基于盐炙前后成分煎出差异与止泻作用相关性探讨补骨脂丸增效机制

目的 探讨盐炙对补骨脂丸中代表性成分煎出的影响,以及成分与止泻药效的相关性。方法 采用HPLC-MS法测定补骨脂丸及3种补骨脂丸模拟品水煎液中13种代表性成分的含量差异,并结合不同给药组对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的胃肠激素和下丘脑-垂体-肾上腺轴相关指标的影响,采用灰色关联分析法,对代表性成分与止泻药效进行相关性分析,寻找药效贡献较大成分。结果 与3种模拟品（模拟I～III号）相比,补骨脂丸水煎液中黄酮类成分如芦丁、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、异补骨脂查耳酮及补骨脂二氢黄酮甲醚的含量较高,挥发油类成分如茴香醛、反式茴香脑及补骨脂酚的含量较低;与模拟II、III号相比,香豆素类成分如补骨脂素及异补骨脂素的含量较低。不同成分对止泻药效的贡献具有差异,黄酮类和挥发油类成分与止泻药效的关联度较高,香豆素类成分（如补骨脂素与异补骨脂素）与止泻药效的关联度较低。结论 补骨脂、小茴香盐炙后组成补骨脂丸,能促进黄酮类成分煎出,抑制挥发油类、香豆素类成分煎出,这可能是盐炙增强其止泻作用的关键环节之一。     

补骨脂盐炙对肾阳虚、脾虚模型动物燥性影响研究

目的:探讨补骨脂盐炙对肾阳虚、脾虚模型动物燥性的影响。方法:以主要脏器指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K`+-ATP酶含量为评价指标,观察不同剂量补骨脂生品和盐炙品对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠及大黄所致脾虚腹泻模型大鼠燥性的影响。结果:不同剂量补骨脂生品和盐炙品对肝指数、肾指数、胸腺指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K~+-ATP酶均有显著性影响(P0.05);且补骨脂高剂量组盐炙前后功效比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:补骨脂盐炙后可缓和燥性,作用强度与剂量相关。     

补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及水通道蛋白表达的影响

目的观察补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及口腔唾液腺水通道蛋白5(AQP5)、结肠AQP4、肾脏AQP2基因表达的影响,分析阐明盐炙缓和补骨脂毒副作用的机制。方法采用sc氢化可的松的方法复制大鼠肾阳虚模型,以化学试剂法测定大鼠血清中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)的量,荧光定量PCR(q RT-PCR)法测定口腔唾液腺AQP5、结肠AQP4、肾脏AQP2 m RNA的表达。结果与模型组比较,补骨脂生品和盐炙品组大鼠血清中的ALT、AST量显著升高,Alb量显著降低(P0.05);补骨脂盐炙品组ALT、AST水平低于生品组;各给药组BUN及Scr水平显著高于模型组(P0.05)。q RT-PCR结果显示,与对照组比较,模型组大鼠AQP2、AQP4 m RNA表达明显降低(P0.05),AQP5的m RNA表达明显增加(P0.05);与模型组比较,补骨脂生品组大鼠AQP4 m RNA表达显著升高(P0.05),AQP5 m RNA表达显著降低(P0.05);与补骨脂生品组比较,补骨脂盐炙品组AQP2、AQP5 m RNA表达明显升高(P0.05),AQP4 m RNA表达明显降低(P0.05)。结论补骨脂盐炙后可缓解药物对肾阳虚大鼠肝肾功能的副作用;同时缓解生品的燥性,盐炙对药物燥性的缓解作用可能与其对体内AQP的基因表达调控有关。     

补骨脂盐炙前后含药血清对人成骨细胞的影响

目的研究补骨脂盐炙前后含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法采用从绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞,利用补骨脂生品和盐炙品含药血清干预,采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定法、茜素红染色法研究其对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。结果补骨脂生品和盐炙品含药血清均能促进人成骨细胞的增殖,提高碱性磷酸酶的活性,且血清体积分数为20%时,补骨脂盐炙品含药血清对成骨细胞增殖、分化的促进作用显著优于生品(P0.01);同时,补骨脂生品和盐炙品含药血清均能促进成骨细胞矿化的作用,且盐炙品要优于生品。结论补骨脂生品和盐炙品含药血清均具有良好的促进人成骨细胞增殖、分化和矿化的作用,其中盐炙品的作用显著优于生品。     

