HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量

目的 考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲（Hup A）和总碱含量；比较不同提取方法对石杉碱甲含量的影响。方法 采用RP－HPLC法测定Hup A的含量。结果 Hup A在根、茎、叶中的含量煤戏、叶＞根；贵州、广东和安徽产地的Hup A含量分别为0.018%,0.021%,0.020%，提取方法之间差异不显著。结论 Hup A含量在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地Hup A含量有一定差异。     

蛇足石杉中石杉碱甲含量的动态变化分析

目的:为揭示蛇足石杉Huperzia serrata居群间和居群内石杉碱甲(HupA)含量的变异程度和变异规律,以及引种前后的变化情况。方法:以采自浙江、广西和重庆的3个蛇足石杉居群,共73株活体植物为研究对象,用改进的HPLC测定了每株引种前后的HupA含量,采用变异系数、单因素方差分析和配对t检验等统计方法,分析了居群间和居群内HupA含量的多样性特征,以及引种前后的含量变化规律。结果:蛇足石杉中石杉碱甲含量在居群间和居群内存在极其丰富的多样性,居群间的含量差异达显著或极显著水平,居群内含量的变异系数从东到西分别为0.36,0.43,0.40;同园引种1年后,东部的浙江居群与西部的广西和重庆居群间的含量差异仍保持极显著的水平,而西部的广西和重庆居群间含量的显著性差异则消失,同时,各居群个体的石杉碱甲含量在引种前后均未发生明显的变化。结论:蛇足石杉中石杉碱甲含量的高低是遗传因素与环境条件共同作用的结果,但更受遗传因素控制。     

蛇足石杉离体培养产石杉碱甲的条件优化及动力学研究

目的以具有产石杉碱甲能力的蛇足石杉离体叶状体为研究对象,探究蛇足石杉离体培养物累积石杉碱甲的影响因素及生产动态变化规律。方法应用正交设计对蛇足石杉离体培养叶状体的植物生长物质浓度进行筛选,采用HPLC法对叶状体提取物中的目标成分进行定性定量检测,用Logistic模型拟合叶状体的生长曲线。结果以白光为主要光源,光照时间为12 h/d,1/4 MS固体培养基,为蛇足石杉叶状体产石杉碱甲的最佳条件,相对增殖率达到3 174.5%,石杉碱甲累积量为72.45μg/L;蛇足石杉离体叶状体增殖的生长曲线呈"S"形,继代周期以50 d左右为最适;60 d后生长进入稳定阶段,累积石杉碱甲量明显加快,直至85 d达到最大值7.453μg/g,即叶状体先快速增殖,后累积石杉碱甲。结论叶状体累积石杉碱甲与叶状体增殖呈非生长偶联型,叶状体增长规律符合Logistic生长模型,最大的比生长速率(μmax)为0.071·d-1。     

不同种质资源蛇足石杉引种及差异蛋白比较分析

目的 筛选野生蛇足石杉引种驯化的优质种质资源,并建立其分子鉴别方法。方法 对来自福建大田、三明市郊、南靖3个不同种质资源野生蛇足石杉引种驯化,HPLC法分析不同种质资源蛇足石杉中石杉碱甲（Hup A）量;采用蛋白质双向电泳技术,分析不同种质资源蛇足石杉差异蛋白。结果 种质资源来自大田的蛇足石杉适应性较强,植株长势好,成活率为65.5%,且茎叶Hup A量也较高,分别为197.80和87.54 μg/g;遮阳成活率为77.8%,远高于未遮阳的成活率（7.1%）;黄土地成活率为75%,远高于水田沙壤土的成活率（18.8%）。不同种质资源蛇足石杉共有15个差异蛋白质点,不同种质资源蛇足石杉的差异蛋白质点丰度差异较大。结论 人工引种栽培时,土壤选择以黄土质为佳,并需要给予必要的遮阳;种质资源来自福建大田的蛇足石杉可以作为蛇足石杉优质种质资源进行引种驯化;利用蛇足石杉差异蛋白质点的丰度差异,可以作为鉴别不同蛇足石杉种质资源的依据。     

