HPLC-MS/MS快速测定远志中远志(口山)酮Ⅲ和 3,6'-二芥子酰基蔗糖的含量

目的: 建立一种远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖含量的HPLC-MS/MS分析方法. 方法: 采用ZORBAX Eclipse plus C₁₈色谱柱,(4.6 mm×100 mm, 3.5 μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水 (28:72),流速0.3 mL·min^-1,进样量10 μL,柱温20 ℃.质谱条件:电喷雾负离子化模式,多反应监测模式 (MRM),检测离子对分别为m/z 567.2~345.1 (远志(口山)酮Ⅲ),m/z 753.3~205.1 (3,6'-二芥子酰基蔗糖). 结果: 两种成分的线性关系良好,分析过程只需6 min.远志(口山)酮Ⅲ的日内精密度和日间精密度的RSD分别为2.2%,2.5%,回收率为96.1%~101.7%(RSD 2.4%);3,6'-二芥子酰基蔗糖的日内精密度和日间精密度的RSD分别为2.3%,2.4%,回收率为95.7%~101.4% (RSD 2.0%). 结论: 该方法快速、灵敏、选择性好,适合远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖的定量分析.     

不同光质光强对远志生长和相关酶活性及成分的影响

目的通过研究远志在不同光质光强下的生长、生理特性及成分变化情况,为远志的人工栽培,提高产量、增加目标成分含量提供理论依据。方法以远志直播苗为实验材料,光质设置白光、黄光、红光、蓝光4种光质,光强设置100、300、500μmol/(m2·s) 3个强度梯度,光照30 d后测定远志的株高、根长、叶长、叶宽、丙二醛(MDA)含量、抗氧化酶活性及主要活性成分含量。结果红光下远志的株高、根长、叶长、生物量均达到最大。黄光下MDA含量最小,白光下MDA含量最大。红、蓝光下超氧化合物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著升高。蓝光下总黄酮、总酚、3,6′-二芥子酰基蔗糖含量最高。不同光质对远志酮Ⅲ的含量无显著性影响。300μmol/(m2·s)的光照强度下远志株高最高生物量最大,500μmol/(m2·s)光强下远志根长最长。叶片中的MDA含量及SOD、POD、CAT活性随着光照强度的增大而逐渐增大。不同光强对总黄酮、总酚及远志酮Ⅲ含量无显著性影响,300μmol/(m2·s)下3,6′-二芥子酰基蔗糖含量最高。结论红光对远志根的促进作用最强,红、蓝光可显著提高POD、SOD、CAT活性,蓝光对总黄酮、总酚、3,6′-二芥子酰基蔗糖积累的促进最强。500μmol/(m2·s)的光强对远志根的促进作用最强,且叶片的POD、SOD、CAT活性较高,不同光强对总黄酮、总酚及远志酮Ⅲ含量无显著性影响,300μmol/(m2·s)可促进3,6′-二芥子酰基蔗糖的积累。     

基于指纹图谱和多指标含量测定的蜜远志质量评价

目的 建立指纹图谱和多指标定量的蜜远志质量评价方法。方法 Kromasil 100-5-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）为固定相,以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长318 nm。对16批蜜远志建立指纹图谱,确定共有峰并进行相似度分析结合化学计量学分析。采用Waters Xbridge Shiled RP C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）进行同时测定远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的含量。结果 在指纹图谱研究中,标定了27个共有峰,结合对照品和HPLC-Q-TOF-MS共指认8个成分,分别为西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志（口山）酮IX、远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元。聚类分析将16批样品分为3类;经主成分分析,主成分1～3是影响蜜远志质量评价的主要因子。多指标含量测定中远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的质量分数分别为0.027%～0.068%、0.074%～0.798%、1.1%～1.4%、0.15%～0.36%、0.15%～0.37%。经方法学验证,线性关系良好（r≥0.999 6）,平均加样回收率为97.15%～100.9%。结论 所建立的指纹图谱结合多指标含量测定方法准确、高效,特征性强,可为蜜远志饮片的质量评价和临床应用提供有效参考。     

