X射线照射后活性氧对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和转化生长因子-β1的影响

目的 研究X射线照射后活性氧(reactive oxygen species,ROS)对巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响.方法 采用X射线照射巨噬细胞,收集细胞培养上清液,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测RAW264.7细胞TNF-α和TGF-β1.采用X射线照射巨噬细胞,荧光探针法检测ROS.随后采用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和TNF-α抑制剂Lenalidomide预处理巨噬细胞后照射X射线,检测ROS,TNF-α和TGF-β1.采用Western blot检测Nox2的表达.结果 X射线照射后细胞培养上清液中ROS在照射后12 h达到最高,TNF-α在照射后24h达到最高,TGF-β1在照射后48 h达到最高.使用3 mmol·L-1NAC后,ROS明显受到抑制,同时TNF-α,TGF-β1分泌减少.使用2μmol·L-1Lenalido-mide后,TNF-α分泌明显减少,同时TGF-β1分泌减少,ROS未受到影响.X射线照射巨噬细胞后Nox2的表达显著上升.结论 X射线照射巨噬细胞激活Nox2导致ROS增加,进而激活炎性因子TNF-α表达,最终导致TGF-β1表达升高.     

X射线照射对RAW264·7细胞TNF-α和NF-κB表达的影响

目的探讨X射线照射诱发小鼠巨噬细胞分泌TNF-α和NF-κB的规律。方法以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测RAW264.7细胞TNF-α分泌水平;以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞并进行裂解,采用Western blot实验检测NF-кB（p65）的表达。结果 X射线照射能使小鼠巨噬细胞分泌TNF-α增加,在照射后34h达到一次分泌峰值;细胞核中NF-κB（p65）分布增多,并且随着时间的延长其核移位明显增多,照射后4h达到一次最高值。结论 X射线照射能诱发小鼠巨噬细胞TNF-α和NF-κB表达增强。     

人胃癌细胞培养上清液对树突状细胞表型的影响

目的 研究胃癌细胞培养上清液对树突状细胞(DCs)表型的影响.方法 酶联免疫法检测胃癌及正常胃上皮细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-10和肿瘤生长因子(TGF)-β1蛋白含量.自健康人外周血获取DCs,流式细胞仪(FCM)检测加入上述细胞培养上清液后DCs表型CD83、CDS0、CD86、HLA-DR的变化.结果 OCUM-2MD3、BGC-823和HGC-27细胞株的胃癌细胞培养上清液中均可检测到VEGF蛋白;IL-10、TGF-β1蛋自在OCUM-2MD3、BGC-823细胞株中有表达,在HGC-27中未见表达.镜下观察细胞具有DCs典型的形态特征,单纯用GM-CSF和IL-4培养的细胞低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD83,加人肿瘤坏死因子(TNF)-α后,表达水平明显上调.加入细胞培养上清液后,FCM检测不同胃癌细胞组各表型表达均显著降低,而正常胃上皮细胞组无明显变化.结论 应用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外刺激,可成功扩增出成熟DCs.胃癌细胞可通过分泌VEGF、IL-10、TGF-β1等抑制DCs成熟,降低其抗原提呈功能,而进行免疫逃逸.     

麦门冬汤对放射性肺损伤大鼠肺组织TGF-β、TNF-α表达的影响

目的探讨麦门冬汤对放射性肺损伤大鼠肺组织TGF-β、TNF-α表达的影响。方法将72只健康成年清洁级雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)24只,单纯照射组(B组)24只,照射加中药组(C组)24只,A、B2组以蒸馏水2ml/200g灌胃1周后,C组以每日2ml/200g(1.6g/200g)灌胃服用中药1周,开始照射,照射期间,每周测体重1次,至照射结束。分别在完成10次照射后(第5周),以及在照射开始后的第12、26周,检测大鼠检测3组大鼠肺组织TGF-β、TNF-α表达。结果 TGF-β蛋白表达:B组大鼠TGF-β的表达于照射第5周时达到高峰;在各时间点,A、C组大鼠TGF-β表达均低于B组(P<0.01)。TNF-α表达:B组大鼠肺组织TNF-α的表达在第5周时达到高峰,C组在第5周时明显抑制了TNF-α表达,在第5周、12周、26周,C组大鼠TNF-α表达均明显低于B组(P<0.01)。结论中药麦门冬汤具有较好的预防放射性肺损伤功效,其作用机制与阻抑肺组织TGF-β、TNF-α表达有关。     

