脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾主肌肉实质的探讨

目的研究脾气虚证和脾不统血证模型大鼠骨骼肌组织线粒体能量代谢变化,探讨中医脾主肌肉理论的内涵实质。方法将48只SD雄性大鼠按随机数表法分为正常对照组、低分子肝素钠组、脾气虚组和脾不统血组,每组12只。复制脾气虚证和脾不统血证大鼠模型,测定各组大鼠骨骼肌ATP含量、线粒体呼吸链复合物(ComplexⅠ、ComplexⅡ、ComplexⅢ、ComplexⅣ)活性、柠檬酸合酶(CS)活性、mt DNA拷贝数、COXⅣ蛋白和Cyt-C蛋白及其mRNA表达量变化。结果与正常对照组比较,中期和末期脾气虚组和脾不统血组大鼠骨骼肌的ATP含量、线粒体复合物活性、CS活性、mt DNA拷贝数、COXⅣ蛋白及其mRNA表达量均降低,Cyt-C蛋白及其mRNA表达量均升高(P 0. 05,P 0. 01);与脾气虚组比较,中期和末期脾不统血组大鼠骨骼肌ATP含量、CS活性均降低(均P 0. 05);中期脾不统血组大鼠骨骼肌ComplexⅠ、ComplexⅡ、ComplexⅢ活性降低,末期脾不统血组大鼠骨骼肌ComplexⅠ、ComplexⅢ、ComplexⅣ活性降低(P 0. 05,P 0. 01);中期脾不统血组大鼠骨骼肌mt DNA拷贝数升高(P 0. 05);脾不统血组大鼠骨骼肌COXⅣ、Cyt-C蛋白及其mRNA表达量比较,差异无统计学意义(均P 0. 05)。结论脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠骨骼肌线粒体能量代谢障碍存在多方面的影响变化,且脾气虚证发展成为脾不统血证的过程中,大鼠骨骼肌能量代谢障碍逐渐加重。     

脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏能量代谢的比较研究

目的:研究脾气虚证和脾不统血证模型大鼠脾脏组织能量代谢变化及其差异,为科学解释中医脾脏理论内涵提供基础资料。方法:构建脾气虚证和脾不统血证大鼠模型,测定各组大鼠脾脏ATP含量、线粒体呼吸链复合物(ComplexⅠ、ComplexⅡ、ComplexⅢ、ComplexⅣ)活性、柠檬酸合酶(CS)活性和mtDNA拷贝数。结果:脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏ATP含量显著降低,呼吸链复合物活性、CS活性和mtDNA拷贝数较正常大鼠均发生显著改变,脾不统血证大鼠脾脏ATP含量、CS活性和mtDNA拷贝数与脾气虚证大鼠存在显著差异。结论:脾气虚证大鼠和脾不统血证大鼠脾脏组织线粒体能量代谢发生障碍,其柠檬酸循环和氧化磷酸化功能受到损伤,而脾不统血证和脾气虚证线粒体能量代谢障碍程度的不同是二者存在差异的重要原因。本研究认为,对中医脾虚证脾脏组织能量代谢功能损伤的研究能够积极的揭示脾虚证的科学本质。     

安寐丹通过线粒体介导的海马神经细胞凋亡改善睡眠剥夺模型大鼠的学习记忆水平

目的:探讨安寐丹通过线粒体介导海马神经细胞凋亡对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响。方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、安寐丹低、中、高剂量(4.86,9.72,19.44 g·kg~(-1)·d~(-1))组和艾司唑仑组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺14 d。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的含量。透射电镜观察海马区神经元线粒体形态结构,免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测海马区细胞色素C(Cyt-C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及Bcl-2,Bax mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组上平台潜伏期、游泳总路程延长,初次到达平台时间延长,跨越平台次数减少,目标象限时间显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,Bax蛋白及mRNA水平显著升高(P0.01),线粒体结构破坏,嵴断裂,肿胀变形;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,安寐丹低、中、高剂量组明显改善SD大鼠空间探索和定位航行水平(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平升高,Bax蛋白及mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01);线粒体损伤改善,水肿减轻;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P0.01)。结论:安寐丹能够改善睡眠剥夺大鼠学习记忆水平,其作用与线粒体介导的海马神经细胞凋亡,降低Cyt-C,Caspase-3等蛋白表达相关。     

