三七总皂苷对缺糖缺氧/再灌注损伤SH-SY5Y细胞NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对Nogo-NgR及其下游通路中NgR1和ROCK2 mRNA和蛋白的调控作用。方法:将SH-SY5Y细胞分为8组:正常组、模型组、维甲酸(retinoic acid,RA)组、三七总皂苷大(640 mg/L)、小(320 mg/L)剂量组、Y27632组、Y27632+三七总皂苷大、小剂量组,采用缺糖缺氧方法建立SH-SY5Y细胞损伤模型。应用实时荧光定量PCR和Western blot检测SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤后NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达特征及三七总皂苷对其影响。结果:模型组细胞中NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白的表达较正常组显著升高(P0.01);各给药组细胞中NgR1和ROCK2 mRNA水平较模型组均有较为显著的降低(P0.01或P0.05);Western blot结果显示Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中NgR1表达水平较模型组有显著差异(P0.01或P0.05);Rock2在三七总皂苷大剂量组、Y27632组和Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中,表达水平较模型组明显减少(P0.01或P0.05)。结论:三七总皂苷可能通过抑制NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白在缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞中的表达,进而促进轴突的生长和重塑。     

丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血-再灌注损伤的作用机制。方法选用SH-SY5Y神经细胞,采用缺氧-复氧结合缺糖-复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血-再灌注损伤,观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞线粒体的活性下降,凋亡率明显上升;而黄芩苷可以显著减轻上述损伤。结论黄芩苷对缺氧、缺糖-再灌注损伤的神经细胞有保护作用。     

红景天苷对缺氧缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察红景天苷对神经细胞系SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位和凋亡的影响.方法:四唑盐比色实验(MTT)检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果:缺氧/缺糖损伤2h可诱导SH-SY5Y细胞凋亡和坏死,分别为18.59%(P＜0.01)和4.94%(P＜0.01),形态学观察也发现SH-SY5Y细胞的染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,线粒体膜电位和活性分别降低29.17%(P＜0.01),38.80%(P＜0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多,线粒体膜电位和活性进一步下降;红景天苷能显著降低SH-SY5Y细胞凋亡及坏死的百分率,提高线粒体膜电位和活性,其作用随剂量增加而作用增加.结论:红景天苷可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.     

黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的 观察黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷、栀子苷治疗脑缺血/再灌注损伤的作用机制。方法 选用SH-SY5Y细胞,采用缺氧、复氧结合缺糖、复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血再灌注损伤,观察黄芩苷、栀子苷对此损伤的治疗作用。结果 缺氧、缺糖8 h结合复氧、复糖12 h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞突起皱缩、变圆,可见有部分细胞漂起,细胞轮廓不清,凋亡率明显上升,线粒体的活性下降;而黄芩苷、栀子苷可以显著减轻上述损伤。结论 黄芩苷、栀子苷对缺氧缺糖/再灌注损伤的神经细胞有保护作用。     

丹皮酚对Aβ1-42致神经元细胞毒的保护作用及机制

目的:考察丹皮酚对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤神经元的保护作用及机制.方法:取生长良好的新生大鼠海马神经元和经诱导分化后的SH-SY5Y细胞株,在培养液中加入不同浓度(1,5,10 μmol·L-1)的丹皮酚孵育6h后,再加入Aβ1-42寡聚体(30 μmol·L-1)分别孵育24,48 h.采用Heochst33258荧光染色法观察神经元的凋亡形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定SH-SY5Y细胞凋亡率,RT-PCR法检测神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,各剂量丹皮酚(1,5,10 μmol·L-1)显著减少海马神经元核固缩,降低SH-SY5Y细胞的凋亡率至22.4％,18.1％,16.4％,显著增加海马神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结论:丹皮酚可通过增加神经元BDNF和Bcl-2的表达,拮抗Aβ1-42寡聚体诱导的神经细胞损伤.     

通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用

目的探讨通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料，制备缺氧、缺糖损伤模型：MTT法测定PC12细胞存活数及乳酸脱清酶法测定细胞损伤程度。结果形态学检查发现，通塞脉微丸和丁基苯酞对两种损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用，MTT染色和乳酸脱氢酶活性测定显示，通塞脉微丸和丁基苯酞可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数，降低细胞损伤程度，其中以对缺氧损伤保护作用尤为显著。结论通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧和缺糖损伤模型均有显著保护作用。     

黄芪多糖通过失活Wnt信号通路抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡

目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-1、β-catenin mRNA表达。结果:与空白对照组比较,高糖(25、30、40 mmol/L)处理组细胞活力均显著降低(P0.05),且最适浓度为40 mmol/L,在该浓度下细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、β-catenin蛋白表达显著升高、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著降低,β-catenin mRNA显著升高(P0.05)。与模型组比较,黄芪多糖300、400 mg/L组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、β-catenin蛋白表达及β-catenin mRNA表达显著降低、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:黄芪多糖可抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与失活Wnt信号通路有关。     

