞米松促HACs凋亡中的作用提供了实验依据。     

膝关节骨关节炎发病过程中HSP70对软骨细胞凋亡的影响

目的:观察热休克蛋白70(HSP70)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白(caspase-3)在膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)发病过程中的表达,探讨其相关性。方法:40只3月龄SD大鼠分为两组,实验组30只,对照组10只。实验组采用Hulth法复制膝骨性关节炎模型,作前交叉韧带切断加内侧1/3半月板切除术,对照组不作特殊处理。造模后,不采取任何措施,自由饲养。分别在术后1、2、4周取材股骨端和胫骨端关节,对标本组织进行肉眼、免疫组化及光镜观察,采用Mankin改良的关节软骨病理评分标准进行组织学评分。结果:肉眼及光镜观察,实验组均可见KOA的改变,如滑膜增生、表层软骨糜烂等;同时,免疫组化中,术后1、2、4周HSP70的表达逐渐增加,caspase-3的表达先增加后降低,而对照组并无类似改变。Mankin评分显示1周分别和2、4周比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:膝关节骨关节炎发病过程中,热休克蛋白抑制软骨细胞凋亡,并对软骨细胞具有保护作用,这将为临床上诸保守治疗提供一定程度的客观科学依据。     

A型激酶锚定蛋白2基因表达对生长板软骨细胞功能的影响

目的:探讨A型激酶锚定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表达对生长板软骨细胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及细胞外基质代谢的影响及作用机制。方法:设计AKAP2过表达和基因敲除质粒转染GPCs对AKAP2进行过表达或干扰,构建AKAP2过表达阴性对照组(Vector组)、AKAP2过表达组(AKAP2 OE组)、AKAP2干扰阴性对照组(si-NC组)、AKAP2干扰组(si-AKAP2组)和AKAP2 OE+U0126组[U0126:细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路阻滞剂],记录各组GPCs细胞增殖活力及钙盐沉积情况,检测细胞外基质中Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COLⅡ)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear an...     

尿道下裂患者SOX9基因突变的研究

目的：探讨SOX9基因在尿道下裂发病中的作用。方法：收集96例先天性尿道下裂患者外周静脉血，提取DNA，采用PCR扩增直接测序的方法检测SOX9基因全部外显子序列。结果：在实验组尿道下裂患者和对照组的SOX9基因外显子片段中，我们未发现任何位点的突变。只是在外显子3的3’UTR发现了1个SNPA／C，经分析没有统计学意义。结论：SOX9基因在性别分化的初期起作用，其变异直接影响性剐取向，结果导致两性畸形或性反转，而非单纯性尿道下裂。     

藏红花素调节Hippo-YAP信号通路抑制膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡

目的 探讨藏红花素（crocin）调节Hippo/Yes相关蛋白（YAP）信号通路对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠分为CK组、Model组、低剂量crocin组（crocin-L组，10 mg/kg）、高剂量crocin组（crocin-H组，40 mg/kg）、塞来昔布组（CLCX组，10 mg/kg）、crocin-H+VTPF（YAP抑制剂）组（40 mg/kg+10 mg/kg)，每组12只。观察并记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化；ELISA法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶 (MMP）-3、MMP-13、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平；HE染色检测大鼠软骨组织病理变化并进行Mankin评分；TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡；免疫组化、Western blot检测Bcl2相关X蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、p-YAP、YAP蛋白表达。结果 与CK组比较，Model组大鼠热痛阈值、压痛阈值、p-YAP蛋白表达降低，软骨组织病理损伤严重，MMP-3、MMP-13、IL-1β、IL-6水平、Mankin评分、软骨细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、YAP蛋白表达升高（P＜0.05）；与Model组比较，crocin-L组、crocin-H组、CLCX组对应指标变化趋势与上述相反（P< 0.05）；VTPF减弱了高剂量crocin对KOA大鼠软骨细胞凋亡的抑制作用。结论 crocin可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制KOA大鼠软骨细胞凋亡。     

