BHMT对高同型半胱氨酸环境下大鼠晶状体上皮细胞的保护作用

目的　观察甜菜碱高半胱酸甲基转移酶（betaine-homocysteine methyl transferase,BHMT）在高同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）环境下对大鼠晶状体上皮细胞的保护作用。方法　SPF级SD大鼠28只，颈椎脱臼法处死后取出晶状体，随机分为对照组（A组）、BHMT 组（B组）、Hcy+BHMT组（C组）、Hcy 组（D组），每组7只。每组孵育 24 h后观察晶状体透明度的改变，晶状体研磨超声粉碎，提取各组总蛋白，Bio-Rad蛋白质定量后，Western blot检测以下蛋白质变化:内质网应激蛋白相关的葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78），抗氧化损伤类蛋白质转录因子NF-E2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2）,谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR），凋亡相关酶半胱氨酸蛋白水解酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12，Caspase-12)，凝胶成像分析系统显影。使用流式细胞术检测细胞内2’,7’-二氯双氢荧光素(2’,7’-Dichlorofluorescein，DCF)的荧光强度，间接检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。结果　体外培养24 h后,A、B组晶状体透明，D组晶状体混浊，C组较D组晶状体混浊程度明显减轻；ROS定量检测结果显示:D组表达量明显高于A、B、C组（均为P<0.05）,而C组与A、B组比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）；内质网应激蛋白GRP78:D组表达量均明显高于A、B、C组（均为P<0.05）,而C组与A、B组比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）；Nrf2与GR的表达量:D组均明显低于A、B、C组（均为P<0.05），而C组与A、B组比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)；Caspase-12表达量:D组均明显高于A、B、C组（均为P<0.05）,而C组与A、B组比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　BHMT在体外可以有效防护高Hcy环境下大鼠晶状体氧化损伤,减轻内质网应激反应，清除ROS,阻止细胞凋亡,减轻晶状体混浊度，证明了其在防治与Hcy有关的疾病方面的积极作用。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对过氧化氢(H2O2)诱导人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用.方法 HLEC传代培养24h后,分别加入不同浓度(5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、40 μmol·L-1) RES预处理12 h后,加入100 μmol·L-1 H2O2继续孵育24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,MTT比色法检测RES对H2O2诱导的HLEC活力的影响,流式细胞仪检测HLEC细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达.结果 氧化损伤可以诱导HLEC形态改变,RES处理后,细胞形态逐渐得到改善.MTT结果显示RES对HLEC活性无抑制作用,RES(5μmol·L-1、10 μmol· L-1、20 μmol· L-1、40 μmol·L-1)孵育24 h后细胞存活率分别为(101.30±4.49)％、(100.31±3.53)％、(101.71±3.33)％、(99.30±3.00)％,与对照组(99.67±2.67)％比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05);模型组HLEC经氧化损伤处理后,细胞存活率(34.33±3.71)％明显下降,用20 μmol·L-1及40 μmol·L-1 RES处理后,HLEC存活率分别提高到(57.33±5.61)％和(72.67±6.98)％,与模型组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).流式细胞计数结果显示:对照组HLEC凋亡率为(1.99±0.17)％,经H2O2处理后,模型组HLEC凋亡率为(51.73±4.97)％,20μmol·L-1、40 μmol·L-1 RES处理后,HLEC凋亡率分别为(34.43±3.67)％、(26.55±2.07)％,与模型组比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).此外,RES还可以减少H2O2所致HLEC内caspses-3及caspase-9的表达.结论 RES可以明显抑制HLEC凋亡,其抑制凋亡的作用可能是其防止和延缓白内障发生发展的细胞学基础,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据.     