芍药苷对PINK1-Parkin介导的线粒体自噬在H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的影响

目的观察芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤中线粒体自噬的影响,探讨其相关作用机制。方法采用250μmol/L H2O2诱导SH-SY5Y细胞24 h构建细胞损伤模型。实验细胞分为空白组、模型组和芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测细胞存活率,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位,TUNEL染色检测细胞凋亡率,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和p62蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组细胞存活率下降,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率上升,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达升高,Parkin蛋白表达无明显变化;与模型组比较,芍药苷低、中、高剂量组细胞线粒体膜电位上调,细胞凋亡率下降,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达降低,Parkin蛋白表达升高。结论芍药苷可显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能与调控PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径相关。     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达升高,Bax mRNA表达降低(P0.01)。而敲除Nrf2基因逆转异甘草素对OGD/R细胞的作用。结论异甘草素能减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,可能与激活Nrf2/ARE信号通路,增强SH-SY5Y细胞的抗氧化能力有关。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

银杏二萜内酯K抗血小板聚集及神经保护作用研究

观察不同浓度的银杏二萜内酯K(GK)对血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集的拮抗作用及对缺血再灌注损伤细胞和动物模型的神经保护作用。制备GK家兔含药血清,用血小板聚集功能测定法观察GK含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。建立缺糖缺氧复氧(OGD/R)细胞模型,采用Hoechst/PI双染考察不同浓度的GK对OGD/R损伤的SHSY5 Y细胞凋亡的影响;建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(I/R),检测GK对神经行为评分及脑梗死体积的影响。GK能剂量依赖性的抑制PAF诱导的血小板聚集,逆转OGD/R损伤造成的细胞凋亡并改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为评分及脑组织梗死体积。GK能抑制PAF诱导的血小板聚集、改善脑缺血再灌注神经损伤。     

参麦注射液对神经细胞凋亡及胞浆钙变化的影响

目的：研究神经细胞缺氧／缺糖培养诱导的凋亡发生率、胞内游离钙离子变化及参麦注射液的治疗作用。方法：碘化丙啶染色，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3负载，流式细胞仪观察胞内钙平均荧光值变化。结果：缺氧／缺糖培养可诱导神经细胞凋亡和引起细胞内游钙离子增高，参麦注射液能抑制细胞凋亡、降低细胞内游离钙钙离子浓度。结论：凋亡是神经细胞死亡方式之一，参麦注射液抑制缺氧／缺 导的神经细胞凋亡及钙超载，有社会细胞保护作用。     

Mulberrofuran G Protects Ischemic Injury‐induced Cell Death via Inhibition of NOX4‐mediated ROS Generation and ER Stress

The aim of this study was to investigate the neuroprotective effect of mulberrofuran G (MG) in in vitro and in vivo models of cerebral ischemia. MG was isolated from the root bark of Morus bombycis. MG inhibited nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase (NOX) enzyme activity and oxygen–glucose deprivation/reoxygenation (OGD/R)‐induced NOX4 protein expression in SH‐SY5Y cells. MG inhibited the expression of activated caspase‐3 and caspase‐9 and cleaved poly adenine dinucleotide phosphate‐ribose polymerase in OGD/R‐induced SH‐SY5Y cells. In addition, MG protected OGD/R‐induced neuronal cell death and inhibited OGD/R‐induced reactive oxygen species generation in SH‐SY5Y cells. In in vivo model, MG‐treated groups (0.2, 1, and 5 mg/kg) reduced the infarct volume in middle cerebral artery occlusion/reperfusion‐induced ischemic rats. The MG‐treated groups also reduced NOX4 protein expression in middle cerebral artery occlusion/reperfusion‐induced ischemic rats. Furthermore, protein expression of 78‐kDa glucose‐regulated protein/binding immunoglobulin protein, phosphorylated IRE1α, X‐box‐binding protein 1, and cytosine enhancer binding protein homologous protein, mediators of endoplasmic reticulum stress, were inhibited in MG‐treated groups. Taken together, MG showed protective effect in in vitro and in vivo models of cerebral ischemia through inhibition of NOX4‐mediated reactive oxygen species generation and endoplasmic reticulum stress. This finding will give an insight that inhibition of NOX enzyme activity and NOX4 protein expression could be a new potential therapeutic strategy for cerebral ischemia. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