慢性浅表性胃炎大鼠胃黏膜细胞凋亡与中医证型的相关性

目的探讨慢性浅表性胃炎（chronic superficial gastritis,CSG）大鼠不同证型胃黏膜细胞凋亡及其调控基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lym-phoma/Leukemia-2,Bcl-2）mRNA表达水平的变化,从细胞凋亡的角度揭示CSG各证候的实质。方法复制大鼠单纯CSG模型、脾虚CSG和湿热CSG模型,检测胃黏膜上皮细胞凋亡指数及其调控基因Bcl-2mRNA表达水平。结果三个模型组大鼠胃黏膜细胞凋亡指数均显著高于正常对照组,以脾虚CSG组最高。三个模型组较正常组Bcl-2mRNA表达均降低,以脾虚CSG组最低。结论 CSG大鼠胃黏膜细胞凋亡指数、Bcl-2mRNA表达水平与CSG证候有一定的相关性,以脾虚CSG组大鼠胃黏膜细胞凋亡指数最高和Bcl-2mRNA表达水平最低。     

石蒜碱调控线粒体氧化损伤介导人乳腺癌细胞自噬及凋亡作用机制

目的 研究石蒜碱介导人乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬及凋亡的作用机制。方法 采用CCK-8法检测石蒜碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）观察细胞形态;细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、线粒体膜电位;LSCM检测线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）开放情况;Western blotting检测线粒体自噬相关蛋白［线粒体内膜转位酶（translocase of inner membrane,TIM）、线粒体外膜转位酶（translocase of outer membrane,TOM）、E3泛素连接酶（E3 ubiquitin protein ligase,PARKIN）、PTEN诱导的激酶1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1）、微管相关蛋白轻链3（microtubule-associated protein light chain 3,LC3-B）、p62］和凋亡相关蛋白［半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、细胞色素C（cytochrome-C,Cyt-C）］的表达。结果 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC₅₀）值为6.21 μmol/L;石蒜碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;石蒜碱能够显著抑制细胞的增殖和迁移能力（P＜0.01）;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高（P＜0.01）,ROS水平升高（P＜0.01）,线粒体膜电位下降（P＜0.01）,MPTP开放（P＜0.01）;石蒜碱给药48 h后,细胞内TIM、TOM、p62和Bcl-2蛋白表达量下调（P＜0.01）,PARKIN、PINK1、LC3-B、Caspase-3、Bax和Cyt-C蛋白表达量上调（P＜0.01）,且呈浓度相关性。结论 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,并可通过调控线粒体氧化损伤介导MDA-MB-231细胞的自噬及凋亡。     

天麻素调控PINK1/Parkin-VDAC1信号改善CoCl2诱导的HT22细胞凋亡

目的：探讨天麻素对二氯化钴(CoCl₂)诱导的HT22细胞凋亡作用机制。方法：体外建立CoCl₂损伤HT22的细胞模型。分组为空白组,模型组,天麻素低、中、高剂量组,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率、JC-1检测线粒体膜电位(MMP)、DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平、二硫代硝基苯甲酸(DTNB)检测谷胱甘肽(GSH)含量;VDAC1基因过表达以及使用Parkin活性抑制剂后,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达水平。结果：天麻素降低HT22细胞凋亡率,抑制HT22细胞MMP降低,抑制HT22细胞ROS水平升高和GSH含量降低。Western Blot显示,天麻素抑制PINK1、Parkin和VDAC1表达,同时也能降低凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2比率、Cleaved-Caspase 3、Caspase 3、Cytochrome-c)表达水平;VDAC1过表达以及使用Parkin活性抑制剂Suramin后,PINK1与Parkin的蛋白表达水平不受影响,天麻素仍然表现出抑制凋亡相关蛋白水平的作用。结论：...     

连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡及Bax/Bcl-2,caspase9/XIAP mRNA表达的实验研究

目的观察连豆清脉方水提液对ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡干预及Bax/Bcl-2、caspase9/XIAP mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠动脉内皮细胞株(RAOEC),连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导RAOEC凋亡,采用流式细胞仪检测ANGⅡ诱导凋亡及线粒体膜电位改变,RT-PCR荧光相对定量检测Bax/Bcl-2及caspase9/XIAP mRNA表达水平变化,组间差异统计性分析采用Students T-test。结果 ANGⅡ诱导模型组内皮细胞诱导10 h后线粒体膜电位为(0.580±0.137),24 h凋亡率为30.4%±5.2%,连豆清脉方(500μg)组内皮细胞线粒体膜电位(4.361±1.251),24 h凋亡率为13.5%±3.8%,连豆清脉方能够部分抑制ANGⅡ诱导内皮细胞作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR荧光相对定量显示ANGⅡ组Bax和caspase9 mRNA水平显著升高(P<0.05),连豆清脉方干预组下调促凋亡蛋白Bax和caspase 9表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。结论连豆清脉方脉方能够稳定线粒体膜电位,通过干预Bax、Bcl-2和caspase 9 mRNA表达,抑制ANGⅡ诱导的内皮细胞凋亡。     