肝X受体激动剂对RAW 264.7细胞ABCA1蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响

目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和(MHEC)T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响.方法:应用免疫细胞化学染色法检测RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达的影响;应用夹心法ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的浓度,分析肝X受体激动剂对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6产生和分泌的影响.结果:3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317均可显著促进RAW264.7细胞ABCA1蛋白的表达;与维甲酸X受体激动剂9-顺式视黄酸联合作用时,ABCA1蛋白表达增加更为显著.氧化低密度脂蛋白可促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的产生和分泌,而这一促进作用可部分地被3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317所抑制.结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可上调RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达,并可减少氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞中TNF-α、IL-6的产生和分泌.     

绿原酸抑制巨噬细胞激活的机制研究

目的 观察绿原酸对脂多糖（LPS）致巨噬细胞激活的影响，并探讨骨髓细胞2表达的触发受体（TREM2）蛋白在其中的作用。方法 为筛选LPS造模浓度，分别以1、10、100 ng/mL的LPS培养细胞24 h，检测细胞培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平和细胞中诱导型一氧化氮合酶（i NOS）蛋白表达水平。为筛选绿原酸给药浓度，将细胞分为Control组、LPS处理组和3个不同浓度绿原酸（0.01、0.1、1μmol/L）干预组，检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β水平和细胞中iNOS、TREM2蛋白表达水平以及细胞活力。为观察TREM2在绿原酸抑制巨噬细胞激活中的作用，采用TREM2小干扰RNA(TREM2-siRNA)干扰细胞TREM2蛋白表达，将细胞分为Control组、LPS处理组、绿原酸+LPS组、TREM2-siRNA+绿原酸+LPS组和乱序-siRNA(SCsiRNA)+绿原酸+LPS组，在含有上述药物的培养基/空白培养基中孵育24 h后，检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平以及细胞中TREM2、iNOS和核因子κB p65(NF-κB ...     

桃红四物汤含药血清对巨噬细胞的影响

目的探讨桃红四物汤含药血清对巨噬细胞分泌TNF-α、TGF-β1功能的影响,阐述中药治疗激素性股骨头坏死的作用机制。方法普通级新西兰兔,♀♂各半,随机分为3组,每日灌服浓度为1 g.ml-1的桃红四物汤药液,高剂量组15 ml.kg-1、低剂量组7.5 ml.kg-1,对照组15 ml.kg-1的生理盐水,每日1次,连续灌胃2周;巨噬细胞以5×105接种于6孔板中,以坏死骨微粒制备模型组,并予以含药血清干预48 h,ELISA检测各组上清中TNF-α、TGF-β1的含量;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组巨噬细胞TNF-α、TGF-β1mRNA的变化。结果荧光定量RT-PCR和ELISA检测结果可见桃红四物汤含药血清作用下的巨噬细胞分泌的TNF-α的量较空白血清组降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05);桃红四物汤含药血清作用下巨噬细胞分泌的TGF-β1在转录水平和蛋白水平较空白血清组均有明显的升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论桃红四物汤含药血清能提高巨噬细胞TGF-β1的表达,抑制TNF-α的表达,进而促进激素性股骨头坏死中骨的修复。     