SUMO-2/3活化介导丹参对缺血神经元的保护机制

[目的]从类泛素化(SUMO)角度研究丹参对缺血性脑血管病后的神经元保护机制。[方法]原代分离培养SD大鼠海马神经元细胞,免疫荧光方法予以鉴定;制作神经元体外氧糖剥夺(OGD)模型,分为对照组、OGD组和丹参治疗组;酶联免疫吸附(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,原位凋亡法检测凋亡细胞率;蛋白印记和免疫荧光方法检测SUMO-1和SUMO-2/3在细胞内的表达定量和定位情况。[结果]所培养细胞高表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白-2(MAP-2),胶质纤维酸性蛋白(GFAP),神经元纯度大于95%;ELISA结果显示,3组中LDH含量对照组丹参治疗组OGD组;凋亡细胞率对照组丹参治疗组OGD组;蛋白印记结果显示,神经元接受OGD处理后SUMO-2/3的蛋白表达量明显上升(P0.05),但SUMO-1无明显变化(P0.05),而丹参治疗能够进一步提高SUMO-2/3的表达(P0.05);免疫荧光结果显示OGD神经元发生了SUMO-2/3由细胞浆向细胞核的明显移位现象,而丹参治疗能够进一步增强这种效果。[结论]丹参能够通过诱导SUMO-2/3,而非SUMO-1的活化机制,发挥对缺血神经元的保护作用。     

五味子醇甲对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞的RAGE-ROS-凋亡通路的影响

目的探讨五味子醇甲(Schisandrin,SCH)对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE/ROS/凋亡通路的影响。方法MTT法检测control组、SCH高中低剂量组的细胞活力,探讨SCH高中低剂量组对SH-SY5Y细胞的保护作用。MTT法检测control组、Aβ组、Vitamin E组及SCH高中低剂量组细胞活力、双染法观察细胞凋亡和DHE染色法检测ROS含量,探讨SCH对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的保护作用。Western-blot法检测control组、Aβ组、SCH组RAGE蛋白,探讨SCH对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE影响。结果与control组比较,SCH各剂量组细胞活力均显著增强(P<0.01)。与Aβ组比较,各给药组细胞活力均明显增强(P<0.01)和细胞凋亡率均明显下降(P<0.01);各给药组检测ROS的荧光强度均减弱(P<0.01),SCH(5.0μg/mL)组RAGE蛋白表达降低,有显著性差异(P<0.05)。结论SCH防治阿尔茨海默病的抗氧化作用机制可能与降低ROS含量、细胞凋亡率和下调RAGE蛋白表达有关。     

活性氧对白附子水提物抑制人骨髓神经母细胞瘤细胞增殖作用的影响

目的 观察活性氧是否参与了白附子水提物抑制人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞的细胞增殖过程,以探讨白附子体外抗肿瘤作用的初步机理.方法 将白附子水提物处理人骨髓神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y) 24、48 h后,收集细胞,运用蛋白印记反应、流式细胞术等检测活性氧(ROS)水平及加入ROS抑制剂后的SH-SY5Y细胞凋亡水平.结果 白附子水提物诱导SH-SY5Y细胞凋亡的过程中ROS水平升高,从加药前的(4.9±1.6)％升至(39.7±11.8)％;加入ROS抑制剂后,白附子水提物诱导SH-SY5Y细胞凋亡水平降低.结论 ROS参与白附子水提物抑制SH-SY5Y的细胞增殖过程.     

知母须根总皂苷提取工艺的优化及其对糖氧剥夺损伤的PC12细胞保护作用研究

目的优化知母须根总皂苷提取工艺,探讨其对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的PC12细胞的保护作用。方法在单因素实验基础上,利用响应面法优化知母须根总皂苷提取工艺;建立OGD损伤的PC12细胞模型,采用终质量浓度为20、40、80 mg/L的知母须根总皂苷进行干预。分别用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)法测定细胞内活性氧(ROS)含量,Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率,蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果知母须根总皂苷提取的最优条件为乙醇体积分数72.22%,料液比1∶11,提取时间73.33 min,在此条件下,理论提取率为8.38%,实测提取率为8.33%。PC12细胞经OGD损伤4 h后细胞活力显著降低,知母须根总皂苷对其呈现保护作用,并随着知母须根总皂苷质量浓度的升高而增强;流式细胞术分析结果表明知母须根总皂苷能明显减少OGD损伤PC12细胞中ROS含量及凋亡率,免疫印迹实验结果表明知母须根总皂苷可上调PC12细胞Bcl-2表达并下调Bax表达。结论通过响应面法优化的工艺得率高、提取效果好。知母须根总皂苷对OGD损伤的PC12细胞具有一定的保护作用,其机制可能与减少OGD诱导PC12细胞ROS含量、抑制线粒体凋亡通路有关。