基于雷公法结合盐炙法对补骨脂的炮制及肝毒性评价

目的 基于雷公法结合盐炙法对补骨脂进行炮制减毒并评价补骨脂炮制前后的肝毒性变化。方法 建立高效液相色谱法同时测定补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂乙素和补骨脂酚6个指标成分的含量;选取醇浓度、醇浸时间和蒸制时间为考察因素,以指标成分含量下降率的综合加权评分为指标,正交试验优化炮制工艺,并通过小鼠肝毒性实验评价补骨脂炮制前后的肝毒性。结果 补骨脂最佳炮制工艺,按《中国药典》2020年版盐炙法制备盐补骨脂,取盐补骨脂适量,加入5倍量80%乙醇浸泡24 h,倒出乙醇并用蒸馏水洗净,加入5倍量蒸馏水,浸泡12 h,倒出蒸馏水并洗净,置蒸锅内隔水蒸4 h,取出晾干;由该法炮制所得的补骨脂炮制品中毒性成分含量明显下降,小鼠肝毒性显著降低。结论 该炮制方法可明显降低补骨脂的肝毒性,为临床合理炮制补骨脂提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的补骨脂盐炙前后化学成分变化研究

目的:探究补骨脂盐炙前后成分变化,从化学角度阐释补骨脂盐炙后缓和其“性本大燥毒”的机制。方法:采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)监测补骨脂炮制前后成分变化,结合Markerlynx软件分析。结果:补骨脂盐炙前后成分差异显著,盐炙品中补骨脂素(psoralen)、异补骨脂素(isopsoralen)、补骨脂二氢黄酮(bavachin)、补骨脂异黄酮(corylin)、异补骨脂查尔酮(isobavachalcone)、补骨脂查尔酮(bavachalcone)含量明显升高,补骨脂色酚酮(bavachromanol)、补骨脂酚(bakuchiol)含量明显下降。结论:补骨脂炮制前后成分变化是补骨脂盐炙后增效减毒和药性变化的物质基础。通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析盐炙前后指纹图谱的差异,得到潜在的化学标记物,鉴定为补骨脂二氢黄酮甲醚(bavachinin)、补骨脂查尔酮(bavachalcone)及补骨脂二氢黄酮(bavachin),可做为区分生品与炮制品的指标成分。本实验的研究成果对于研究补骨脂盐炙的炮制原理具有重要意义,同时也为补骨脂盐炙品药效物质基础的阐明提供了重要依据。     

补骨脂盐炙对实验动物止泻作用影响的研究

目的：考察补骨脂盐炙前后止泻作用的差异,为临床治疗脾肾阳虚所致泄泻提供理论依据。方法：以补骨脂生品、水炙品、盐炙品醇水双提物分别灌胃给药,观察对番泻叶所致急性腹泻小鼠排便点数,大黄造成脾虚腹泻小鼠肠推进率和胃动素含量的影响。结果：补骨脂盐炙品10g/kg剂量能减少急性小鼠腹泻的稀便点数,15g/kg能抑制脾虚小鼠肠推进;水炙品和盐炙品均能促进胃动素的分泌。结论：补骨脂盐炙品对急性以及脾虚腹泻治疗作用优于生品及水炙品;盐炙后止泻作用增强可能与抑制胃肠运动、促进胃动素分泌有关。     

盐炙小茴香醋酸乙酯部位化学成分及抗酪氨酸酶活性研究

目的 对小茴香Foeniculum vulgare醋酸乙酯部位化学成分及其对酪氨酸酶活性影响的研究。方法 利用硅胶、D101大孔吸附树脂、MCI、ODS、Sephadex LH-20及半制备型高效液相等色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;运用酪氨酸酶催化L-酪氨酸速率法筛选化合物的酪氨酸酶抑制活性,对从盐炙小茴香分离出的化合物进行抗酪氨酸酶活性评价,最后通过分子对接技术对其进行验证。结果 从盐炙小茴香醋酸乙酯部位分离得到20个化合物,分别鉴定为bombasinolA(1)、齐墩果酸(2)、山柰素(3)、槲皮素(4)、(1R,2R)-1-(4-methoxypheny)propane-1,2-diol(5)、(1S,2R)-1-(4-methoxyphenyl)propane-1,2-diol(6)、(3S,5R,6S,7E)-3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one(7)、齐墩果酮酸(8)、刺五加酮(9)、phenylpropanoid(10)、(Z)-4-[30-(β-D-glucopyranosyloxy)butylidene...     