褪黑素对过氧化氢诱导晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨褪黑素对过氧化氢诱导晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用。
　　方法：晶状体上皮细胞传代培养后,分别加入不同浓度褪黑素预处理12h后,加入100μmol/L H2 O2继续孵育24h, MTT比色法检测褪黑素对H2 O2诱导的晶状体上皮细胞活力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3及Caspase-9的活性。
　　结果：MTT结果显示褪黑素对晶状体上皮细胞活性无影响,该药物可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降,流式细胞计数结果显示褪黑素可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡,此外,褪黑素还可以减少过氧化氢所致晶状体上皮细胞内Caspase-3及Caspase-9的活性,并且,伴随褪黑素作用时间的延长其活性呈下降趋势。
　　结论：褪黑素可以明显抑制过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。     

番茄红素对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(hulan lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用及可能机制。
　　方法：HLEC传代培养,分为阴性对照组、氧化损伤组、番茄红素低剂量组和番茄红素高剂量组, MTT比色法检测细胞存活率,电子显微镜观察细胞形态学改变,DCFH-DA荧光探针检测胞内ROS变化,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶( superoxide dislutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase, GSH )活性及丙二醛( lalondialdehyde,MDA)的含量。
　　结果：番茄红素能明显抑制紫外线诱导的细胞活性的下降,减少紫外线所致HLEC内ROS的生成,引起HLEC内SOD和GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。
　　结论：番茄红素通过提高细胞内SOD和GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量,发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于白内障防治提供可靠的实验依据。     

白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:人晶状体上皮细胞系传代培养,紫外线诱导细胞发生凋亡,20μmol/L白藜芦醇预处理细胞后,观察各项指标改变:流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子caspase-3及caspase-9的表达,透射电镜观察超微结构变化。结果:流式细胞仪检测发现,白藜芦醇可以抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡,阳性对照组中caspase-3及caspase-9含量显著高于同时段阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中caspase-3及caspase-9含量均低于同时段阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,伴随白藜芦醇作用时间的延长,透射电镜下人晶状体上皮细胞损伤的程度减轻。结论:白藜芦醇可以抑制紫外线诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对辐射性白内障具有预防作用,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。     

南珠水解液对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨南珠水解液对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化应激损伤的保护作用。方法培养HLEC细胞株HLEB3,在培养液中加入不同浓度南珠水解液,培养24 h和48 h分别检测细胞增殖水平,并据此选择后续实验中南珠水解液浓度。培养HLE-B3细胞,分成3组:正常对照组;氧化损伤组,加入H₂O₂至终浓度为300μmol·L^-1;南珠水解液处理组,加入H₂O₂至终浓度为300μmol·L^-1,加入南珠水解液至终浓度为200 mg·L^-1。3组细胞使用流式细胞术检测细胞凋亡率,利用电镜观察细胞形态差异;利用生化检测试剂盒检测3组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物岐化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果 3组细胞增殖法检测结果显示,南珠水解液处理HLE-B3细胞24 h后,对其活性无抑制作用;50 mg·L^-1、100 mg·L     

氧化损伤诱导的人晶状体上皮细胞系基因表达谱的差异和表型改变

目的：探讨人晶状体上皮细胞( hulan lens epithelial cells, HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。
　　方法：培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H2 O2刺激。24 h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数据库DAVID对氧化刺激组相比对照组显著上调的基因进行Gene Ontology ( GO )功能富集分析。 RT-qPCR对上调的基因进行验证。通过MTT和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。
　　结果：表达谱芯片结果显示,氧化刺激造成HLEC中367个基因上调,GO分析表明这些基因富集于310个功能类别中,主要包括p53信号通路、细胞凋亡通路、细胞程序性死亡通路等。 RT-qPCR结果证实,6个主要参与促凋亡或抗凋亡调节的基因,包括 BCL2 A1、TP53 I3、FAS、ZMAT3、DDB2和BCL2 L1,在氧化刺激后表达水平明显上升。 MTT实验和流式细胞仪检测结果显示,H2 O2刺激后HLEC凋亡逐渐上升,是细胞氧化损伤的主要表现。
　　结论：氧化刺激可同时诱导HLEC中促凋亡基因和抗凋亡基因表达水平上调,但最终仍然导致了细胞凋亡。     

