RANKL/OPG系统、Dickkopf-1与类风湿关节炎骨髓水肿的 相关研究

目的 探讨以膝关节受累为主的类风湿关节炎（RA）患者骨髓水肿(BME)与核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/护骨素（OPG）系统、Dickkopf-1(DKK-1)的相关性。 方法 收集我院诊治的以膝关节不适为主诉的RA患者50例,根据MRI检查结果分为骨髓水肿组（BME组,25例）和非骨髓水肿组（非BME组,25例）,分别收集其临床症状和28关节疾病活动指数（DAS28）,并同期检测其血清OPG、RANKL、DKK-1和血清C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、抗环瓜氨酸多肽抗体（CCP）、类风湿因子（RF）水平,比较两组患者之间的差异,并分析RA患者BME与OPG/RANKL系统、DDK-1的相关性。 结果 与非BME组比较,BME组病程更短（\P=0.000）,DAS28评分更高（\P=0.009）,CRP（\P=0.000）、RF（\P=0.033）和CCP（\P=0.012）水平更高;且血清OPG水平更低（\P=0.000),RANKL（\P=0.000)、RANKL/OPG（\P=0.000)和DKK-1（\P=0.001)水平更高;BME组内,BME容积和程度积分与血清RANKL（容积积分\rs=0.31,\P=0.027;程度积分\rs=0.33,\P=0.022）、RANKL/OPG（容积积分\rs=0.29,\P=0.039;程度积分\rs=0.28,\P=0.043）、DKK-1（容积积分\rs=0.33,\P=0.021;程度积分\rs=0.34,\P=0.019）存在相关性。 结论 BME是RA患者骨质侵蚀的早期表现之一,伴有BME的RA患者其炎症明显、自身抗体高、破骨细胞更活跃。     

NGAL联合甲胎蛋白检测对原发性肝癌的诊断价值

目的探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)联合甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌的诊断价值。方法收集2016年4月至2017年5月郑州大学第一附属医院收治的48例原发性肝癌患者,选择同期住院的43例良性肝病患者以及46例健康体检者,将患者分为肝癌组、良性肝病组、健康对照组。分析3组患者血清NGAL、AFP及NGAL联合AFP检测对原发性肝癌的诊断价值。结果肝癌组中血清NGAL及AFP浓度均高于良性肝病组及健康对照组,差异有统计学意义(P均<0.05),AFP和NGAL联合检测肝癌的敏感度高于单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清NGAL和AFP联合检测的诊断效果高于单独检测,可提高肝癌的检出率。     

类风湿关节炎患者血浆NGAL水平与AS及AIP指数的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平与动脉粥样硬化(AS)及致动脉硬化指数(AIP)之间的关系。方法 选取于2017年1月至2020年9月期间收治的192例RA患者作为研究对象,根据患者颈动脉内膜中层厚度(IMT)超声检查结果分为无斑块组98例和斑块组94例,并以同期98例健康体检者作为对照组。测定3组研究对象血脂相关指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]水平,并计算AIP。另对所有研究对象的类风湿因子、抗环瓜氨酸抗体等实验室指标进行检测;采用ELISA法检测血浆NGAL水平,采用实时定量PCR法检测核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)mRNA表达量。另采用Pearson相关性分析血浆中NGAL水平与IMT、AIP以及其他指标之间的相关性,采用多元线性逐步回归分析IMT的影响因素。结果 与对照组比较,斑块组和无斑块组TG、LDL-C、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率、类风湿因子、抗环瓜氨酸抗体、颈动脉IMT升高,HDL-C降低(...     