JAK2/STAT3信号通路在大脑缺血缺氧后小胶质细胞活化中的作用

缺血缺氧脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是导致新生儿死亡和婴幼儿神经发育障碍的主要原因,部分患儿有不同程度的神经系统后遗症,如脑瘫、认知和运动功能发育障碍。缺血缺氧可激活JAK2/STAT3信号通路,进而导致小胶质细胞异常活化,引发神经炎症反应;通过下调JAK2/STAT3信号通路可抑制小胶质细胞异常活化,改善神经系统炎性损伤。当前缺血缺氧脑病的治疗方法有限,因此研究小胶质细胞活化的调控机制对于缺血缺氧脑病的治疗具有重要临床价值。本文对JAK2/STAT3信号通路在小胶质细胞活化中的作用及二者相互关系的研究进展作一综述,以期为缺血缺氧脑病的治疗提供新的研究思路。     

Effect of the JAK2/STAT3 signaling pathway on epithelial mesenchymal transition of the peritoneum in uremic peritoneal dialysis rats

Objective To investigate whether the JAK2/STAT3 signaling pathway is involved in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) of peritoneal mesothelial cells in uremic peritoneal dialysis (PD) rats. Methods A total of 48 male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly separated into six groups: normal control group (NC group, n=8), sham group (n=8), uremic group (n=8), PD group (n=8), S3I-201 control group (n=8) and S3I-201 group (n=8). Uremic model generated by 5/6 nephrectomy surgery in rats was established. The rats of PD group, S3I-201 control group and S3I-201 group received daily infusion of 4.25% glucose-based peritoneal dialysate fluid (3 ml/100 g) from PD catheters for 28 days. Rats of S3I-201 group were injected with STAT3 inhibitor S3I-201 (2.5 mg/kg) solution from the catheters every other day; the same dose of the solvent of S3I-201 was simultaneously given to S3I-201 control group rats. After PD for 28 days, peritoneal function, pathologic changes, and microvessel density (MVD) were evaluated. Creatinine, urea nitrogen and interleukin-6 (IL-6) concentration in blood and dialysate, and protein and mRNA levels of phospho-JAK2 (p-JAK2), phospho-STAT3 (p-STAT3), E-cadherin, alpha-smooth muscle actin (α-SMA) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in peritoneum were determined. Results Uremia and peritoneal dialysate could aggravate the peritoneal function and elevate peritoneal thickness and MVD. They could also increased the concentration of IL-6 in blood and dialysate and the expression levels of α-SMA, VEGF, p-JAK2 and p-STAT3 in peritoneum, while lowering E-cadherin expression in peritoneum. These manifestations were even more remarkable in PD group compared to those in uremic group. There was no statistical difference between the S3I-201 control group and the PD group as regards all the index (all P＞0.05). Compared with the S3I-201 control group, the rats treated with S3I-201 showed better peritoneal function. S3I-201 could reduce peritoneal thickness (P＜0.05), MVD (P＜0.05), the concentration of IL-6 in blood and dialysate, the mRNA and protein expression of α-SMA, VEGF, p-JAK2 and p-STAT3 (all P＜0.05), while enhance the mRNA and protein expression of E-cadherin (all P＜0.05). Conclusions After STAT3 is inhibited, the peritoneal thickness, MVD and IL-6 concentration in PD rats are decreased, and EMT is also inhibited, while peritoneal function is improved. The JAK2/STAT3 signaling pathway may thus be involved in the process of EMT of peritoneum in uremic peritoneal dialysis rats by regulating the expression of IL-6.     

