里拉京通过下调NOTCH1信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖的实验研究

【摘要】目的 探讨柯里拉京能否通过下调NOTCH1信号通路抑制胃癌SGC 7901细胞的增殖, 以及对Hes1表达的影响。方法〓使用不同浓度的柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)对胃癌SGC 7901细胞进行干预。在不同时间点(0、24和48h)使用MTT法对SGC 7901细胞活性进行检测。干预48h后, 使用qPCR和western blot对在不同浓度(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)柯里拉京干预后,细胞NOTCH1、Hes1 mRNA和蛋白的表达水平进行分析。结果〓使用不同浓度柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)对胃癌SGC 7901细胞进行干预后, 细胞活性呈时间依赖性和剂量依赖性下降, 差异均有统计学意义(P＜005)。不同浓度柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)干预48 h后, 胃癌SGC 7901细胞NOTCH1及Hes1 mRNA和蛋白的表达水平呈剂量依赖性降低, 差异均有统计学意义(P＜005)。结论〓柯里拉京可通过下调NOTCH1/Hes1信号通路抑制胃癌SGC 7901细胞增殖, 同时为柯里拉京用于临床治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了实验基础。
     

STAT1和STAT2在磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中的作用

目的探讨磷脂酰乙醇胺(PE)诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中STAT1和STAT2的作用。方法实验以人肝癌细胞系HepG2为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组。应用MTT法检测细胞生长,荧光免疫组化检测细胞内STAT1和STAT2表达。结果与对照组相比,PE各处理组对HepG2细胞生长的抑制作用具有剂量依赖性,并可诱导STAT1和STAT2高表达,而AG490可以部分逆转PE的效应。结论 STAT1和STAT2参与了PE诱导HepG2细胞的生长抑制过程。     

盐酸氮芥抑制人肝癌HepG2细胞生长的机制探讨

目的探讨盐酸氮芥抑制人肝癌HepG2细胞生长的可能机制。方法以盐酸氮芥处理人肝癌HepG2细胞,运用DNA片断化分析、流式细胞术检测肝癌HepG2细胞的凋亡和细胞周期的改变。结果DNA片断化分析显示没有出现典型“梯形”条带,流式细胞术显示各浓度组细胞凋亡率之间差异无显著性（P〉0．05）,但有明显的细胞周期阻滞（S期和G2期）。结论盐酸氮芥对人肝癌HepG2细胞的生长抑制主要通过细胞周期的阻滞发挥作用。     

芦丁对HepG2肝癌细胞AMPK蛋白信号通路的激活作用

[目的]探讨芦丁在HepG2细胞中是否影响AMPK蛋白信号通路．[方法]采用MTS法测定细胞毒性;采用Westernblot方法检测AMPK蛋白的表达情况．[结果]芦丁在0-80μmol／L浓度范围内,在24h内对HepG2肝癌细胞没有毒性;芦丁呈浓度和时间依赖性地增高AMPK磷酸化．[结论]芦丁对HepG2肝癌细胞AMPK蛋白信号通路有激活怍用．     

半边莲通过钙信号诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

观察半边莲通过影响胞内游离钙离子浓度进而诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡。通过荧光分光光度法检测胞内游离钙离子浓度,并采用AO-EB荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果显示半边莲可提高HepG2细胞胞内游离钙离子浓度,与对照组相比,差异显著(P<0.01),且荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳的结果表明经半边莲处理过的肝癌细胞出现典型的凋亡特征。结论:半边莲可通过提高肝癌细胞胞内游离钙离子浓度诱导癌细胞凋亡     

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500 μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoisomerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500 μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。     

亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响

目的 探讨亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响.方法 以0、0.25、0.5、1、2和4μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧环境中培养8 h;1μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧培养0-10h,WST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和Western Blot方法检测肝癌细胞中HIF-1 α的表达.结果 ①不同剂量的亚砷酸和不同缺氧时间下对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性(P＞0.05).②随着亚砷酸浓度的增加,HIF-1α蛋白表达逐渐降低,与对照组相比差异呈显著性(P＜0.01).③不同剂量的亚砷酸对HIF-1α mRNA表达的影响与对照组相比无差异显著性(P＞0.05).结论 亚砷酸抑制人肝癌细胞HepG2中HIF-1α蛋白表达是通过转录后机制.     

siRNA of ADAM17 gene induces apoptosis, proliferation inhibition and enhances the effects of genistein on HepG2 cells

Objective:To investigate the effects of siRNA of ADAM17 gene and genistein on apoptosis and the inhibition of proliferation in HepG2 cells in an attempt to seek an effective therapy for hepatocellular carinoma. Methods:Cells were divided into control groups and experimental groups and siRNA was used to silence the ADAM17 gene, alone and in combination with genistein. Cells were harvested at several time periods and assessed for proliferation and apoptosis. Proliferation was assayed by MTT at 24, 48, 72 and ...     