尿NGAL水平对狼疮性肾炎活动性判断的临床意义

目的：检测狼疮性肾炎患者尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平,分析其与狼疮性肾炎病情活动的相关性。方法：56例LN患者根据肾脏疾病活动度评分（rSLEDAI）分为LN非活动组20例和LN活动组36例,另取20名健康体检者为对照组。收集所有受试者病史及生化检查与免疫学指标,采用ELISA法测定尿NGAL水平。28例LN患者行肾活检。结果：与LN非活动组比较,LN活动组血红蛋白、血清白蛋白、eGFR、补体C3更低,平均动脉压、血尿素与肌酐、24小时尿蛋白定量、ds-DNA自身抗体滴度、血沉更高（P均＜0.05）。LN患者尿NGAL水平16.71±5.26 ng/mL高于对照组6.65±1.99 ng/mL;且LN活动组尿NGAL水平21.76±6.07 ng/mL高于LN非活动组11.65±4.45 ng/mL,差异均有统计学意义（P<0.05）。LN患者尿NGAL水平与血清尿素（r=0.312,P=0.040）、血肌酐（r=0.287,P=0.047）、24小时尿蛋白（r=0.293,P=0.043）、血沉（r=0.293,P=0.043）、抗ds-DNA滴度（r=0.353,P<0.001）及rSLEDAI 分值（r=0.319,P=0.012）成正相关,和补体C3成负相关（r=-0.365和P<0.001)。LN患者尿NGAL水平与肾脏AI评分呈正相关（r=0.326,P=0.009）。结论：尿NGAL水平有可能作为评估LN患者病情活动的生物学指标。     

血清Fetuin-A、NGAL对糖尿病肾病的早期诊断价值

目的 探讨糖尿病肾病（DN）患者血清胎球蛋白A(Fetuin-A）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）变化及早期诊断DN的价值。方法 选取2018年9月—2021年12月徐州医科大学附属宿迁医院收治的73例DN患者为研究组,另选取同期该院收治的单纯糖尿病患者61例为对照组,研究组按病情严重程度又分为正常白蛋白尿DN组、微量白蛋白尿DN组及大量白蛋白尿DN组。收集比较研究组与对照组患者的基本资料。采用酶联免疫吸附试验检测血清Fetuin-A、NGAL水平。采用多因素逐步Logistic回归模型分析影响糖尿病患者发生DN的因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清Fetuin-A、NGAL诊断DN的价值。结果 研究组UAER、血肌酐、CysC、Fetuin-A、NGAL高于对照组（P<0.05）。大量白蛋白尿DN组的Fetuin-A、NGAL水平高于正常白蛋白尿DN组和微量白蛋白尿DN组（P<0.05）,微量白蛋白尿DN组的Fetuin-A、NGAL水平高于正常白蛋白尿DN组（P<0.05）。多因素逐步Logistic回归分析显示,尿白蛋白排泄率■是影响糖尿...     

冠心病患者血清NGAL和MMP-9的表达及临床意义

目的探讨冠心病（CAD）患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达及临床意义。方法应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测74例不同类型的CAD患者（即急性心梗组11例,不稳定心绞痛组46例和稳定型心绞痛组17例）和18例正常对照者的血清NGAL和MMP-9水平。结果 CDA患者的血清NGAL水平为37.1±28.7 ng/mL,明显高于对照组（P〈0.05）。CDA患者的血清MMP-9水平为9.98±5.76 mg/L,明显高于对照组（P〈0.05）。急性心梗组、不稳定心绞痛组的MMP-9值与NGAL值呈明显正相关（r=0.387,P〈0.05和r=0.314,P〈0.05）,与Gensini积分无相关性。结论血清NGAL和MMP-9水平升高与斑块的不稳定性有关,可作为CAD患者病情评估和预测斑块不稳定性的一个重要指标。     

微小RNA-138/NGAL对缺血再灌注诱导人肾小管上皮细胞的影响

目的 探究微小RNA-138(microRNA-138,miR-138)调控中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱导人肾小管上皮(HK-2)细胞损伤的影响。方法 HK-2细胞构建I/R模型,分别转染miR-138模拟物、miR-138抑制剂、NGAL、NGAL+miR-138模拟质粒,qRT-PCR测定不同细胞miR-138或NGAL mRNA表达鉴定转染结果,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞术测定细胞活性和凋亡。ELISA、Western blot法分别测定miR-138模拟物、miR-138抑制剂对I/R细胞白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,以及Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B...     