麦冬多糖对脂多糖诱导巨噬细胞损伤的保护作用及机制研究

目的：研究麦冬多糖对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法：采用不同浓度的LPS（0、1、2、4、8、16、32、64、128 μg·mL-1）和麦冬多糖（0、5、10、50、100、500、1000 μg·mL-1）分别处理细胞6 h和24 h,CCK-8法筛选造模剂及药物浓度;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,试剂盒检测SOD活力和MDA含量,Western blot检测NF-κB信号通路的相关蛋白表达。结果：当LPS浓度在8 μg·mL-1时,巨噬细胞活力明显下降,而麦冬多糖各剂量对巨噬细胞活力无显著影响,故选取8 μg·mL-1 LPS为造模剂浓度,50、100、500 μg·mL-1为麦冬多糖低、中、高剂量;与对照组相比,模型组上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平均显著升高,SOD活性显著降低,TLR4、MyD88表达和IκBα、p65磷酸化水平显著升高,IκBα蛋白表达水平显著降低;采用麦冬多糖低、中、高剂量预处理后,麦冬多糖各剂量组巨噬细胞活力升高,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平下降,MDA水平降低,SOD活力提高,IκBα表达升高,TLR4、MyD88的表达和IκBα、p65的磷酸化水平下降。结论：麦冬多糖能够抑制NF-κB信号通路的激活,降低氧化应激反应,从而减轻巨噬细胞的损伤,减少炎性因子的分泌。     

LPS对BV2细胞TNF-α、CD11b和IL-1β表达的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对BV2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、簇分化抗原11b(CD11b)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响.方法 分别用LPS 0、1、10、100μg/ml和LPS 10μg/ml 以0、2、4、8、12、24h刺激BV2细胞,ELISA法检测细胞培养上清液中分泌的TNF-α表达量,RT-PCR 检测CD11b及IL-1β mRNA表达变化.结果 用LPS 10μg/ml刺激BV2细胞4h后,上清液中TNF-α的释放量达到峰值,同时CD11b及IL-1β mRNA表达明显增加.结论 LPS能促进BV2细胞高效表达CD11b、IL-1β和分泌TNF-α,从而为BV2细胞作为免疫活性细胞在中枢神经系统中发挥免疫调节作用提供依据.     

知母皂苷对淀粉样β蛋白片段25~35引起的神经细胞凋亡的保护作用(英文)

目的研究知母皂苷(SAaB)对淀粉样β蛋白片段25~35(Aβ25~35)激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡的保护作用及有关的机制。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞24 h,加入Aβ25~35(20μmol.L-1),分别在加入Aβ25~350.5,1,2和6 h取巨噬细胞,应用Western印迹方法检测不同时间点的胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)的蛋白表达改变,确定ERK1/2和p38 MAPK蛋白表达达峰时间。然后,在加入Aβ25~35前10 min,加入SAaB(10,30和100μmol.L-1)或在加入Aβ25~35前30 min,分别加入p38MAPK的特异性阻断剂SB203580和ERK上游激酶MEK的特异性阻断剂PD98059,分别在Aβ25~35作用0.5和2 h后,取细胞进行Western印迹实验。Aβ25~35作用48 h后,取培养的巨噬细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一氧化氮(NO)生成量的改变,应用免疫细胞化学染色观察巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。为了观察SAaB对Aβ25~35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡的保护作用,在巨噬细胞培养液内加入SAaB(10,30和100μmol.L-1)作用10 min,然后加入Aβ25~35(20μmo.lL-1)作用48 h后,将培养的上清液转移到体外培养8 d的小脑颗粒细胞内作用72 h,对照组将未被Aβ25~35刺激的巨噬细胞上清液加入到神经细胞内。应用Hoechst 33258染色观察小脑颗粒细胞凋亡改变。结果Aβ25~35(20μmol.L-1)可使巨噬细胞磷酸化ERK1/2和磷酸化p38 MAPK表达明显增加,分别在加入Aβ25~35后0.5 h和2 h作用达高峰。另外,Aβ25~35也可使巨噬细胞的TNF-α和NO产生增加以及iNOS表达增加,Aβ25~35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加是通过ERK1/2信号通路激活介导的,因为MEK的特异性阻断剂PD98059可明显抑制Aβ25~35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加。将Aβ25~35刺激48 h的巨噬细胞上清液加入到培养的小脑颗粒细胞内,可使神经细胞凋亡百分比较对照组明显增加。SAaB(30和100μmol.L-1)能明显抑制Aβ25~35引起的巨噬细胞磷酸化ERK1/2、磷酸化p38 MAPK和iNOS表达增加,SAaB(10,30和100μmol.L-1)也能对抗Aβ25~35引起的TNF-α和NO的生成增加及明显降低由Aβ25~35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡。结论SAaB对Aβ25~35激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡具有对抗作用,该作用与其抑制巨噬细胞的ERK1/2信号转导通路,进而抑制巨噬细胞TNF-α和NO的产生有关。     