原花青素对紫外线诱导晶状体上皮细胞氧化损伤保护作用的研究

目的:研究原花青素(procyanidins,PC)对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(len epithelial cells,LECs)DNA氧化损伤的保护作用。方法:采用照射剂量为15mJ/cm2的中波紫外线(UVB)分别照射用0(对照组),0.05,0.1,0.2mg/mL的PC,牛磺酸(TAU),维生素C(VC)预处理的LECs,未处理组未给予紫外线和任何抗氧化剂处理,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测分析各PC组LECs DNA单链断裂的程度,并与其他各组的检测结果相比较。结果:各PC组的尾长、尾部DNA百分比、尾力矩在数值上均明显小于对照组,且与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。各PC实验组的尾部DNA百分比、尾力矩与未处理组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。相同浓度下,PC,TAU和VC组的各检测指标数值逐渐增大。结论:外源性PC对UVB照射诱导损伤的人LECs DNA有保护作用。PC的保护作用明显强于TAU和VC,并且在一定浓度范围内随着浓度的增加其抗氧化作用逐渐增强。     

雷帕霉素对高糖诱导人晶状体上皮细胞氧化应激的保护作用

目的　探讨雷帕霉素对高糖诱导的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）氧化应激的影响。方法　建立高糖诱导的HLECs氧化损伤模型,用不同浓度(10 nmol·L^-1、100 nmol·L^-1)雷帕霉素干预,CCK-8比色法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态并拍照,H_2DCFDA检测细胞内活性氧水平,Western Blotting检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax 的表达情况。结果　CCK-8检测结果显示,用10 nmol·L^-1、100 nmol·L^-1雷帕霉素处理后,HLECs存活率分别提高到62.86%±3.45%和77.47%±4.21%,与高糖组（42.32%±3.10%）比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）;H_2DCFDA荧光探针染色结果显示,雷帕霉素处理后HLECs内活性氧生成量下降,氧化损伤细胞减少;此外,雷帕霉素可以抑制高糖诱导的HLECs内凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达,抑制效应与剂量正相关。结论　雷帕霉素可以抑制高糖诱导的HLECs氧化损伤及凋亡的发生,对糖尿病性白内障具有预防作用。     

地黄多糖对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨地黄多糖对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化损伤的保护作用及机制。方法 取对数生长期的B-3细胞(HLEC)作为研究对象。筛选H₂O₂和地黄多糖最佳作用浓度。依据筛选的地黄多糖抑制H₂O₂致B-3细胞损伤的最佳作用浓度处理细胞,将B-3细胞分为：空白组、H₂O₂组和地黄多糖组。空白组：用10 g·L^-1羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为EMEM培养基培养24 h; H₂O₂组：用10 g·L^-1羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^-1 H₂O₂的EMEM培养基培养24 h;地黄多糖组：用含40 mg·L^-1地黄多糖的培养基预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^...     

PUMA介导氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡

目的探讨PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelialcell,HLEC)凋亡中的作用。方法体外培养的HLEC-B3,用50μmol·L-1H2O2刺激不同的时间后,Hoechst33258染色,凋亡细胞呈核固缩、碎裂形态,计数细胞凋亡率;采用West-ern blot方法检测PUMA及Caspase-3蛋白的表达水平。采用RT-PCR方法检测PUMAmRNA表达水平;设计合成针对人PUMA基因的小干扰片段(siPUMA1、siPUMA2)和一条阴性对照,用lipofectamine2000转染细胞后,验证干扰有效性,观察其对氧化应激诱导的HLEC凋亡的影响。结果 H2O2刺激HLEC4h、8h、12h后,细胞凋亡率分别为3.30%±0.25%、27.16%±0.31%、48.14%±0.57%,凋亡相关蛋白Caspase-3发生时间依赖的表达上调。H2O2可诱导PUMA mRNA及蛋白质表达上调。干扰PUMA的表达能减少H2O2诱导的细胞凋亡,H2O2处理HLEC-B312h后细胞凋亡率为48.24%±0.84%,而敲除PU-MA的表达后细胞凋亡率显著降低为13.72%±1.06%(siPUMA1)和17.56%±0.51%(siPUMA2)。结论 PUMA介导了H2O2诱导的HLEC凋亡,可能在白内障的发生发展中发挥重要作用。     

锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)凋亡的影响。

方法：将培养的SRA01/04细胞系分为六组,对照组、半乳糖处理组、补锌组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组、缺锌联合半乳糖处理组。采用MTT法检测半乳糖对HLEC存活率的影响,荧光显微镜和流式细胞仪分别检测各实验分组细胞核形态和细胞凋亡率水平的变化。