血清NGAL及Cys C对子痫前期的诊断价值

目的：探讨检测血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和胱抑素（Cys C）对子痫前期的诊断价值。方法：妊娠期高血压疾病患者160例,其中妊娠期高血压54例,子痫前期轻度52例,子痫前期重度54例,选择同期孕前检查正常孕妇160例为对照组,比较各组孕妇血清NGAL和Cys C水平。结果：160例妊娠期高血压疾病患者血清NGAL及Cys C水平分别为36.24±8.58 μg/L和1.78±2.03 mg/L,高于对照组的21.26±3.78 μg/L和1.05±0.14 mg/L,差异均有统计学意义（P<0.05）。妊娠期高血压疾病各组间比较,血清NGAL及Cys C水平子痫前期重度组>子痫前期轻度组>妊娠高血压组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：联合检测血清NGAL及Cys C水平有助于子痫前期早期诊断和区分妊高症病情严重程度。     

杜仲对MC3T3-E1成骨细胞及OPG/RANKL比值的影响

目的:探讨杜仲对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)及骨保护素(OPG)与细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)比值的影响,为杜仲防治骨质疏松症提供基础。方法:MC3T3-E1成骨细胞按5×103个/孔密度接种于96孔板,加药组的浓度分别为10-1、10-2、10-3mg/mL,对照组为未加药。加药72 h后MTT法检测细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)的分泌,ELISA方法检测OPG和RANKL的表达水平,并计算OPG/RANKL的比值。结果:与对照组相比,杜仲10-1mg/mL组在细胞增殖及ALP的分泌均有明显促进作用(P<0.01,P<0.05);可明显抑制RANKL的表达(P<0.05),且表现出浓度依赖性;对OPG有促进表达的作用,但与空白对照组比较无统计学意义(P>0.05)。经计算杜仲可上调OPG/RANKL的比值(P<0.05)。结论:杜仲可通过促进MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化成熟,并上调OPG/RANKL的比值,间接抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,可达到预防与治疗骨质疏松症的目的。     

青藤碱联合甲氨蝶呤治疗早期类风湿关节炎的疗效及对患者MMP-3、RANKL/OPG

  目的：观察青藤碱(SIN)联合甲氨蝶呤(MTX)治疗早期类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)表达的影响。  方法：纳入68例早期RA患者,按照随机数字表分为治疗组和对照组,每组各34例。对照组患者给予MTX治疗,治疗组患者给予MTX联合SIN治疗,两组疗程均为12周。采用美国风湿病学会(American College of Rheumatology,ACR) 20、50、70标准评价两组患者的临床疗效,检测患者的类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平。  结果：治疗后,治疗组的ACR 20、50、70达标率分别为76.7%、40.0%、3.3%,对照组分别为34.5%、20.7%、6.9%,治疗组的ACR 20达标率显著高于对照组(P<0.01)。治疗后,治疗组患者的RF、ESR、CRP水平均降低(P<0.01),对照组患者的RF、ESR、CRP水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);且两组患者的ESR、CRP、RF水平治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。治疗后,治疗组患者的MMP-3、RANKL水平降低(P<0.01,P<0.05),OPG水平和OPG/RANKL比值升高(P<0.01,P<0.05);对照组患者的MMP-3水平亦降低(P<0.05);且两组患者的OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。  结论：SIN联合MTX可改善早期RA患者的临床症状,调控MMP-3及RANKL/OPG系统,这可能是其抑制骨侵蚀、促进骨保护的机制之一。     

丹参川芎嗪注射液联合康复模式对类风湿关节炎患者RANKL、OPG水平和关节功能的影响

目的 分析丹参川芎嗪注射液联合康复模式对类风湿关节炎患者核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、护骨素(OPG)水平和关节功能的影响.方法 以2019年4月-2020年4月我院风湿免疫科收治的100例类风湿关节炎患者随机分为对照组和观察组,每组50例.对照组采用甲氨蝶呤片进行治疗,观察组在对照组的基础上联合丹参川芎嗪...     