梓醇对AGEs刺激巨噬细胞介导肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨梓醇对晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激巨噬细胞(RAW264.7)介导肾系膜细胞(MMCs)损伤的影响。方法将MMCs接种于Transwell小室,RAW264.7接种于下层孔板共培养,设置空白对照组、模型组、梓醇组(0.1、1.0、10.0μmol·L^-1),设置氨基胍组(10.0μmol·L^-1)作为阳性对照。各组加入药物孵育1 h后,用AGEs(100 mg·L^-1)刺激RAW264.7,继续孵育23 h。采用MTT法检测MMCs增殖;免疫荧光法检测MMCs中COL-Ⅳ的表达; Western blot法检测MMCs中FN、COL-Ⅳ、TGF-β的表达; ELISA法检测RAW264.7上清液中IL-6、IL-12、TNF-α水平。结果梓醇可抑制AGEs刺激巨噬细胞介导系膜细胞的增殖(P<0.05,P <0.01),下调系膜细胞FN、COL-Ⅳ、TGF-β蛋白表达(P <0.05,P <0.01),降低巨噬细胞上清中IL-6、IL-12、TNF-α水平(P <0.05,P &...     

林可霉素对人外周血源性单核巨噬细胞免疫功能影响的体外研究

目的：研究林可霉素对于健康人外周血单核巨噬细胞表面分子表达的影响,探讨林可霉素对单核巨噬细胞免疫学功能的影响。方法：从健康人外周血中提取单核巨噬细胞体外培养,培养7d后将其分为霉素处理组和对照组,林可霉素处理组加入林可霉素,对照组加入0.9%氯化钠溶液,刺激48h后,流式细胞仪检测细胞表面CD80、MHCⅡ及Fas表达,ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子人干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α的浓度。结果：在林可霉素处理后,单核巨噬细胞抗原呈递相关分子CD80、MHCⅡ表达降低,细胞因子IFN-γ、TNF-α表达明显减少,其表面死亡受体Fas表达升高。结论：林可霉素可明显抑制单核巨噬细胞抗原呈递及细胞因子分泌等免疫功能,并诱导单核巨噬细胞死亡。     

TREM-1siRNA对内毒素刺激巨噬细胞杉RAW264．7分泌炎性因子影响

目的探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的小分子干扰RNA（small inter-feting RNA,siRNA）在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264．7分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白纽胞介素1p（interleukin1B,IL-1β）的抑制作用。方法合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告因子,荧光显微镜观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率。以pLKO1-1为载体构建针对TREM-1的pLKO1．1-TREM1-shRNA干扰质粒。将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为4组：空白组;内毒素组（LPS组）;空质粒组（pLKO1．1组）：采用脂质体法将pLKO1．1转染细胞;干扰组（siRNA组）：将pLKO1．1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM．1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α、IL-1β含量。结果与LPS组比较,siRNA组中TREM．1、TNF—α、IL-1β的mRNA显著下降（P〈0．01）,上清液中TNF-α、IL-1β含量明显降低（P〈0．01）。结论小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264．7中TNF-α、IL-1β的分泌。     

