辛伐他汀对体外培养人牙周膜细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的：体外观察一定浓度的辛伐他汀对人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原能力的影响,探讨辛伐他汀对牙周组织再生的影响。方法：体外培养人牙周膜细胞,进行鉴定后,取第5代细胞用于实验。实验分0.125、0.250、0.500、1.000μmol/L辛伐他汀组和对照组,加药3d后,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞合成Ⅰ型胶原能力。结果：4个辛伐他汀实验组均可促进人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原,与对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）,但实验组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：辛伐他汀可促进人牙周膜细胞合成Ⅰ型胶原。     

转染Smad 7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

 [摘要] 目的 探讨Smad 7基因对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、Col Ⅲ）表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR和Western blot法，检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、Col Ⅲ表达改变。结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆（S-22与S-26），并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制, 其中S-22克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA表达分别降低47 %和56 ％，其蛋白表达分别降低65 %和54 ％。结论 Smad 7可能通过抑制组织内ColⅠ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。     

肺癌细胞自分泌collagen Ⅰ在三维培养中促进肺癌细胞的生长

目的 研究肺癌细胞自分泌的胶原Ⅰ型(collagen Ⅰ)在肺癌细胞三维培养的作用.方法 通过免疫组化和RT-PCR证实肺癌细胞表达collagen Ⅰ;采用sh-collagen Ⅰ方法干扰肺癌细胞的表达,正常肺癌细胞作为对照组;用成纤维细胞的上清液刺激肿瘤,RT-PCR检测collagen Ⅰ的表达.结果 肺癌细胞分泌collagen Ⅰ;发现敲除collagen Ⅰ的肺癌细胞的三维生长受到限制:其生长率下降,三维培养中克隆形成减少.采用成纤维细胞培养细胞上清液刺激肿瘤细胞,肺癌肿瘤细胞自分泌的collagen Ⅰ表达发生改变,肿瘤自分泌的collagen Ⅰ可以维持自身生长的需要并受到微环境中非细胞外基质的调控.结论 肺癌细胞自分泌的collagen Ⅰ对肿瘤的生长有着重要作用.     

人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA对TGF-β1诱导Ⅰ型胶原表达的抑制效应

目的 观察人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原高表达的有效性.方法 首先构建人鼠同源的Ⅰ型胶原siRNA表达质粒.转染大鼠系膜细胞,用KT-PCR.方法 观察对Ⅰ型胶原的直接抑制作用;经不同浓度(1 ng、5 ng、10 ng)的TGF-β1刺激后,再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒,KT-PCK方法观察其抑制效应.结果 1～4 μg的Ⅰ型胶原siRNA质粒均能使COL1A1基因条带表达下调,并随siRNA质粒浓度增加,抑制作用逐渐增强.大鼠系膜细胞经TGF-β1刺激,Ⅰ型胶原基因表达明显增强,并具剂量依赖性.再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒后,TGF-β1+Ⅰ型胶原siRNA质粒各组与相应浓度的单纯TGF-β1各组比较COL1A1基因条带均减弱,显示出抑制效应.结论 本实验构建的人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA质粒,在大鼠系膜细胞内不仅能够直接抑制Ⅰ型胶原的基因表达,而且对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原表达增加同样具有较好的抑制作用.本实验结果可望为肾脏纤维化的防治提供思路.     

Ⅰ型胶原在胎鼠骺板的表达及其与雌激素的关系

目的 研究胚胎骺板Ⅰ型胶原的表达情况及雌激素对其表达的影响。方法 采用免疫组织化学方法，研究体外培养胚胎小鼠长骨骺板静止区、增殖区和肥大区Ⅰ型胶原蛋白表达情况，同时观察１０＾－７、１０＾－８、１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ雌酚酮对其表达水平的影响。结果 正常对照组骺板各区均有Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞。当培养基中雌酚酮浓度为１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ和１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时，各区Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积与对照组相比均增加。当浓度降至１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ时，则与对照组差异不显著。随浓度升高，静止区和肥大区阳性细胞面积呈逐渐增加趋势。除１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ浓度下，静止区阳性细胞数与对照组相比增加外，各实验浓度下，各区阳性细胞数与对照组相比差异不显著。结论 在体外培养条件下，胚胎小鼠骺板静止区、增殖区和肥大     