复方桔梗止咳片中远志、甘草的含量测定及质量情况分析

目的:建立复方桔梗止咳片中远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖)和甘草(甘草酸)中成分的含量测定方法,了解复方桔梗止咳片的整体质量情况,保障公众用药安全有效。方法:采用HPLC,MG C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0. 05%磷酸水溶液(18∶82)检测远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖),(35∶65)检测甘草(甘草酸),进样量20μL,柱温30℃,流速1. 0 m L·min-1,检测波长320 nm检测远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖),250 nm检测甘草(甘草酸)。结果:3,6'-二芥子酰基蔗糖在0. 105 8～2. 643 8μg呈良好的线性关系(r=0. 999 5),甘草酸在0. 077 0～5. 773 0μg呈良好的线性关系(r=1. 000 0),3,6'-二芥子酰基蔗糖和甘草酸的平均回收率分别为96. 2%和95. 6%,RSD分别为1. 2%和0. 9%;通过对178批样品中远志和甘草成分的含量测定,发现部分生产企业存在不投、少投或用劣质药材(饮片)投料现象,且不同生产企业、同一企业不同批号之间的质量情况差异较大。结论:该方法简便、准确、重复性好、灵敏度高,为复方桔梗止咳片的全面质量控制提供了科学依据。     

蜜远志配方颗粒质量标准的研究

目的建立蜜远志配方颗粒(蜜远志)的质量标准。方法 TLC法定性鉴别细叶远志皂苷和远志口山酮Ⅲ,HPLC法定量测定细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖含有量。结果 TLC斑点清晰,分离度好。细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖分别在0.010 2~1.023 9 mg/mL(R~2=0.999 1)、0.004 0~0.495 6 mg/mL(R~2=0.999 3)、0.005 0~0.545 2 mg/mL(R~2=0.999 3)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.29%、97.61%、102.73%,RSD分别为1.99%、0.90%、1.57%。结论该方法稳定可行,可用于蜜远志配方颗粒的质量控制。     

不同商品等级远志药材的质量分析研究

目的建立不同商品等级远志的主要成分分析方法,探索远志商品等级性状与主要化学成分指标间的关联性。方法采用HPLC法对河北安国药材市场、西安万寿路药材市场、四川荷花池药材市场、安徽亳州药材市场商品等级的远志进行主要成分测定,利用数据处理软件进行各等级与成分间的相关性分析研究。结果不同市场商品等级远志的主要成分测定结果与其商品等级不完全相符。结论药材市场上远志商品等级的划分标准具有一定的局限性,为准确评价远志质量,还需制定新的远志药材等级质量标准,本研究也为远志的综合定量评价提供了一定的参考依据。     

不同干燥方法对远志筒及根中主要化学成分的影响

目的考察晒干、阴干、热风干燥(40、50、60、70℃)、微波干燥和冷冻干燥5种干燥方法对远志筒及根中主要化学成分的影响。方法运用HPLC法测定不同干燥方法对远志筒及根中远志酮III、3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志酸、远志皂苷元、细叶远志皂苷的组成和含量变化;采用单因素方差分析和TOPSIS法对数据进行综合分析。结果远志筒和根的干燥方法优选顺序存在差异,远志筒不同干燥方法对有效成分影响的优劣排序为微波干燥60℃热风干燥50℃热风干燥70℃热风干燥冷冻干燥40℃热风干燥阴干晒干;远志根中,不同干燥方法的排序为微波干燥60℃热风干燥阴干晒干50℃热风干燥40℃热风干燥70℃热风干燥冷冻干燥。结论结合生产实践,微波干燥和60℃热风干燥是远志筒和根较适宜的干燥方法,可为远志不同规格药材产地干燥方式的确定提供依据。     