草药蛇足石杉的研究进展

对蛇足石杉的药理作用及其临床应用方面的研究作较全面综述,并对其应用前景作一展望。     

不同条件对蛇足石杉组培苗生长及石杉碱甲积累的影响

目的:考察不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响。方法:通过添加不同浓度的组合激素、无机氮源、前体物、诱导子,考察其对蛇足石杉干重增长率和石杉碱甲含量的影响。结果:不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响不同,适当的组合激素和无机氮源利于蛇足石杉组培苗的生长,前体物和适当的诱导子利于石杉碱甲的积累。其中0.50 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)IBA的激素组合对蛇足石杉组培苗的生长促进效果最显著,其干重增长率在培养12周时约是对照组的1.32倍,而0.5 mmol·L~(-1)的赖氨酸对石杉碱甲积累的调控效果最好,与对照相比,在培养12周时,石杉碱甲含量提高了71.46%。结论:本研究初步实现了对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的调控,为通过千层塔的组织快繁缓解石杉碱甲的资源短缺提供了理论基础。     

超声波提取蛇足石杉内生真菌2F09P03B中石杉碱甲的研究

 目的确定一株蛇足石杉内生真菌2F09P03B发酵培养物中石杉碱甲的超声波辅助提取工艺,以改善石杉碱甲提取率。方法对提取溶剂、pH值等影响提取效率的因素分别进行单因素实验;对料液比、超声波功率、负载率(dutycycle)、超声时间4个影响超声波提取效率的因素在单因素实验基础上利用正交实验进行优化。结果超声波辅助提取石杉碱甲的最佳工艺条件是:提取溶剂为pH4.0的酸水,碱性还原反应在pH7.5～8.0进行,料液比1:20,超声波功率140W,超声波负载率30%,超声时间40min。此条件下,该内生真菌石杉碱甲的提取率达0.074%,约为其他传统提取方法的1.5～2倍。结论超声波辅助提取法的石杉碱甲提取率较其他方法有了显著提高,并能大幅度缩短提取时间,应在蛇足石杉内生真菌2F09P03B石杉碱甲的提取中加以应用。     

石杉碱甲药理与临床研究进展

石杉碱甲（Hup—A）是我国学从民间草药千层塔[石杉科石杉属植物蛇足石杉Huperzia serrata（Thumb．）Trey]中分离出的生物碱，经系统、深人的研究，Hup—A已作为一种可逆性、高效、高选择性的中枢AChE抑制剂而用于AD、VD等多种神经退行性疾病的治疗。本对此作综述。[第一段]     

石杉碱甲的研究进展

石杉碱甲(huperzine A,HupA)是来源于蕨类植物蛇足石杉的一种倍半萜生物碱,为高效、高选择性、可逆性的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。HupA在治疗阿尔茨海默病(Alzheimersdisease,AD)方面的显著疗效,近年研究还证明HupA有神经保护和预防化学武器的潜力,引起世界各国药学工作者广泛关注和研究。现系统的综述石杉碱甲在药学研究各领域中的研究进展。     

蛇足石杉化学成分和药理作用研究进展

结合国内外文献综述蛇足石杉生物碱和三萜化学成分和药理作用,尤其重点归纳蛇足石杉石松生物碱的结构、类型。石杉碱甲为高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂,优于国外已上市的老年痴呆症治疗药物,是首先从蛇足石杉中发现的lycodine生物碱类型,从蛇足石杉分离的该类型其他生物碱也具有较强的类似活性,具备进一步研究与开发的潜力。     

千层塔内生真菌分离鉴定的初步研究

目的从治疗老年痴呆药用植物千层塔中分离内生真菌，并进行初步鉴定。方法用PDA平板培养基分离菌株，对照真菌鉴定手册，根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定。结果从千层塔的茎中分离出4株内生真菌，分别属于顶孢霉属、单轴霉属、酵母和青霉属。结论首次从千层塔中分离和鉴定出4株内生真菌。     