基于海马神经元线粒体自噬探讨脾气虚心神不足的可能机制

目的:通过检测脾气虚大鼠行为学及其海马神经元线粒体超微结构、基本功能和自噬水平,探讨脾气虚所致心神不宁的可能机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚组(模型组),每组8只;旷场实验检测大鼠行为学;透射电镜观察海马神经元线粒体超微结构;JC-1法检测海马神经元线粒体膜电位;ELISA法检测海马神经元线粒体ATP和反应性氧簇(ROS)水平; Western blot法检测海马线粒体PTEN诱导激酶1 (PINK1)、Parkin、微管相关蛋白轻链3(LC3)-I和II表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠在旷场的中心活动时间明显延长,周边活动时间缩短,运动距离和直立次数显著减少;海马神经元部分线粒体嵴消失,自噬样结构减少;海马神经元线粒体的ATP水平和膜电位下降明显,PINK1、Parkin和LC3-II表达及LC3-II/I比值均显著下降。结论:脾气虚所致心神不足与海马神经元线粒体损伤及其自噬水平低下有关。     

脾气虚大鼠胃黏膜细胞线粒体自噬相关蛋白表达的研究＊

目的 通过检测PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase protein 1，PINK1）-Parkin通路及自噬相关蛋白表达，探讨脾气虚胃黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组（模型组），每组8只；透射电镜观察胃黏膜细胞线粒体形态，JC-1法测量其膜电位（ΔΨm）；比色法测定其ATP含量和呼吸链复合物（respiratory chain complex，RCC）I-IV活性；Western blot法检测其RCCV、PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）-I和II及p62等表达。结果 与正常组比较，模型组胃黏膜细胞的线粒体嵴减少，ΔΨm和ATP水平下降，RCCI和IV活性降低，RCCV、PINK1、Parkin和LC3-II表达下降，但LC3-I和p62表达上升。结论 脾气虚胃黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与PINK1-Parkin通路抑制所导致的线粒体自噬水平低下有关。     

竹节香附素A体外诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨竹节香附素A（RaA）体外抗乳腺癌的作用机制。方法：体外培养乳腺癌细胞（MDA-MB-231）,分别用RaA及RaA联合乙酰半胱氨酸（NAC）干预后检测相关蛋白及信号通路的变化情况。结果：与空白组比较,RaA组抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.01）,促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌,提升MDA-MB-231细胞的活性氧（ROS）水平（P<0.01）,提升MDA-MB-231细胞B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）/B细胞淋巴瘤-2蛋白（Bcl-2）的比值（P<0.01）,上调MDA-MB-231细胞色素C（Cyt-C）、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）和抑癌基因53（P53）的蛋白水平（P<0.05,P<0.01）,下调MDA-MB-231细胞STAT3的磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;与RaA组比较,RaA联合NAC组可降低MDA-MB-231细胞的ROS水平（P<0.01）,降低MDA-MB-231细胞Bax/Bcl-2的比值（P<0.01）,下调MDA-MB-231细胞Cyt-C、活化胱天蛋白酶-3（active CASP3,CCASP3)和P53的蛋白水平（P<0.01）,上调STAT3磷酸化水平（P<0.01）。结论：RaA通过激活ROS/STAT3/P53信号通路诱导线粒体凋亡在体外发挥抗乳腺癌作用。     

补脾方药对大鼠脾细胞中PKC,Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:通过观测大鼠脾细胞中蛋白激酶C(PKC),B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)和Bax蛋白表达来探讨补脾方药对脾虚证的作用机制。方法:无特定病原体(SPF)大鼠采用复合方法制成脾虚模型后分别以3种不同配伍补脾方药灌胃3周。采用免疫组化法测定脾细胞中PKC,Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:模型组与对照组比较,Bcl-2表达减少而Bax表达增加;中药组与模型组比较,Bcl-2表达增加而Bax表达减少;中药用药组与脾虚模型组比较,PKC表达减少(P<0.05),匀有统计学意义。结论:补脾方药治疗脾虚证的作用机制可能与提高脾细胞中Bcl-2表达,降低Bax和PKC表达有关。     