Ⅰ型胶原对Ⅲ型胶原基因在切口疝病人培养的成纤维细胞中的表达

目的 探索细胞外基质在疝组织改变或由于成纤维细胞转彔缺陷导致切口疝发生过程中培养的成纤维细胞中Ⅰ型胶原Mrna和Ⅲ型胶原Mrna表达.方法 成纤维细胞来自切口疝病人和复发性切口疝病人,对照组来自正常健康组织而没有经过手术皮肤病人和虽有切口癍痕但无临床表现切口疝病人.用RT-PCR和Northern Blotting确定Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna比率.结果 RT-PCR结果表明了Ⅰ型胶原Mrna在切口疝病人(0.90±0.04)和复发性切口疝病人(1.19±0.04)组中,标相应地在癍痕组织(0.54±0.02)和健康组织(0.43±0.01).然而Ⅲ型胶原Mrna在切口疝病人显著增加至4.13±0.04和复发性切口疝病人增加至6.02±0.03,而在癍痕组织2.29±0.04,在健康组织中为1.72±0.03.疝病人的成纤维细胞Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna比率显著减少(P＜0.01).结论 在培养的皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna的比率减少,表明在切口疝病人存在胶原蛋白代谢紊乱.因此一个损伤的伤口愈合过程可能解释临床缝合修补疝组织不尽满意结果的原因.     

氟对体外培养人牙乳头间充质细胞合成Ⅰ型胶原的影响

目的明确氟对人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原的影响.方法对人牙乳头细胞进行体外培养,分别给予0.0、0.2×10-6、1.0×10-6、5.0×10-6、25.0×10-6g/L氟处理,采用免疫细胞化学方法染色,图象分析氟对细胞合成Ⅰ型胶原的影响.结果Ⅰ型胶原在对照组和4种氟浓度处理组细胞表达均为阳性.图象分析结果表明,4种氟浓度对体外培养的人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原量与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论过量氟对牙本质基质Ⅰ型胶原的影响可能不是通过影响成牙本质细胞内合成实现的.     

血尿Ⅰ型胶原交联C端肽和Ⅰ型胶原交联N端肽在骨关节结核转移的研究

目的探讨骨关节结核患者血尿Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)和Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)变化水平与结核杆菌骨关节转移程度的相关性。方法选取健康体检人群、肺结核患者和骨关节结核患者各60例,测定三组人群血尿CTX、NTX的含量及血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原C-末端前肽(PICP)、Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)变化水平。对比观察三组人群血尿CTX、NTX的含量,血清BALP、PICP、PINP水平,血CTX、NTX和尿CTX、NTX与抗结核治疗效果的相关性。结果骨关节结核组的血CTX、NTX和尿NTX的含量与健康对照组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而三组间尿CTX含量差异无统计学意义(P>0.05);骨关节结核患者血清中PICP、PINP明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),三组间血清BALP差异无统计学意义(P>0.05);血CTX、NTX和尿NTX、CTX与抗结核治疗效果均呈明显正相关(P<0.05)。结论骨关节结核组患者血CTX、NTX和尿NTX含量明显高于健康对照组,在排除骨质疏松症和骨肿瘤等破坏性骨相关疾病的肺结核患者早期检测血尿CTX、NTX含量可作为预测骨关节结核转移的重要参考指标。     

牛磺酸对心肌肥厚纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的研究牛磺酸对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚纤维化的治疗作用。方法实验分3组,（异丙肾上腺素）Iso组予以皮下注射异丙肾上腺素0.5 mg/（kg.d）,连续10天;牛磺酸组（Iso＋Tau组）予以牛磺酸灌胃300 mg/（kg.d）及异丙肾上腺素皮下注射（同Iso组）;正常对照组皮下注射等量生理盐水。于实验第10、30天处死大鼠取材,测定心重系数、左心室质量指数,RT-PCR对Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA进行半定量测定。结果小剂量异丙肾上腺素可致左心室重量增加,使得Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达升高,而牛磺酸可以减少其表达,并降低心重系数和左心室指数。结论牛磺酸可以缓解异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚和纤维化。     

鼠尾胶为贴黏剂的微血管内皮细胞培养

目的:以鼠尾胶为贴黏剂,建立一种成本低且生长状态良好的微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下制作鼠尾胶,并均匀铺在培养皿中。分离收集脑微血管段,接种于铺有鼠尾胶的培养皿中进行培养。用内皮细胞的两种重要标记物VIII因子相关抗原和γ-谷氨酰转酞酶(-γglutamyl-transpeptidase,γ-GT)鉴定细胞,并以3H-TdR掺入法观察培养细胞对血清刺激的增殖反应性。结果:显微镜观察从脑微血管段生长出的细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征和接触生长抑制;VIII因子免疫组织化学染色呈阳性;培养上清含有大量的γ-谷氨酰转酞酶[(5.01±0.07)IU/L];证实鼠尾胶做为贴黏剂获得的是内皮细胞。10%胎牛血清刺激后3H-TdR掺入率较对照组增加87.5%(P<0.05)。结论:本研究用鼠尾胶做为贴黏剂,降低微血管内皮细胞培养成本,且细胞生长状态良好,表明该方法是一种比较经济可靠的微血管内皮细胞培养体系。     