IL-23诱导人外周血单个核细胞增殖及其体外杀伤MUTZ-1细胞的实验研究

目的：观察IL-23诱导人外周血单个核细胞（ PBMNC）增殖及其对骨髓增生异常综合征（ MDS）细胞系MUTZ -1的杀瘤作用。方法采用密度梯度离心法分离获得正常人PBMNC,细胞分4组：阴性对照组（未加IL-23）,3个浓度IL-23组（2、10、50 ng／ml）,体外诱导72 h,并与MUTZ-1共培养。流式细胞术检测不同时间诱导后PBMNC细胞增殖和表型变化。乳酸脱氢酶（ LDH）释放法检测PBMNC对MUTZ-1细胞的杀瘤效果。 Real time-PCR和Western-blot检测PBMNC细胞培养上清液中IFN-γ、TNF-α、TGF-β、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素mRNA和蛋白表达。结果体外诱导培养1、3、5、7 d时,IL-23诱导能够明显促进PBMNC细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）;CD3＋、CD4＋、CD5＋6阳性细胞数明显增加,CD8＋阳性细胞数明显降低,且IL-23作用后的PBMNC均对MUTZ-1细胞产生良好的杀瘤活性;与阴性对照组比较,IL-23作用后PBMNC细胞上清液中IFN-γ、TNF-α、TGF-β、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素mRNA和蛋白表达明显增加,呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论 IL-23能够明显促进PBMNC细胞增殖,并通过诱导PBMNC细胞表达IFN-γ、TNF-α、TGF-β、颗粒酶 A、颗粒酶B、穿孔素发挥杀伤MUTZ-1细胞作用。     

丹参对体外高糖环境中大鼠系膜细胞活性氧抑制作用的研究

目的：观察丹参对高糖环境中系膜细胞所产生的活性氧（ROS）及转化生长因子β1（TGF—β1）的抑制作用。方法：将细胞分为以下6组：对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）;高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）;小剂量丹参干预组（S1组,H组＋37．5mg·ml^-1丹参）;中剂量丹参干预组（S2组,H组＋75mg·ml^-1丹参）;大剂量丹参干预组（S3组,H组＋150mg·ml^-1丹参）;单纯丹参组（S组,C组＋150mg·ml^-1丹参）。分别采用激光共聚焦和ELISA法检测ROS及TGF—β1水平。结果：H组ROS水平较C组明显增高,分别采用不同浓度丹参干预后,ROS水平均显著降低,并呈剂量依赖性;与H组相比,不同剂量丹参干预组TGF-β1表达均降低,但仅S3组TGF—β1的下降具有统计学意义。与对照组相比,单纯丹参干预组中ROS和TGF—β1水平无明显变化。结论：丹参可减少高糖环境中系膜细胞ROS及TGF—β1的产生,而这可能是丹参发挥肾脏保护作用机制之一。     

紫草素调控转化生长因子β1/Smad信号通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞上皮-间充质转化和迁移能力

目的 探讨紫草素对转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β₁水平。(2)设细胞对照组、TGF-β₁9 pmol·L^-1组、TGF-β₁+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF...     

沉默KLF4表达对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响

目的 筛选有效沉默KLF4基因表达的siRNA,观察KLF4基因沉默对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响.方法 设计并化学合成针对人KLF4基因的3对siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3),转染人肝星状细胞HSC-LX2,以转染非特异siRNA作为阴性对照.采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)和Western blot方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默KLF4效果最好的1个siRNA,将其转染入HSC-LX2后,用MTT法检测KLF4沉默对HSC-LX2增殖的影响.采用ELISA法检测细胞培养上清中的转化生长因子1(transforming growth factor,TGF-1)、白介素1(interleukin-1,IL-1)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达情况.结果 Real-time RT-PCR和western blot均显示siRNA3沉默效果最好.故后续试验均采用siRNA3沉默KLF4的表达.MTT实验结果 显示,在转染siRNA3,12 h、24 h和48 h后,细胞活力出现明显下降.ELISA结果 显示,转染siRNA3,48 h以后,TGF-β1、TNF-α、IL-1β表达量也明显降低.结论 siRNA3可有效沉默KLF4基因表达,KLF4基因沉默可以抑制HSC-LX2的增殖,影响其生物学行为,使细胞中的促进胶原表达的三种细胞因子TGF-1、TNF-α以及IL-1表达量下降.     