高良姜的盐炙工艺及其盐炙前后HPLC指纹图谱对比研究

目的：优选盐炙高良姜的炮制工艺,并对比研究其盐炙前后的HPLC指纹图谱变化。方法：以外观性状、含水量、水溶性浸出物百分含量及高良姜素含量为评价指标,采用单因素试验,以切片厚度、炒制温度和炒制时间为指标,设计正交试验优选盐炙高良姜的炮制工艺。采用HPLC法测定盐炙前后高良姜样品的高良姜素含量和HPLC指纹图谱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”进行相似度评价,并应用SIMCA＿P+12.0软件进行主成分分析。结果:优选的盐炙高良姜最佳炮制工艺为用5%食盐水浸润至药透汁尽,然后120℃炒制6 min;盐炙后的高良姜样品中高良姜素含量与生品比较,差异无统计学意义（P>0.05）;盐炙后的高良姜样品中水溶性浸出物百分含量均高于生品（P<0.01）;盐炙后的高良姜化学成分种类少于生品;虽然它们的指纹图谱相似度较高,但以其指纹图谱峰面积为变量进行OPLS-DA分析可以快速地将盐炙前后的高良姜样品区别开。结论：优选的盐炙高良姜炮制工艺稳定可行,可为生产盐炙高良姜饮片提供实验依据;盐炙前后的高良姜饮片内在化学成分发生了变化,这从化学成分的角度揭示了盐炙高良姜的炮制机理...     

补骨脂、肉豆蔻炮制前后在“二神丸”中对脾肾阳虚泄泻小鼠的止泻研究

目的探讨补骨脂、肉豆蔻生品与炮制品分别配方组成的古方"二神丸"对"脾肾阳虚泄泻"小鼠止泻作用的差异,以阐明炮制对方剂疗效影响。方法设立空白组、阳性药物组、"二神丸"Ⅰ(补骨脂生品+肉豆蔻生品)、"二神丸"Ⅱ(补骨脂生品+肉豆蔻煨制品)、"二神丸"Ⅲ(补骨脂盐炙品+肉豆蔻生品)、"二神丸"Ⅳ(补骨脂盐炙品+肉豆蔻煨制品)共6组,观察对番泻叶所致小鼠急性腹泻以及氢化可的松和大黄造成的"脾肾阳虚泄泻"模型小鼠泄泻的影响。结果 "二神丸"Ⅲ、Ⅳ组的小肠推进率与空白组相比有显著性差异(P<0.05);"二神丸"Ⅳ组的首次泄泻时间、稀便率、稀便级和腹泻指数与空白组比较,均有极显著性差异(P<0.01)。结论 "二神丸"Ⅳ组的止泻作用优于其他组合,即盐炙补骨脂和煨炙肉豆蔻组方的"二神丸"止泻作用增强。     

盐补骨脂标准汤剂质量评价体系的建立

目的建立盐补骨脂标准汤剂质量评价体系。方法收集了15批合格的补骨脂药材,炮制成符合《中国药典》2015年版规定的盐补骨脂饮片,制备盐补骨脂标准汤剂冻干粉,建立HPLC指纹图谱,对共有色谱峰进行指认,并结合飞行时间质谱确定其主要化学组成。结果苯并呋喃苷类和呋喃香豆素类为盐补骨脂标准汤剂的主要成分。测定15批标准汤剂的出膏率为16.31%~20.59%,指标成分补骨脂素、异补骨脂素总量为1.17%~1.50%,转移率为13.55%~23.57%,且指纹图谱相似度均大于0.9。结论建立了稳定、可靠的盐补骨脂标准汤剂全面质量评价方法,为盐补骨脂配方颗粒及相关制剂的质量控制提供参考。     