shRNA沉默ADAM17基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 利用shRNA干扰沉默人乳腺癌细胞MCF-7的解聚素-金属蛋白酶17(adisintegrin and metalloproteinases 17,ADAM17)基因,观察其对细胞增殖的影响.方法 针对ADAM17基因设计合成具有特异性的ADAM17-shRNA,经脂质体LipofectamineTM 2000转染MCF-7细胞.实验设对照组(空白PBS)、干扰组(转染干扰无义序列ADAM17-shNC)、实验组(转染ADAM17-shRNA),采用Reahime PCR检测各组细胞AD-AM17 mRNA的表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 实验组ADAM17 mRNA的相对表达量显著低于对照组和干扰组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组的MCF-7细胞增殖活性较其他两组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组的MCF-7细胞进入S期(23.60±1.09)％和G2/M期(6.30±0.82)％的比例降低,绝大多数细胞停留在G0/G1期(65.17±1.35)％,细胞周期延缓,与对照组、干扰组相比较差异具有显著性意义(P＜0.05).结论 ADAM17-shRNA对人乳腺癌细胞MCF-7的ADAM17基因具有沉默作用,从而抑制MCF-7细胞的增殖活性,延缓细胞周期进展.     

二氢杨梅素上调SIRT1信号通路改善HepG2细胞甘油三酯蓄积

目的 探究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝细胞脂质代谢的影响及其与SIRT1信号通路的关系.方法 0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h,诱导为脂肪变性肝细胞模型,再用0、5、10、20μmol/L DHM及20 μmol/L DHM+2μmol/L SIRT1抑制剂(EX527)分别干预24 h,CCK-8检测细胞增殖活性,油红0染色检测细胞脂滴形成情况,酶偶联比色法检测甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白免疫印迹法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)的表达.结果 0.2 mmol/L PA和5、10、20 μmol/L DHM对细胞增殖活力没有显著影响(P＞0.05);5、10、20 μmol/L DHM处理后明显减少脂肪变性的HepG2细胞脂滴蓄积和甘油三酯含量(P＜0.01),增加磷酸化的AMPK(p-AMPK)和SIRT1的表达水平,并且降低脂质合成相关基因SREBP-lc、FAS、磷酸化的ACC(p-ACC)的蛋白表达,SIRT1抑制剂能显著增加脂肪变性的HepG2细胞的甘油三酯含量(P＜0.01),削弱DHM对脂肪变性HepG2细胞SREBP-1c、FAS、P-ACC表达的抑制作用.结论 DHM通过上调脂肪变性HepG2细胞SIRT1信号通路改善肝细胞脂肪变性.     

siRNA of ADAM17 gene induces apoptosis, proliferation inhibition and enhances the effects of genistein on HeoG2 cells

Objective:To investigate the effects of siRNA of ADAM17 gene and genistein on apoptosis and the inhibition of proliferation in HepG2 cells in an attempt to seek an effective therapy for hepatocellular carinoma. Methods:Ceils were divided into control groups and experimental groups and siRNA was used to silence the ADAM17 gene, alone and in combination with genistein. Cells were harvested several time periods and assessed for proliferation and apoptosis. Proliferation was assayed by MTT at 24, 48, 72 and 96 hours following treatment and apoptosis was assessed by flow cytometric analysis at 48 hours. Results:In siRNA groups, proliferation of cells was significantly inhibited compared to the control groups at 24, 48 and 72 hours(P< 0.05), and apoptosis was significantly increased at 48 hours(P< 0.01);In genistein groups, proliferation was inhibited at 24, 48, 72 and 96 hours, and the apoptosis ratio was significantly a further significant decrease of proliferation and increase in apoptosis compared with either treatment alone. Conclusion:The ADAM17 gene could be an effective target, and genistein couM be a useful agent, in the treatment of hepatocellular carcinoma, siRNA of ADAM17 gene and genistein both inhibited HepG2 cells proliferation and promoted apoptosis, and further, the combination of these treatments had a greater effect than either treatment alone.     

MTA1靶向RNA干扰对人肝癌HepG2细胞生物学行为影响的研究

目的 观察转移相关基因1(MTA1)特异性siRNA对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响.方法 体外构建2个MTA1特异性siRNA表达载体(pRNAi-1、pRNAi-2),实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及MTA1 siRNA重组质粒转染组,转染肝癌细胞株HepG2细胞,定量RT-PCR检测MTA1 mRNA表达情况,检验其对细胞的RNA干扰效果;采用MTT法分析其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.结果 测序表明MTA1干扰序列完全正确;pRNAi-1与pRNAi-2表达质粒有效抑制肝癌细胞株HepG2细胞中MTA1的表达,MTT 法检测结果显示转染重组质粒组细胞体外生长的抑制率高于脂质体对照组和空质粒对照组(P<0.01);流式细胞术检测的转染重组质粒组细胞凋亡率高于脂质体对照组和空质粒对照组(P<0.01).结论 成功构建了MTA1干扰真核表达载体,重组MTA1特异性siRNA质粒可抑制肝癌细胞中MTA1的表达,并抑制肝癌细胞生长,促进其凋亡.     