电针对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察电针疗法对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响,探讨电针对失坐骨神经骨骼肌萎缩的延缓效应及其可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组21只。采用切断坐骨神经法制备腓肠肌萎缩大鼠模型。电针组电针患侧"足三里""承山"穴,每日1次,每次10min,各组分别在术后7、14、21d取材。TUNEL法检测腓肠肌细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达,RT-PCR法检测腓肠肌Caspase-3mRNA表达。结果:模型组各时点细胞凋亡指数均高于假手术组(P0.05),电针组的细胞凋亡指数显著低于模型组(P0.05)。模型组各时点腓肠肌Bcl-2蛋白表达较假手术组显著降低(P0.05),Bax、Cyt-C以及Caspase-3蛋白表达均明显升高(P0.05)。术后14、21d,电针组与模型组比较,Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05),Bax、Cyt-C及Caspase-3蛋白表达则明显降低(P0.05)。各组大鼠腓肠肌的Caspase-3mRNA表达与蛋白表达结果基本一致。结论:电针能够促进腓肠肌Bcl-2的表达并抑制Bax、Cyt-C和Caspase-3的表达,从而抑制肌细胞的凋亡,这可能是电针延缓失神经性骨骼肌萎缩的机制之一。     

扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg·kg^-1)、扶脾柔肝方组(8.54 g·kg^-1)、扶脾方组(4.58 g·kg^-1)、柔肝方组(3.96 g·kg^-1)。采用四氯化碳腹腔注射和乙醇灌胃复制HF大鼠模型,灌胃给药4周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);HE、Masson染色观察病理变化情况;电镜观察大鼠肝组织超微结构;Western Blot和qRT-PCR方法检测大鼠肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的HF程度明显,胶原容积分数明显增加(P<0.01),电镜发现自噬小体增多,线粒体结构损害,大鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达上调(P<...     

葛根素通过线粒体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨线粒体途径在葛根素(PUE)诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:葛根素高、中、低剂量(1.5×104,1.5×10-4,1.5×10-5 mol·L-1)干预体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察线粒体膜电位的变化,Western Blot检测凋亡相关基因Caspase-9,Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:葛根素加药组与正常组相比线粒体膜电位明显降低,葛根素可使Caspase-9的蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达升高,葛根素对PASMC的诱导作用还具有浓度依赖性.结论:葛根素可通过线粒体途径诱导PASMC凋亡.     

从表型差异探讨大戟大枣汤含药血清抗乳腺癌的作用

目的 探讨大戟大枣汤含药血清抗雌激素受体(ER)阴性(-)和ER阳性(+)乳腺癌作用的差异性。方法 制备大戟大枣汤含药血清,作用于体外培养乳腺癌(ER-)MDA-MB-453和(ER+)MCF-7细胞48 h。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位及细胞凋亡率变化,ELISA法检测caspase3、caspase9酶活性,RT-qPCR法检测caspase3、caspase9、Bax、Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测c-caspase-3、c-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与阴性对照组比较,大戟大枣汤含药血清均能使2种不同表型的乳腺癌细胞中LDH释放量增加(P<0.05,P<0.01),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),caspase3和caspase9的酶活性、mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bax mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-...     

冠心病心绞痛寒凝血瘀证大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达

目的:探讨冠心病心绞痛寒凝血瘀证大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达情况。方法:采用垂体后叶素大剂量静脉注射建立冠心病心绞痛寒凝血瘀证动物模型,运用TUNEL法检测细胞凋亡凋亡指数;免疫组化法检测心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达;透射电镜观察大鼠心肌细胞的超微结构改变。结果:与正常组相比,模型组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),Bax蛋白表达显著增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达无明显变化,Bax/Bcl-2显著升高(P<0.01),透射电镜下可见部分心肌细胞核固缩,染色质边集,线粒体聚集、肿胀,部分膜破裂,嵴降解。结论:心肌细胞凋亡参与了冠心病心绞痛寒凝血瘀证心肌缺血损伤的病理过程,Bax/Bcl-2表达失衡激活线粒体途径参与了冠心病心绞痛寒凝血瘀证心肌细胞凋亡的调控。     