基于对照制剂的牛黄清胃丸全处方鉴别研究和等级初评价

目的对牛黄清胃丸进行全处方鉴别和等级初评价。方法对现行标准规定的显微特征进行总结,新建了番泻叶、石膏的显微鉴别方法和人工牛黄、大黄、冰片的薄层鉴别方法,改进了薄荷的显微鉴别方法,实现了17个药味的全处方鉴别。研制牛黄清胃丸对照制剂,将其作为随行对照应用于样品的全处方鉴别,对制剂的质量等级进行初评价。结果 18个厂家的48批样品的等级初评价结果为10批优质,37批合格,1批不合格。结论所建方法准确、简便、客观,可更加全面地控制牛黄清胃丸的质量,并为进一步建立药品等级标准提供了研究思路和实验基础。     

四神丸合补中益气汤治疗慢性腹泻的临床疗效观察

[目的]观察研究对比治疗脾肾阳虚型慢性腹泻时应用四神丸合补中益气汤的临床疗效,探讨四神丸合补中益气汤治疗脾肾阳虚型慢性腹泻的优势所在。[方法]收集2019—2022年天津市中医药研究院附属医院肾病门诊60例符合脾肾阳虚型慢性腹泻的患者,采用随机对照试验方法,随机分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组予以四神丸合补中益气汤加减进行治疗,对照组则服用双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊进行治疗,并对两组患者治疗前后的主症、次症积分的变化以及临床疗效进行观察比较。[结果]治疗后治疗组的大便次数、大便形态、纳呆食少、神疲乏力相较于对照组症状改善更加明显,临床疗效显著。[结论]应用四神丸合补中益气汤治疗方法对脾肾阳虚型慢性腹泻患者的临床症状有良好改善效果,对提高临床实践有积极作用。     

参麦地黄丸质量标准提高研究

目的通过对参麦地黄丸(SDP)进行薄层鉴别、定量测定等研究,建立了合理可行的质量控制方法与标准。方法参照《中国药典》2015年版四部通则相关方法,建立鉴别SDP中牡丹皮、山茱萸(蒸)、泽泻、北沙参4味药材的TLC法;建立同时测定SDP中指标性成分补骨脂素、异补骨脂素和丹皮酚的HPLC法。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长254 nm;柱温30℃。结果 TLC鉴别方法专属性强,能够有效鉴别4味药材;定量测定方法学研究结果表明,补骨脂素、异补骨脂素和丹皮酚质量浓度分别在6.531~58.780、6.115~55.040、20.40~183.60μg/m L与峰面积呈良好的线性关系,回归方程分别为Y=1.523×10~4 X-1.209×10~4,r=0.999 9;Y=1.809×10~4 X-1.523×10~4,r=0.999 9;Y=2.760×10~4 X-1.683×10~4,r=0.999 9;平均回收率分别为100.4%(RSD为1.1%)、101.5%(RSD为1.3%)、101.5%(RSD为0.79%)。5批SDP样品定量测定结果表明,该样品中补骨脂素为322.1~331.0μg/g,异补骨脂素为298.0~350.1μg/g,丹皮酚为929.5~982.7μg/g。结论建立的质量控制方法专属性强、重复性好、简便准确,为SDP的质量标准的提高提供依据。     

二神丸不同提取部位温脾止泻的谱效关系研究

目的阐明二神丸中药物炮制后(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)其不同提取部位的指纹图谱特征峰所代表的化学成分及其对温脾止泻药效贡献的大小,表征二神丸的药效物质基础。方法采用HPLC法建立二神丸不同提取部位的指纹图谱,以不同提取部位对番泻叶所致急性腹泻小鼠腹泻指数的影响研究其止泻作用,采用灰关联分析法建立其谱效关系。结果建立了二神丸不同提取部位的指纹图谱,相似度均大于0.90;二神丸温脾止泻的药效是多种成分共同作用的结果,各特征峰所代表的化学成分对其止泻药效贡献的大小顺序(按特征峰编号)为6号>18号>7号>20号>14号>21号>1号>25号>24号>23号>4号>3号>8号>11号。结论所构建的二神丸不同提取部位HPLC指纹图谱方法简单,重复性好,可为二神丸的质量评价提供参考;不同部位指纹图谱与其止泻药效之间有一定的对应关系,为进一步研究二神丸的炮制机制奠定了基础。     