Matrigel胶的肺腺癌细胞株A549体外三维培养的实验研究

目的研究肺腺癌细胞株A549三维体系培养及其细胞行为的改变。方法对三维培养基质Matrigel水凝胶进行材料表征,研究其纳米纤维网络的形成。观察细胞在三维环境中的克隆形成,形貌及存活力,并检测了细胞形成克隆后的药敏性,同时比较二维及三维培养的细胞对胞外基质蛋白粘附率的差异。结果Matrigel胶形成了类似于体内胞外基质的纳米纤维网络结构。在Matrigel胶中,A549细胞生长呈现出球形的多细胞克隆,生长状态均较好,与材料具有较好的生物相容性。随着克隆的增长,细胞对外界刺激的抵抗性及抗药性增加,药敏性降低。二维和三维培养下的A549细胞对不同的胞外基质蛋白的粘附率存在显著差异。结论细胞在Matrigel胶三维培养中,细胞的生长,形貌,存活力,药教性及粘附性等细胞行为与二维培养的细胞具有显著性的差异,可为抗药性研究及细胞信号通路的研究等提供研究基础。     

主动脉平滑肌细胞的三维培养研究

目的研究主动脉平滑肌细胞(aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白。方法取一周龄SD大鼠胸主动脉,经原代、传代培养后,和胶原、血清及培养液混合形成ASMC胶原凝胶,进行三维培养;培养2周后用Comori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维,并进行电镜观察。结果传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定,98％以上为ASMC。培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在,电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型。结论 ASM在三难培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维。     

氟对体外培养人牙乳头间充质细胞合成I型胶原的影响

目的:明确氟对人牙乳头细胞合成 I型胶原的影响。 方法:对人牙乳头细胞进行体外培养 ,分别给予0 .0、0 .2× 10 - 6、1.0× 10 - 6、5 .0× 10 - 6、2 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟处理 ,采用免疫细胞化学方法染色 ,图象分析氟对细胞合成 I型胶原的影响。 结果:I型胶原在对照组和 4种氟浓度处理组细胞表达均为阳性。图象分析结果表明 ,4种氟浓度对体外培养的人牙乳头细胞合成 I型胶原量与对照组相比差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。结论:过量氟对牙本质基质 型胶原的影响可能不是通过影响成牙本质细胞内合成实现的     

乳腺癌组织中耐药和转移相关基因联合表达的临床病理分析

目的 :联合检测乳腺癌组织中 P-糖蛋白 (P-gp)、谷胱甘肽 -S-转移酶 (GST-π)、拓朴异构酶 (Topo ) 3种耐药基因和 nm2 3、CD44 V62种转移相关基因 ,观察其表达情况与临床病理特征的关系。方法 :采用 S-P法和二步法的免疫组化方法检测耐药基因 P-gp、GST-π、Topo 和肿瘤转移相关基因 nm2 3 -H1、CD44 V6在 112例乳腺癌中的表达。结果 :P-gp、GST-π、Topo 与nm2 3、CD44 V6的阳性表达率分别为 5 6.2 %、67.8%、72 .3 %和 65 .2 %、72 .3 % ,相互之间过表达相关性不明显 (P>0 .0 5 ) ;nm2 3、CD44 V6与淋巴结转移有关 (P<0 .0 1)。结论 :作用于乳腺癌的耐药基因和肿瘤转移相关基因相互之间无相关性 ,可能具有不同作用机制 ,每个基因具有独立的临床意义。     

Diallyl disulfide and diallyl trisulfide in garlic as novel therapeutic agents to overcome drug resistance in breast cancer

Breast cancer is one of the leading causes of cancer-related deaths in women worldwide. It is a cancer that originates from the mammary ducts and involves mutations in multiple genes. Recently, the treatment of breast cancer has become increasingly challenging owing to the increase in tumor heterogeneity and aggressiveness, which gives rise to therapeutic resistance. Epidemiological, population-based, and hospital-based case-control studies have demonstrated an association between high intake of certain Allium vegetables and a reduced risk in the development of breast cancer. Diallyl disulfide (DADS) and diallyl trisulfide (DATS) are the main allyl sulfur compounds present in garlic, and are known to exhibit anticancer activity as they interfere with breast cancer cell proliferation, tumor metastasis, and angiogenesis. The present review highlights multidrug resistance mechanisms and their signaling pathways in breast cancer. This review discusses the potential anticancer activities of DADS and DATS, with emphasis on drug resistance in triple-negative breast cancer (TNBC). Understanding the anticancer activities of DADS and DATS provides insights into their potential in targeting drug resistance mechanisms of TNBC, especially in clinical studies.     