结果：不同浓度半乳糖(0、25、50、75、100、125mmol/L)处理HLEC细胞后,细胞存活率分别为(100.0±5.4)%、(97.5±3.2)%、(91.3±5.3)%、(93.4±0.6)%、(86.6±1.4)%和(83.5±0.4)%,与未处理细胞相比,半乳糖浓度为100、125mmol/L时,细胞存活率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜结果显示对照组和补锌组的细胞核呈现均一的染色,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组中一些细胞的细胞核收缩,表现出典型的细胞凋亡形态。各组的细胞凋亡率分别为(1.5±0.1)%、(7.1±0.2)%、(1.4±0.1)%、(4.4±0.2)%、(5.5±0.2)%和(15.8±0.3)%。与对照组相比,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P < 0.05)。与半乳糖处理组相比,补锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：补锌可以保护人晶状体上皮细胞抵抗由半乳糖引起的细胞凋亡,可能对白内障的形成有抑制作用。     

枸杞多糖对H2O2诱导人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对H2O2诱导人晶状体上皮细胞(SRA01/04)氧化应激损伤的保护作用.方法 将SRA01/04细胞传代培养24h后,加入不同浓度(50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、400 mg·L-1、800 mg·L-1和1600 mg·L-1)LBP预处理24 h,之后加入200 μmol·L-1H2O2继续培养24 h,用CCK-8检测LBP对H2O2诱导的SRA01/04细胞活力的影响并筛选出LBP最佳保护浓度用于后续实验.采用流式细胞仪检测SRA01/04细胞凋亡率和线粒体膜电位变化情况,Western blot检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示:LBP浓度为200 mg·L-1和400 mg·L-1时,能够促进SRA01/04细胞增殖,细胞存活率分别为(121.10±5.56)％和(128.20 ±3.79)％,与对照组(99.98±4.73)％比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).H2O2模型组SRA01/04细胞经氧化应激损伤后,细胞存活率(51.67±4.91)％明显降低,与对照组(99.67±2.52)％相比,差异有统计学意义(P ＜0.001).用200 mg·L-1和400mg·L-1 LBP预处理后,SRA01/04细胞存活率明显提高至(74.01±3.21)％及(84.67±4.33)％,与H2O2模型组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.01).400 mg·L-1 LBP对RA01/04细胞氧化应激损伤保护作用最大.流式细胞仪检测结果显示:对照组细胞凋亡率为(5.1±1.2)％;H2O2模型组细胞凋亡率为(25.9±1.5)％;400 mg·L-1 LBP预处理后,细胞凋亡率降至(13.8±1.2)％,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).线粒体膜电位检测结果显示:对照组阳性细胞数最多,线粒体膜电位高;H2O2模型组阳性细胞数最少,线粒体膜电位低;400 mg·L-1 LBP预处理后,阳性细胞数增多及线粒体膜电位升高,与H2O2模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.001).Western blot检测显示:与对照组相比,H2O2模型组Bcl-2表达下降,Bax表达上升(P＜0.01);经400 mg·L-1 LBP预处理后,Bcl-2表达上升,Bax表达下降,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 LBP对H2O2诱导人晶状体上皮细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡.     