五味子“生熟异用”之补肾阳作用

目的 比较五味子、醋五味子、酒五味子对肾阳虚小鼠的影响,为五味子“入补药熟用”的研究及临床合理应用提供科学依据。方法 采用小鼠ig给予腺嘌呤方法制备肾阳虚模型,以桂附地黄丸为阳性对照,以小鼠体征,血清皮质醇、睾酮、肌酐（Cr）水平,精囊腺、睾丸的脏器指数,及睾丸、肾脏组织病理观察等为评价指标,比较五味子、醋五味子、酒五味子水煎液的补肾阳作用。结果 五味子、醋五味子、酒五味子对肾阳虚小鼠均有一定的治疗作用,可改善小鼠的激素水平,增加脏器指数,其中酒五味子作用最好,各剂量组以中剂量组作用最好。结论 炮制与剂量均会对五味子补肾阳作用产生影响,临床应用于治疗肾阳虚时应首选酒五味子,并注意五味子的使用剂量。     

补骨脂炮制前后纳入复方二神丸的提取物HPLC指纹图谱的建立及多种模式识别分析

目的建立补骨脂炮制前后分别纳入复方二神丸的石油醚提取物的HPLC指纹图谱,初步建立炮制前后二神丸提取物的化学模式识别方法,为其内在质量的控制提供参考。方法采用HPLC法,以思普乐C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,0.01%甲酸水溶液和甲醇-乙腈(1∶1)为流动相进行梯度洗脱,检测波长210 nm,柱温30℃,体积流量1 m L/min,进样量10μL,分别建立炮制前后二神丸的提取物指纹图谱,并且采用指纹图谱相似度评价,结合聚类分析和主成分分析(PCA)进行化学模式识别研究。结果分别建立了炮制前后二神丸提取物的HPLC指纹图谱,各色谱峰分离较好,标定了20批次提取物的28个共有峰,明确了其中6个成分(补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚、去氢二异丁香酚);10批炮制前、后提取物分别与对照图谱比较,相似度均大于0.9;PCA和聚类分析可将20批提取物很好地分为炮制前和炮制后2类,且分类结果一致,同时PCA结果提示了一些可区别炮制前后二神丸的指纹图谱特征性的色谱峰。结论该方法稳定、可靠,为炮制前后二神丸提取物的质量控制提供了方法依据,同时结合化学模式识别研究可有助于炮制前后二神丸提取物整体质量控制及质量评价。     

海马补肾丸滋阴补肾作用研究

目的采用多种实验模型评价海马补肾丸滋阴补肾作用,为临床提供实验依据。方法采用im氢化可的松致小鼠肾阳虚模型,观察海马补肾丸抗阳虚作用;采用ig甲状腺素加利血平致小鼠肾阴虚模型,观察海马补肾丸抗阴虚作用;采用im氢化可的松致大鼠肾阳虚模型,观察海马补肾丸对勃起功能的影响;采用去势雄性大鼠模型及正常幼龄雄性大鼠连续ig给药,观察海马补肾丸雄性激素样作用。结果给药10d,海马补肾丸1.1、2.2g/kg明显增加肾阳虚小鼠的自主活动次数,延长低温游泳时间,增加胸腺、脾脏的脏器指数;明显减少肾阴虚小鼠跳台错误次数、延长错误潜伏期,明显提高小鼠痛阈,增加小鼠胸腺、脾脏的脏器指数。给药2周,海马补肾丸0.56、1.12 g/kg明显增加大鼠bR/rR值、海绵体内压,明显改善勃起功能;明显增加去势大鼠血清睾酮(T)水平及前列腺、包皮腺、提肛肌的脏器指数;明显增加正常幼龄大鼠T、促卵泡激素(FSH)水平及精液囊的脏器指数。结论海马补肾丸具有明显的滋阴补肾作用。