Potential involvement of SIRT1 in the pathogenesis of osteoarthritis through the modulation of chondrocyte gene expressions

SIRT1 has been implicated as a key factor in aging‐related diseases. Nevertheless, the role of SIRT1 in the pathogenesis of osteoarthritis (OA) is still unknown. We examined the expression of SIRT1 in cartilage samples and the effect of SIRT1 inhibition on chondrocyte gene expression changes to elucidate the role of SIRT1 in chondrocytes. SIRT1 expression was examined using cartilage samples from patients undergoing total knee arthroplasty and femoral head replacement by immunohistochemistry. The effect of SIRT1 inhibition by siRNA on chondrocyte gene expression was examined by real‐time PCR and Western blotting. SIRT1 expression was barely detectable in the severely degenerated cartilage while SIRT1 was clearly expressed in the less damaged cartilage. The inhibition of SIRT1 by siRNA induced OA‐like gene expression changes, namely the significant down‐regulation of aggrecan and up‐regulation of COL10A1 and ADAMTS‐5. Our observations suggest that SIRT1 expression decreases with development of OA and the reduction of SIRT1 in chondrocytes may cause chondrocyte hypertrophy and cartilage matrix loss. SIRT1 might play important roles in the pathogenesis of OA. © 2010 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29:511–515, 2011     

由IL-10/JAK2/STAT3通路探讨养血柔筋方对兔膝骨关节炎软骨损伤的研究

目的 由白细胞介素(IL)-10/Janus激酶(JAK2)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)通路探讨养血柔筋方对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)软骨损伤的影响及机制。方法 将新西兰雄兔分为空白组、KOA模型组、养血柔筋方组(50 mg/kg)、塞来昔布组(24 mg/kg)、JAK2激活剂组(50 mg/kg养血柔筋方+0.11 mg/kg AG490),每组6只。通过木瓜蛋白酶诱导KOA兔模型，造模成功后给予相应治疗。运用HE染色观察软骨组织病理变化，Mankin评分进行定量评分；透射电镜观察软骨组织的超微结构；ELISA测量血清IL-1β、IL-6含量；免疫组织化学检测软骨组织基质金属蛋白酶13(MMP13)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Ⅱ型胶原蛋白(COl-Ⅱ)蛋白表达；Western Blot检测软骨组织IL-10/JAK2/STAT3通路蛋白表达。结果 与空白组比较，KOA模型组中软骨组织病变严重，Mankin评分、IL-1β和IL-6含量、MMP13、p-JAK2和p-STAT3蛋白...     

藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK2/STAT3及凋亡因子表达的影响

也页目的：探讨藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3及凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠60只,随机选取10只为正常组（ N组）,其余采用单次腹腔注射链尿佐菌素（ STZ,45 mg/kg）制作DN模型,造模成功后随机分为糖尿病肾病组（DN）、藕节小剂量组（RL,1.5 g·kg-1·d-1）、中剂量组（RM,3.0 g·kg-1·d-1）、大剂量组（RH,6.0 g·kg-1·d-1）及氯沙坦钾组（LP,30 mg·kg-1·d-1）,均采用灌胃给药,N组和DN组给予等量蒸馏水。12周后检测大鼠生化指标;HE、Masson染色及电镜观察肾脏病理改变;免疫组化法测定p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2及Bax在肾组织表达情况;原位末端标记法（ TUNEL）检测肾组织细胞凋亡情况。结果：实验12周末,与N组比较,DN组大鼠肾小球肥大、系膜基质增多、细胞凋亡明显,BUN、Scr、24 h尿蛋白定量明显升高（P〈0.05）,肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达明显上调,Bcl-2表达下调（P〈0.05）;与DN组比较,藕节中、高剂量组肾脏病理改变减轻、细胞凋亡减少,24 h尿蛋白定量较DN组明显降低（P〈0.05）,但降尿蛋白作用弱于氯沙坦钾组,同时肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达下调,Bcl-2表达上调（P〈0.05）。结论：藕节可能通过上调Bcl-2在肾组织的表达,下调Bax、p-JAK2、p-STAT3的表达,从而减少尿蛋白,延缓DN进展。