蛇足石杉HsCAO2基因的克隆、生物信息学分析及载体构建

目的 为筛选高活性的蛇足石杉铜胺氧化酶（copper-containing amine oxidase,CAO）,通过生物工程方法实现石杉碱甲（huperzine A,HupA）的合成、为加快新药创制进度提供理论依据。方法 基于蛇足石杉转录组测序得到的CAO序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术,扩增、拼接并验证获得该基因的全长cDNA序列,并将其命名为HsCAO2。结果 通过RACE技术得到HsCAO2的cDNA全长为2696 bp,CDS为2199 bp,编码732个氨基酸。氨基酸序列同源性比对发现,HsCAO2具有保守的氨基酸位点和Cu²⁺结合位点;进化树分析结果表明,HsCAO2与蛇足石杉中的另一个CAO（HsCAO1）同源性最高,达91.67%;蛋白质结构分析结果表明,HsCAO2也可能在生物体里以同源二聚体的形式存在。在此基础上,进一步分别构建了超表达载体pOX-HsCAO2和体外蛋白表达载体pET-28a （+）-HsCAO2。结论 HsCAO2很可能是蛇足石杉中的一个新的功能性CAO,且超表达载体和体外蛋白表达载体的成功构建为进一步研究其功能奠定了基础。     

蛇足石杉主要活性成分及其生物合成研究进展

蛇足石杉Huperzia serrata为我国珍稀濒危药用植物,可供利用的资源极其有限,其所含石杉碱甲对治疗阿尔茨海默病、改善学习记忆等具有显著的疗效。对蛇足石杉的主要活性成分进行系统综述,基于现有研究推导了其活性成分可能的生物合成途径,为其资源开发利用和活性成分的生物合成提供科学参考。     

千层塔的研究进展

千层塔是我国民间一直用于治疗跌打损伤、瘀血肿痛和精神分裂等疾病的一味草药.20世纪80年代中国科学家从千层塔分离到石杉碱甲,药理学研究证明它是一种高效、可逆、选择性强的乙酰胆酯酶抑制剂,对老年痴呆症有显著疗效,引起国内外学者的普遍关注.为了在保护生态环境的同时合理开发和利用千层塔的药用价值,本综述对干层塔的生物学、生态学、化学成分、药理学和生物技术等方面的国内外最新研究成果进行总结,并对今后的研究进行展望.     

蛇足石杉中非生物碱类化学成分研究

目的研究蛇足石杉Huperzia serrata全草的非生物碱类化学成分。方法利用硅胶、反相硅胶、Sephadex HL-20等柱色谱进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等谱学数据鉴定化合物结构。结果从蛇足石杉二氯甲烷部位分离得到11个化合物,分别鉴定为千层塔烯二醇-21β-对二氢香豆酸酯(1)、千层塔烯二醇-3,21-二乙酸酯(2)、千层塔烯二醇-3-乙酸酯(3)、21-表千层塔烯二醇-3-乙酸酯(4)、3α,21β,24-千层塔烯三醇(5)、21-表千层塔烯二醇(6)、千层塔烯二醇(7)、16-羰基-3α,21β-千层塔烯二醇(8)、3β,21β,24-千层塔烯三醇(9)、16-羰基-3α,21β,24-千层塔烯三醇(10)、1-羟基二苯并呋喃醇(11)。结论化合物1~10均为石杉型三萜类化合物,化合物11为二苯并呋喃醇类化合物;其中1为新化合物,命名为千层塔型香豆酸酯,化合物2和11首次从该植物中分离得到。     

高温胁迫对蛇足石杉生理特性的影响

目的 研究蛇足石杉的最高耐受温度及耐受时间,为人工栽培蛇足石杉提供温度调控参考.方法 通过在25、30、35、40℃的不同温度下胁迫处理蛇足石杉,测定其叶片中的可溶性糖量、可溶性蛋白质量、游离脯氨酸量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性在不同处理时间的量,并对其进行相关性分析.结果 随着温度的升高,各项指标均有大幅度的变化,可溶性糖和游离可溶性脯氨酸的量呈上升的趋势,可溶性蛋白质量呈下降趋势,POD和SOD活性均呈现下降的趋势.35℃高温胁迫达8d后,对蛇足石杉的各项生理指标有较大影响,外部形态表现轻度失水,继续处理至12d后,叶片发黄,植株基本死亡;40℃高温胁迫6d后,蛇足石杉的各项生理指标均出现较大幅度的变化,SOD活性显著下降,叶片发黄,第8天植株完全死亡.结论 高温对蛇足石杉的生长有明显影响,其生长温度在25～30℃为宜,长时间持续超过35℃对其生长有明显的影响,40℃为极限高温,短期内会引起植株死亡.