黄芪多糖对脂肪组织巨噬细胞活化的影响及作用机制

目的 探讨黄芪多糖(APS)对脂肪组织巨噬细胞活化的影响及作用机制.方法 2018年11月至2019年5月,通过0.4μm孔径大小的Transwell小室共培养方式,将巨噬细胞种于上室,将脂肪细胞种于下室.实验分为三组,空白对照组(NC组)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导干预组(TNF-α组)和APS干预组(APS+TNF-α组),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和TNF-αmRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blotting)检测iNOS和磷酸化AMP活化蛋白激酶α1(p-AMPKα1)和沉默信息调节蛋白1(SIRT1)水平.同时,采用8μm孔径大小的Transwell小室共培养方式,结晶紫染色观察巨噬细胞的趋化情况.结果 与NC组比较,TNF-α组细胞培养上清液中IL-6和MCP-1水平显著升高(P<0.05),巨噬细胞中TNF-αmRNA、iNOS mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),p-AMPKα1和SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),趋化巨噬细胞数显著升高(P<0.05),其中NC组iNOS mRNA和蛋白水平分别为(1.00±0.17)、(0.43±0.05),TNF-α组分别为(3.57±0.31)、(1.18±0.16).与TNF-α组比较,APS+TNF-α组细胞培养上清液中IL-6和MCP-1水平显著降低(P<0.05),巨噬细胞中TNF-αmRNA、iNOS mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),p-AMPKα1和SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05),趋化巨噬细胞数显著降低(P<0.05),其中TNF-α组iNOS mRNA和蛋白水平(3.57±0.31)、(1.18±0.16),APS+TNF-α组分别为(1.87±0.22)、(0.62±0.08).结论 APS可抑制巨噬细胞的活化,其作用机制与激活AMPK/SIRT1信号通路有关.     

不同剂量模式照射对大鼠放射性肺损伤的影响

目的建立不同剂量分割模式照射的放射性肺损伤动物模型,初步探讨不同剂量分割模式照射对放射性肺损伤的差异。方法 Wistar大鼠90只随机分为小分次照射组(2 Gy/次,每周照射5次,共15次)、大分次照射组(10 Gy/次,每周照射1次,共3次)和对照组(不照射),用60Co-γ射线对大鼠右肺进行照射,于照射后第1,3,5,10,24周末取大鼠静脉血,采用ELISA测定血清中转化生长因子β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),并于各时间点处死大鼠取肺组织,进行HE染色观察肺组织损伤的病理变化。结果大分次照射组大鼠血清中TGF-β1含量从放疗后第1周开始,迅速呈线性增长,到第10周时血清中TGF-β1含量达峰值,第5周到24周均维持在一较高水平;而血清中TNF-α含量变化呈抛物线型态,即放疗后血清中TNF-α含量从第1周较低水平迅速升高,到第10周时达到峰值,此后迅速下降;小分次照射组在不同时间段血清TGF-β1、TNF-α较对照组有所升高,但升高的幅度明显小于大分次照射组;大鼠肺组织受照射后经历了一个从急性放射性肺炎到慢性肺纤维化的病理损伤过程,无论是急性放射性炎症还是放射性纤维化小分次照射组均较大分次照射组明显轻微。结论在接受相同剂量照射时,小分次照射组血清中TGF-β1、TNF-α含量升高幅度明显低于大分次照射组,且大鼠肺组织病理损伤的程度明显较大分次照射组轻,因而小分次照射对晚反应组织具有良好的保护作用。     

TGF-β_1和TNF-α在阿尔茨海默病大鼠海马中的相反表达及脑灵汤的干预研究

目的探讨TGF-β1和TNF-α在阿尔茨海默病(AD)模型大鼠发病中的作用,及脑灵汤的干预研究。方法采用向大鼠海马内注射Aβ1-42建立AD模型;用免疫组化法检测模型组、脑灵汤组及其他组的TGF-β1及TNF-α表达水平的变化。结果模型组的抗炎性细胞因子TGF-β1表达最少,而炎性因子TNF-α的表达最多;中药脑灵汤组的TGF-β1的表达程度明显高于AD模型组和正常组,均具有统计学意义(P<0.05),而炎性因子TNF-α的表达程度明显低于AD模型组(P<0.05)。结论 AD大鼠海马区域保护性的因子TGF-β1的表达减少,而炎性因子TNF-α的表达会增加。脑灵汤能调节二者的表达,从而影响AD的病理变化。