远志HPLC指纹图谱及rbcL序列分子鉴定研究

目的 建立14批不同产地远志药材HPLC指纹图谱并利用化学计量学方法对其进行质量评价。采用DNA分子鉴定技术对远志药材进行物种鉴定,为远志药材质量控制提供依据。方法 选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,0.5μm）,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长316 nm,进样量10μL,运用软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012版）对14批远志药材进行相似度评价,确认共有峰,对测定结果进行聚类分析和主成分分析,并结合正交偏最小二乘-判别分析对样品进行模式识别。提取14批远志以及白薇、瓜子金样品的DNA进行序列分析和物种鉴定,并从NCBI数据库下载混淆品的序列,借助MEGA-X计算遗传距离并构建系统发育树。结果 建立了14批远志药材的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,相似度均大于0.918,化学计量学分析将14批远志药材分为3类。经DNA分子鉴定,14批远志药材均为远志科植物远志Polygala tenuifolia,遗传距离和NJ树分析可将远志与混淆品区分开。结论 所建立的H...     

基于肠道菌群和短链脂肪酸代谢探讨甘草制远志降低肠道炎症的作用机制

目的 研究远志甘草制前后对正常大鼠肠道菌群和短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）代谢的影响,探讨甘草制远志降低肠道炎症的机制。方法 SD大鼠连续15 d ig远志或制远志后,ELISA法检测十二指肠组织中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;苏木素-伊红（HE）染色观察肠组织病理变化;采用16S rDNA测序技术检测大鼠肠道菌群结构变化;运用气相色谱法测定大鼠粪便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量。结果 甘草制远志可显著降低远志引起的大鼠十二指肠组织中IL-6、IL-8、TNF-α水平升高和肠道炎症损伤（P<0.05、0.01）。16S rDNA测序结果显示,甘草制远志后可改善远志引起的大鼠肠道菌群结构改变和物种多样性减少,在门水平上主要表现为厚壁菌门（Firmicutes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）相对丰度回升（P<0.05、0.01）,拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobact...     

一氧化氮、茉莉酸甲酯与水杨酸对肉苁蓉悬浮细胞生长及苯乙醇苷生物合成的影响

 目的 研究一氧化氮（NO）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate, MJ)与水杨酸（salicylic acid, SA)对肉苁蓉悬浮细胞生长和苯乙醇苷（PeGs）生物合成的影响。方法 肉苁蓉细胞悬浮培养体系中加入硝普钠（sodium nitroprusside, SNP)、MJ和SA诱导子。结果 低浓度外源性NO有利于悬浮细胞的生长,但对PeGs的积累作用不明显,MJ和SA有利于PeGs的积累,但抑制悬浮细胞的生长,且三者的最适作用浓度和作用时间存在差异。在细胞培养初期（0 d）加入0.05 mmol·L-1SNP,细胞对数生长初期（12 d）加入50 μmol·L-1 SA,对数生长中期（16 d）加入20 μmol·L-1 MJ,细胞干重可达对照组的1.42倍,PeGs总量可达373.52 mg·L-1,约为对照的4.17倍;松果菊苷可达21.892 mg·g-1,为对照的4.02倍。结论 3种诱导子协同作用能够显著提高肉苁蓉细胞悬浮培养体系中次生代谢产物的含量。     

远志生物碱成分的研究

从远志根中得到7种生物碱,经理化常数和光谱分析鉴定为N₉-甲酰基哈尔满,1-丁氧羰基-β-咔啉,1-乙氧羰基-β-咔啉,1-甲氧羰基-β-咔啉,perlolyrine,降哈尔满和哈尔满。均为该属植物中首次得到,其中1-丁氧羰基-β-咔啉为未见报道的新化合物。     