AC-T序贯化疗方案对三阴性乳腺癌患者乳腺癌耐药蛋白、P-糖蛋白表达的影响

目的 探究AC-T序贯化疗方案对三阴性乳腺癌患者乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)、P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 选取南通市妇幼保健院2012年3月至2013年3月收治的80例不可手术的分子分型为三阴性乳腺癌患者为观察对象,采用随机数字表法分成观察组(n=40)和对照组(n=40),观察组采用4个周期AC-T序贯化疗方案,对照组采用四个周期FAC化疗方案,两者化疗后均采用三维适形放射治疗,对两组化疗后的无病生存期(DFS)、总生存率(OS)及患者乳腺癌耐药蛋白、P-糖蛋白表达情况进行比较.结果 化疗期间观察组和对照组均出现1例患者死亡.化疗后,观察组患者1年、3年的DFS分别为92.5％、82.5％,对照组为87.5％、77.5％;观察组OS为87.5％,对照组为85.0％,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).观察组和对照组患者化疗前BCSCs微球体数目分别为(2±1)个和(2±1)个、直径为(112.3±4.5)μm和(113.3±4.0)μm,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);化疗后,观察组和对照组BCSCs微球体直径均较化疗前显著增大,分别为(259.7±5.8)μm和(261.3±5.9)μm,组内比较差异有统计学意义(P<0.05);而BCSCs微球体数目分别为(2±1)个和(2±1)个,组内比较差异无统计学意义(P>0.05).化疗前,两组患者BCSCs微球细胞ABCG2、P-gp、CD44+、CD24-蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05),化疗后两组患者ABCG2、P-gp、CD44+蛋白表达显著升高,CD24-蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且观察组ABCG2、P-gp、CD44+蛋白表达显著低于对照组,CD24-蛋白表达显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 AC-T序贯化疗方案进行新辅助化疗治疗乳腺癌与FAC方案疗效相当,但出现肿瘤耐药程度轻于FAC化疗方案.AC-T序贯化疗方案治疗乳腺癌确实会下调癌细胞ABCG2、P-gp表达,从而减轻患者的耐药性.     

肺腺癌细胞株体外三维培养模型的建立及其药物敏感性的观察

目的探讨肿瘤细胞三维培养的理想方法,为模拟体内实体瘤细胞间相互作用提供良好模型.方法在抑制细胞贴壁、间断振荡条件下,培养无载体三维细胞模型;利用微载体CutiSpher进行多细胞球(muhicellular spheroids,MCS)培养;MTF法检测单层细胞(monolayer cells,MC)药物敏感性,细胞计数法检测MCS药物敏感性;利用透射电镜比较MCS与MC超微结构的差异.结果无载体三维细胞培养在培养4 d后即可形成由多个细胞组成的细胞团.MCS在培养0.5 h后即可见细胞贴附于载体;培养5 d后,形成有多层细胞结构的细胞球.与MC相比,MCS药物敏感性显著下降;细胞器及微绒毛丰富;细胞间粘附广泛而紧密.结论MCS细胞生长活性好,能较好地模拟体内实体瘤的细胞间相互作用,特别是细胞间粘附;细胞间粘附可能是MCS对化疗敏感性下降的重要原因.     

大鼠锥体束显微结构的三维重建方法研究

目的：探讨构建神经纤维束显微结构三维可视化模型的实用方法。方法：SD大鼠全脑连续冰冻切片经Luxol Fast Blue染色显示锥体束。采用分区显微摄影法,获取每张脑组织切片的二维图像。运用Photoshop 7.0软件对每张脑片的图像进行拼接,根据三轴定位法对拼接图像进行配准,导入3D-DOCTOR4.0软件对脑和锥体束进行表面重建和体素重建。利用3DMAX8.0软件对重建模型进行可视化处理。结果：重建出SD大鼠脑和锥体束全貌模型清晰逼真,可以在任意断面从不同角度观察锥体束的显微结构,动态显示锥体束在脑内的立体行径。结论：基于连续组织切片的三轴定位法结合三维重建软件可以真实地再现锥体束的显微结构及其在脑内的三维立体行径,为神经纤维束的损伤修复研究提供精确的三维立体形态学基础。     

砷剂对乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR 细胞生长抑制作用的比较研究

目的:探讨As2O3对人乳腺癌MCF-7细胞和多药耐药MCF-7/ADR细胞生长抑制作用的差异.方法:采用MTI还原法、光镜、电镜和流式细胞术等方法检测As2O3对MCF-7和MCF-7/ADR细胞的生长抑制作用和诱导凋亡的情况.结果:As2O3对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,并呈时间剂量依赖关系,96h的IC50值分别为3μmol/L和12.8μmol/L,形态学检测显示其抑制作用主要源于凋亡;在相同作用时间及浓度下,As2O3对MCF-7细胞的抑制率显著高于MCF-7/ADR细胞,起效时间亦早于后者.结论:As2O3能诱导乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;MCF-7/ADR细胞虽对As2O3表现耐药,但耐药倍数较低(4.27).