抗纤益心方干预线粒体通透性转换孔抑制心肌细胞凋亡的机制

目的 探讨抗纤益心方通过调控线粒体通透性转换孔（mPTP）对心肌细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法 H9c2心肌细胞常规培养，饥饿8 h后分为正常组，模型组，抗纤益心方（0.25 g·L^-1）组，环孢素A（10 μmol·L^-1）组，药物作用24 h用于后续实验。利用去甲肾上腺素（NE）诱导H9c2心肌细胞肥大模型，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NE的最佳造模浓度，流式细胞仪检测mPTP的开放程度，同时检测mPTP开放后引起的凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平，和线粒体膜电位的水平。结果 NE浓度在200 μmol·L^-1时心房钠尿肽（ANP），脑钠肽（BNP） mRNA的表达水平最高，此浓度作为诱导H9c2心机细胞肥大模型的最佳浓度，与正常组比较，模型组mPTP过度开放，线粒体内相对荧光强度减弱和线粒体膜电位降低（P<0.05，P<0.01）；凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）。与模型组比较，抗纤益心方组和环孢素A组mPTP开放受到抑制，线粒体相对荧光强度和线粒体膜电位升高（P<0.05，P<0.01）；Cyp-D，Cy-tC，Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）。结论 抗纤益心方能够抑制心肌细胞凋亡，其作用机制可能是通过调控mPTP的开放，抑制相关凋亡因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3的表达有关。     

四君子汤对脾气虚证模型大鼠股四头肌线粒体自噬和细胞凋亡水平的影响＊

目的 通过观察不同浓度四君子汤治疗脾气虚证模型大鼠股四头肌线粒体自噬及细胞凋亡水平的变化，研究四君子汤治疗“脾气虚四肢不用”的机制。方法 50只雄性SPF级大鼠随机分为对照组（n = 10）和脾气虚证模型组（模型组，n = 40），饮食失节+劳倦法复制脾气虚证模型，造模成功后符合模型评价标准者纳入脾气虚证模型，将其分为盐水组（n = 10），四君子汤治疗低剂量组（低剂量组，n = 10），四君子汤治疗中剂量组（中剂量组，n = 10）和四君子汤治疗高剂量组（高剂量组，n = 10），连续给药15天。治疗结束后测定其抓力并取股四头肌，比色法检测三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate，ATP）、线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，MMP）和过氧化氢（Hydrogen peroxide，H₂O₂）水平；免疫印迹法（Western blot）法检测微管相关蛋白1轻链3-B（LC3 B）、选择性自噬接头蛋白（p62）、Bcl-2、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、细胞色素c（Cyt-c）、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 与对照组比较，盐水组大鼠抓力、体质量、股四头肌ATP和MMP水平下降（P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001），H₂O₂水平升高（P < 0.05）；LC3B-II、Bax、Cyt-c，cleaved-Caspase3、PARP蛋白表达上调（P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001），p62、Bcl-2表达下调（均P < 0.001）。与盐水组比较，中/高剂量组大鼠抓力升高（均P < 0.01），体质量未见差异（均P > 0.05）；ATP、MMP水平升高（P < 0.01或P < 0.001）、H₂O₂下降（P < 0.05或P < 0.01）；LC3B-II、Bax、Cyt-c，cleaved-Caspase3、cleaved-PARP表达下调（P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001），p62、Bcl-2表达上调（P < 0.05或P < 0.01），低剂量组各指标未见差异（均P > 0.05）。与中剂量组比较，高剂量组H₂O₂水平下降（P < 0.05），Bax表达下调（P < 0.01），其余指标未见差异（均P > 0.05）。结论 四君子汤可能通过抑制过度线粒体自噬，维持适度自噬改善线粒体应激，降低细胞凋亡水平治疗脾气虚四肢不用。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

人参皂苷Re对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞帕金森病模型的保护作用机制

目的 探究人参皂苷Re对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型的保护作用机制。方法 利用0.3μmol/L鱼藤酮建立SH-SY5Y细胞PD模型,给予2.5、5μmol/L人参皂苷Re或10μmol/L左旋多巴（levodopa,L-DOPA）处理24 h,通过CCK-8试剂盒检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、线粒体膜电位及活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量变化;能量代谢分析仪检测细胞糖酵解功能及线粒体氧化磷酸化功能;ELISA检测细胞内三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）含量变化;免疫荧光检测细胞内Parkin和PTEN诱导性激酶蛋白-1(PTEN induced putative kinase-1,Pink-1)的表达情况;Western blotting检测细胞内Parkin、Pink-1、细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associa...