远志抗抑郁有效部位中寡糖酯单体的分离及活性研究

目的：研究远志的抗抑郁活性成分。方法：用色谱法分离远志的化学成分，根据波谱学分析鉴定了化合物的结构，用MTT法评价其细胞毒活性。结果从远志分离得到8个化合物，分别鉴定为：西伯利亚远志糖A₁(sibiricose A₁，1)，西伯利亚远志糖A₅(sibiricose A₅，2)，tenuifoliside A(3)，西伯利亚远志糖A₆(sibiricose A₆，4)，3，4，5-三甲氧基肉桂酸甲酯(3，4，5-trimethoxycinnamate，5)，远志酮Ⅲ(polygalaxanthone Ⅲ，6)，tenuifolioses A(7)，tenuifolioses H(8)。结论：化合物1为首次从远志中分离得到,远志中的寡糖酯类成分对谷氨酸造成的PC12细胞损伤均有一定的保护作用。     

远志水提取物对家兔心肌收缩力及心房尿钠肽分泌的影响

目的:观察远志水提取物对家兔心肌收缩力及心房尿钠肽分泌的影响.方法:采用家兔离体搏动心房灌流模型,观察远志水提取物对家兔心肌收缩力及心房尿钠肽分泌的影响.环磷酸腺苷(cAMP)和心房尿钠肽(ANP)含量的测定均采用放射免疫法.结果:远志水提取物可使家兔的心房每回搏出量、搏动压和灌流液中cAMP流出量比给药前呈现剂量依赖性递增趋势(P＜0.05).同时,它还可以明显地抑制ANP的分泌(P＜0.01).在阻断β-肾上腺素受体(β-adrenorecptor,β-AR)及选择性阻断β1-AR时能显著抑制远志水提取物对心肌收缩力的增强作用(P＜0.05);而选择性阻断β2-AR时却无任何影响.此外,阻断L-型Ca2+通道及选择性抑制蛋白激酶A(PKA)的活性能明显抑制远志水提物对心肌收缩力的增强作用(P＜0.05).结论:远志水提取物主要通过影响β1-AR-cAMP-Ca2+信号传导途径增强心肌收缩力,并对ANP分泌具有抑制作用.     

细叶远志的化学成分研究

目的 :对常用传统中药细叶远志Polygala tenuifolia的根进行化学成分研究。 方法 :采用色谱技术进行分离 ,通过¹H ,¹³C NMR等波谱技术确定化合物的结构。结果 :分离并鉴定了 5个化合物 :4-C-β-D-吡喃葡萄糖-1,3 ,6-三羟基-7-甲氧基氧杂蒽酮苷(1) ,4-[C-β-D- 呋喃芹菜糖基 (1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]-1,3 ,6-三羟基-7-甲氧基氧杂蒽酮苷( 2 ) ,远志皂苷元 ( 3 ) ,远志皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 4 )和 β-胡萝卜苷 (5)。 结论 :其中化合物-1,3 ,4和 5系首次从该植物中分得 ,化合物 1为新的天然产物。     

远志种子检验规程

目的：为规范中药材种子市场,保证种子的质量,制定远志种子检验规程。方法：通过对远志种子净度、真实性、发芽率、生活力、千粒重和含水量等指标的研究,确定几项指标的标准检验方法。结果与结论：建立了远志种子检验规程。     

远志花粉活力与柱头可授性分析

目的:研究远志花粉活力和柱头可授性,以期为远志的有性繁殖和杂交育种工作研究提供科学依据。方法:用I2-KI法,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法测定不同开花天数(开花前一天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天)的远志花粉活力变化,并比较2种染色方法对远志花粉活力的染色效果。用I2-KI法分别测定1 d中不同时间段的远志花粉活力、不同贮藏方法(湿法保存的花朵和干法保存的花朵)的远志花粉活力及不同贮藏条件(4,26,-20,-80℃)条件下贮藏不同时间(2,4,8,24,48,72 h)远志花粉活力。用联苯胺-过氧化氢法测定其柱头可授性。结果:(1)远志的花粉活力随着散粉时间的延长而逐渐降低,在开花后第4天花粉活力最高;(2)在一天8:00~18:00中,10:00~16:00的花粉活力较强;(3)干燥花粉在-20℃贮藏的条件下能延长花粉的贮藏时间;(4)开花后第5天柱头可授性最强。结论:可以采集花后第4天的花粉对花后第5天的柱头进行人工授粉杂交,为远志良种选育提供理论依据。     