慢性心力衰竭老年患者血､尿NGAL水平与心功能及预后的关系

目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)老年患者血?尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平与心功能恶化及预后的关系以及它与传统的肾功能标记物和心室壁压力标记物之间的相关性?方法:CHF老年患者129例,30例正常患者作为对照组?测定血浆和尿液NGAL水平,血常规?生化?左心室舒张末期内径(LVDd)?左室射血分数(LVEF),并在患者出院后随访12个月?分析血浆和尿液NGAL水平与心功能参数的相关性,多元线性回归分析影响CHF患者预后的相关因素?结果:①CHF组血浆和尿液NGAL水平分别为37.0(12.85,91.5)ng/mL和2.98(1.52,5.60)ng/mL,明显高于对照组的15.31(8.98,35.42)ng/mL 和1.17(0.76,3.27)ng/mL,差异具有统计学意义,而且随着心功能分级增加,血浆和尿液NGAL水平逐渐升高,不同心功能分级组之间差异具有统计学意义(均P < 0.05);②血浆和尿液NGAL水平与LVDd呈正相关(P < 0.05或P < 0.01),而与LVEF呈负相关(P < 0.05),血浆NGAL水平与血NT-proBNP呈正相关(P < 0.05);③多因素COX回归模型分析结果显示血浆和尿液NGAL水平是CHF患者再入院的独立预测因素?结论:CHF患者血浆和尿液NGAL水平明显升高,而且随着心功能分级增加,血浆和尿液NGAL水平逐渐升高,NGAL在CHF病情评估和预后预测中具有重要的临床价值?     

NGAL对成人心脏术后急性肾损伤的早期诊断价值

目的:探讨血和尿中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平对成人心脏术后急性肾损伤(AKI)的早期诊断价值.方法:收集112例心脏手术患者手术前后不同时相的血、尿标本,分别测定血肌酐(Scr)、血NGAL和尿NGAL.根据AKI的诊断标准,将患者分为AKI组和非AKI组,观察两组Scr、血NGAL和尿NGAL的动态变化.用受试者工作特征曲线(ROC)评价血NGAL和尿NGAL对AKI的诊断价值.结果:112例患者中21例术后24 h Scr水平上升至基础值的1.72倍,AKI发生率为18.8%.AKI组术后2 h血NGAL开始显著增高并达到峰值,与基线值比较差异有统计学意义[分别为(82.2±22.3) ng·ml-1和(16.9±3.1) ng·ml-1,P<0.05];尿NGAL较基线值明显上升[分别为(132.4±41.1) ng·ml-1和(30.8±23.1) ng·ml-1,P<0.05],并在术后4 h达到峰值.AKI组术后2 h,血NGAL诊断AKI的ROC曲线下面积为0.866,95%的可信区间为0.756~0.976,以19 ng·ml-1作为AKI的诊断界限时,敏感性和特异性分别为85.7%和88.4%;尿NGAL的ROC曲线下面积为0.914,95%的可信区间为0.86~0.966,以56 ng·ml-1作为AKI的诊断界限时,敏感性和特异性分别为95.2%和88.4%.结论:心脏手术后2 h的血、尿NGAL水平对AKI具有预测价值,其出现变化时间远早于Scr;血、尿NGAL可作为心脏术后并发AKI患者的早期诊断的标记物.     

人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定

目的：高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法：人工合成经密码子优化的NGAL基因,构建原核表达重组质粒pW28-NGAL,IPTG诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的rhNGAL抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争ELISA法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE分析纯度;最后运用Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果：高效获得高纯度NGAL重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得6株高效价单克隆抗体;其中,25号单抗为IgG1亚型,余者均属IgG2a亚型,且19、35号单抗的亲和常数分别为3.06×109、2.14×109。SDS-PAGE分析表明纯度均大于90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论：本研究利用密码子优化技术高效表达制备了NGAL重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为NGAL的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。     

低氧对大鼠骨髓细胞OPG,RANKL和TNF-α基因表达的影响

目的:探讨低氧对大鼠骨髓细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、护骨素(OPG)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响.方法:健康3 mo龄雌性SD大鼠,处死后取其骨髓细胞进行缺氧培养,分为低氧1 d组(A)、低氧3 d组(B)、低氧7 d组(C)、低氧14 d组(D)和正常对照组(E).分别于培养后1,3,7,14 d提取培养细胞总RNA,RT-PCR半定量检测各组OPG,RANKL和TNF-α基因表达变化.结果:低氧组骨髓细胞RANKL和TNF-α的mRNA表达水平与对照组比较显著升高.B,C组上述改变最为显著.OPG的mRNA表达水平与对照组比较显著降低.B,C组改变最为明显.结论:低氧可刺激大鼠骨髓细胞RANKL和TNF-α基因表达,而抑制OPG基因表达.     