TO901317抑制叉头盒蛋白M1表达并影响HepG2细胞增殖

目的 探讨肝X受体(liver Xreceptors,LXR)特异性激动剂TO901317对HepG2细胞中叉头盒蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)的表达及对HepG2细胞的增殖及细胞周期的影响.方法 TO901317(终浓度分别为0.5、5 μmol/L)处理HepG2细胞24h后...     

缺氧条件下沉默解聚素-金属蛋白酶17基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的  探讨在缺氧条件下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）基因的短发夹RNA（shRNA）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用机制。方法  针对ADAM17基因设计具有特异性ADAM17-shRNA,经电穿孔转染MCF-7细胞。依据细胞培养条件（常氧和缺氧）和细胞转染因素（空白PBS、转染无义序列ADAM17-shNC、转染ADAM17-shRNA）,实验分为常氧对照组、常氧shNC组、常氧shRNA组、缺氧对照组、缺氧shNC组和缺氧shRNA组。通过充入1%氧O2、5%二氧化碳CO2和94%氮N2的混合气体培养箱模拟缺氧环境,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、iCELLigence系统、流式细胞仪检测MCF-7细胞的ADAM1基因的表达水平、细胞生长曲线、增殖活性和细胞周期。结果  靶向针对ADAM17基因的ADAM17-shRNA在缺氧条件下可以有效沉默人乳腺癌MCF-7细胞ADAM17基因的表达（缺氧shRNA组2-△△CT=0.55±0.16）。从而导致MCF-7细胞生长速度减慢,细胞增殖能力降低,细胞周期延缓。结论  ADAM17 shRNA和缺氧存在协同作用,共同抑制肿瘤细胞的增殖。

     

顺铂对肝癌细胞株HepG2增殖和SATB1表达的影响

目的:观察特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,SATB1)在不同肝癌细胞株中的表达情况,并探讨顺铂对肝癌细胞株HepG2的细胞形态及SATB1表达的影响。方法:半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HepG2、BEL-7402、SMMC-7721三种肝癌细胞株中SATB1 mRNA的表达情况;HepG2细胞株中加入终浓度为2.5、5.0和10.0μg/ml顺铂培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果:SATB1在肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721、HepG2中均有表达,差异无统计学意义(P0.05)。HepG2细胞与顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1 mRNA的表达随着顺铂浓度的增加而减少,其中5.0、10.0μg/ml顺铂组SATB1 mRNA的表达量与对照组差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SATB1在三种肝癌细胞株中均有表达,顺铂可抑制HepG2细胞增殖和SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

姜黄素抑制多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM的增殖及其机制研究

目的 观察姜黄素对多药耐药(MDR)的肝癌细胞株HepG2/ADM细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 制备、培养HepG2/ADM细胞,然后用不同浓度的姜黄素(5、10、20、40 mol/L)处理该细胞24、48、72 h.采用CCK-8试剂检测姜黄索对HepG2/ADM细胞的增殖活力的影响.流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(R-123)的浓度和阿霉素(ADM)的浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞内mdr-1 mRNA的水平变化;用Western blot检测细胞内p-糖蛋白(pgp)水平的变化.结果 与空白对照组和DMSO组相比,姜黄素对HepG2/ADM细胞增殖的抑制作用更加明显(P＜0.05);更能够明显抑制细胞内Rh123的外排(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果分别显示,姜黄素对HepG2/ADM细胞内的mdr-1 mRNA和P-gp水平更有明显的降低(P＜0.05),且呈浓度-时间依赖性(P＜0.05).结论 姜黄素可以显著抑制多药耐药HepG2/ADM细胞的增殖,其机制可能与抑制和MDR密切相关的mdr-1基因及其编码的P-gp水平有关.     

Notch信号通路基因JAG1、ADAM17和ADAM10与先天性心脏病(CHD)的相关性

 目的  探索Notch通路的配体JAG1和限速酶ADAM10和ADAM17与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)发病的相关性。方法  选取来自山东、上海两地的1 053例CHD患者血液样本和1 000例对照样本,对这3个基因的5′启动子区和3′-UTR区进行了全测序,并进行统计分析及简要功能验证。结果  检测到7个SNP (含2个新发SNP位点Ch2:9695908T/C和Ch20:10655928T/C)和1个单倍型组合具有显著性频率差异。双荧光素酶报告基因试验表明其中ADAM17启动子区的rs3811592M rs13415726M rs3811591M这个连锁单倍型可显著下调基因表达;而JAG1启动子区的rs7264849M则可显著上调基因表达。结论  这些SNP突变可能影响Notch信号的强弱,从而与心脏发育异常相关。