从农艺性状及化学成分测定分析远志药材商品品规和良种选育的合理性

通过对18份具有不同农艺性状特征的远志样品进行农艺性状(株高、根直径、根长、第一侧根分叉高度、侧根数、根重)分析,并采用HPLC对18份远志样品的3个指标性化学成分(细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖)进行含量测定,最后通过散点图分析6个农艺性状与3个指标性化学成分的相关性。研究发现18份远志样品中的3个指标性化学成分含量与远志根直径均无明显相关性,且细叶远志皂苷含量与其余5个农艺性状也无明显相关性;远志酮Ⅲ在主根长较短、第一侧根分叉高度较短,侧根数较多的远志样品中含量较高;3,6'-二芥子酰基蔗糖在主根长较长的远志样品中含量较高。可见现行远志药材商品规格标准及等级划分与良种选育方法,并不符合优等药材其体内指标性化学成分含量较高的药典标准,所以急需制订出具有科学数据支撑的远志商品规格等级标准及良种选育方法。     

不同产地野生远志中5种主要成分的含量测定及质量分析

目的研究不同产地野生远志Polygala tenuifolia中5种主要成分的含量差异,为远志多成分质量评价体系提供基础。方法采用HPLC法测定20个产地野生远志中远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志酸、远志皂苷元和细叶远志皂苷的含量,运用SPSS 20.0和SIMCA 11.5进行差异性、聚类、相关性和主成分分析。结果不同产地野生远志中5种主要成分的含量差异显著,聚类分析和主成分分析可将所有样品聚为2类,第Ⅰ类所含3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志酮Ⅲ、远志皂苷元和细叶远志皂苷含量较高,来自陕西渭南、陕西咸阳和山西新绛,其余样品则聚为第Ⅱ类。结论陕西渭南、陕西咸阳和山西新绛所产野生远志中主要成分含量较高,与其他产地存在极显著性差异,可为远志质量评价、优良种质及栽培基地选择等提供依据。     

远志bZIP基因家族的鉴定及表达分析

目的 鉴定远志Polygala tenuifolia bZIP基因,为远志抗逆性改良及次生代谢调控研究提供参考。方法 基于远志三代全长转录组数据库,采用生物信息学方法对远志bZIP基因家族成员进行鉴定和分析,并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析其在不同组织及处理中的表达特性。结果 共鉴定得到27个含有特征性保守结构域的PtbZIP基因,编码蛋白质的氨基酸数量为143 aa（PtbZIP24）～846 aa（PtbZIP9）,相对分子质量范围为16201.52～92932.30,等电点（pI）介于4.59～9.69,其中25个家族成员为不稳定蛋白,所有家族成员均为亲水性蛋白。蛋白二级结构主要由α螺旋和无规卷曲构成,均无信号肽,存在多种互作现象。进化树分析将27个PtbZIP蛋白分为A、B、C、D、F、G、I、S 8个亚组,其中G亚组含有PtbZIP家族成员数量最多（共有8个）,占总数的29.63%,没有PtbZIP基因被归类到E和K组。PtbZIP家族基因的密码子偏好性较弱,适应性较弱。表达模式分析显示,PtbZIP4/15在叶中的表达量最高,茎和根次之;PtbZIP8/24在茎中的表达量最高,叶和根次之;PtbZIP1/17的表达量为根＞叶＞茎;其余21个的表达模式均为根＞茎＞叶。qPCR结果表明,PtbZIP26基因受脱落酸、壳聚糖的诱导,且能显著应答干旱和盐胁迫。结论 鉴定了远志bZIP家族基因及其分子特征,为进一步研究PtbZIP基因在调控远志发育及次生代谢物合成方面的生物学功能奠定基础。