慢性肾脏病患者血清NGAL、OPN 及MMP9水平与左心室肥厚的关系

目的 探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)水平与慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)3～5期患者发生左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的相关性。方法 纳入CKD患者144例,根据患者估算肾小球滤过率(eGFR)分为A组(CKD3期,n=60)、B组(CKD4期,n=48)、C组(CKD5期,n=36),另选取同期30例健康体检者作为对照组,比较不同分期CKD患者临床资料及血清标志物水平的差异。采用二分类Logistic回归分析CKD患者发生LVH的危险因素,绘制ROC曲线评价NGAL、OPN、MMP9及联合检测对CKD患者发生LVH及LVDD的诊断价值。结果 CKD患者血清NGAL、OPN及MMP9水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05),且LVH组患者的血清NGAL、OPN及MMP9水平明显高于非LVH组,差异均有统计学意义(P均＜0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、收缩压、CRP、NGAL、OPN、MMP9是CKD3～5期患者发生LVH的独立危险因素;ROC曲线分析显示,血清NGAL、OPN及MMP9水平联合预测CKD3～5期患者发生LVH的AUC为0.890,敏感度、特异性分别为87.36%、79.91%。结论 血清高水平NGAL、OPN及MMP9与CKD3～5期患者发生LVH密切相关。     

血清和尿NGAL、KIM-1、CysC对晚发型败血症新生儿急性肾损伤的早期预警价值

目的:探讨晚发型败血症(LOS)新生儿血清和尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)及胱抑素C(CysC)水平对于急性肾损伤(AKI)的早期预警价值.方法:回顾性分析2017年10月至2019年12月我院收治的120例LOS新生儿的临床资料,用改良AKIN分期系统进行评估,分为AK...     

组织及血清中NGAL水平与胃癌临床病理特征的相关性研究

目的 本研究检测NGAL在胃癌患者肿瘤组织及血清中的表达,并分析其与临床病理资料的相关性.方法 本实验采用SP免疫组织化学染色和酶联免疫吸附法分别检测胃癌患者肿瘤组织及血清中NGAL蛋白表达.结果 胃癌组织中NGAL蛋白阳性率与肿瘤大小、淋巴结转移、血管侵犯、远处转移及TNM分期密切相关.结果显示,肿瘤＞20cm2者NGAL蛋白阳性率高于肿瘤≤20cm2(43.8％ vs 23.0％,P＜0.05);蛋白阳性率在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(49.0％ vs9.1％,P ＜0.01),血管侵犯组显著高于无血管侵犯组(45.3％ vs 10.0％,P＜O.01),有远处转移组显著高于无远处转移组(45.5％ vs 7.9％,P＜0.01),TNM分期Ⅰ+Ⅱ期显著高于Ⅲ+Ⅳ期(50.0％ vs 4.9％,P＜0.01).NGAL蛋白表达阳性组的平均生存时间为51.062±7.410岁,显著低于蛋白表达阴性组77.191±5.324岁(P＜0.01);蛋白表达阳性组的5年生存率为27.3％,显著低于蛋白表达阴性组的64.5％ (P＜0.01).肿瘤患者血清NGAL的平均水平为4.881±1.105ng/ml,显著高于正常人血清NGAL平均水平的1.465±0.327ng/ml(P＜0.01).结论 NGAL蛋白在胃癌组织及胃癌患者血清中的表达水平均显著增加,且NGAL高表达与中国人群胃癌细胞转移、侵袭及不良预后具有相关性.推测NGAL有望成为监测中国人群胃癌转移、侵袭及预后情况的有效指标.