非瑟酮对人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究非瑟酮（ｆｉｓｅｔｉｎ,Ｆｉｓ）在生理状态下及氧化应激状态下对人晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＨＬＥＣ）增殖和凋亡的影响。方法　体外培养ＨＬＥＣ,通过Ｈ２Ｏ２氧化损伤建立氧化应激模型,设置空白对照组、Ｈ２Ｏ２组、Ｆｉｓ组和Ｆｉｓ＋Ｈ２Ｏ２组,其中Ｆｉｓ组和Ｆｉｓ＋Ｈ２Ｏ２组按Ｆｉｓ浓度（５μｇ?ｍＬ－１、１０μｇ?ｍＬ－１和２０μｇ?ｍＬ－１）分为３个亚组。分别于培养１２ｈ及２４ｈ后,倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态学改变,运用ＭＴＴ法检测细胞增殖的变化,运用流式细胞技术检测细胞凋亡率的变化。结果　与空白对照组比较,Ｈ２Ｏ２组较多细胞出现典型的形态学改变,细胞增殖能力明显降低（１２ｈ、２４ｈ后分别为０．１１７６±０．０１５０和０．１１７２±０．００６１）,凋亡率明显增加（２４ｈ后为１２．３５％ ±１．２３％）,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。不同浓度Ｆｉｓ组间的细胞在培养１２ｈ及２４ｈ后细胞形态均无明显改变,细胞增殖也无明显变化（Ｐ＞００５）。培养１２及２４ｈ后,与Ｈ２Ｏ２组比较,Ｆｉｓ＋Ｈ２Ｏ２组发生形态改变的细胞减少,细胞增殖能力明显改善,且随时间、Ｆｉｓ浓度增加其作用更明显（最高为０．３９９４±０．０２５７）（Ｐ＜０．０５）。培养２４ｈ后,与Ｈ２Ｏ２组凋亡率比较,不同浓度Ｆｉｓ＋Ｈ２Ｏ２组的细胞凋亡率逐渐降低,依次为（９．９９±１．５３）％、（５．８０±１．５５）％、（３．５８±０．７３）％,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　一定浓度的Ｆｉｓ在一定时段对生理状态下的ＨＬＥＣ增殖无明显影响。在氧化应激状态下,Ｆｉｓ呈时间和浓度依赖性地改善ＨＬＥＣ增殖能力,呈浓度依赖性地降低ＨＬＥＣ凋亡率。     

17-β雌二醇对H2O2诱导氧化损伤的晶状体上皮细胞的保护作用

目的 探讨17-β雌二醇对H2O2诱导氧化损伤的晶状体上皮细胞的保护作用.方法 将体外培乔的晶状体上皮细胞分为4组;空白对照组:以正常培养液培养;H2O2损伤组:给予培养融合状态达到80％的晶状体上皮细胞每孔加入100μmol·L-1H2O2,作用12 h;17-β雌二醇低浓度组:用10 μmol·L-1 17-β雌二醇孵育细胞24h后,加入H2O2作用12 h;17-β雌二醇高浓度组:用100 μmol·L-117-β雌二醇孵育细胞24 h后,加入H2O2作用12 h.通过CCK-8法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光探针标记法测定细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),使用721 D分光光度计测定细胞内过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量.结果 H2O2损伤组晶状体上皮细胞经氧化损伤处理后,细胞存活率明显下降,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).与H2 O2损伤组(59.34％)相比,17-β雌二醇低浓度组和高浓度组晶状体上皮细胞存活率分别提高到67.44％和78.52％,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).H2O2诱导损伤后,H2 O2损伤组晶状体上皮细胞凋亡率为(41.30±3.21)％,空白对照组为(1.67±0.32)％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.0I).17-β雌二醇低浓度组和高浓度组晶状体上皮细胞凋亡率分别为(20.97±1.13)％和(14.27±0.90)％,与H2 O2损伤组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).采用H2 DCFDA荧光探针检测胞内ROS变化情况,H2 O2损伤组细胞内ROS表达明显升高,DCF荧光信号明显增强,ROS主峰向基线右侧移位;17-β雌二醇低浓度组和高浓度组荧光信号强度逐渐减弱,ROS主峰向基线左侧移位.H2O2损伤组晶状体上皮细胞内CAT、SOD及GSH-Px含量均降低,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05);17-β雌二醇低浓度组和高浓度组CAT、SOD及GSH-Px含量较H2O2损伤组均逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 17-β雌二醇对H2 O2诱导损伤的晶状体上皮细胞具有明显的保护作用.     

Different Sensitivities to Apoptotic Induction by Camptothecin between Normal and Senescent Lens Epithelial Cells

PURPOSE: To investigate whether normal and senescent lens epithelial cells have different defense abilities to apoptotic induction factor in vitro. METHODS: Rabbit lens epithelial cells were cultured, passed. When reaching confluence, cells from the first and seventh passage were stained by x-gal staining to detect cell senescence. Cell apoptosis was detected by TUNEL(Roche). 10 micromol/L camptothecin was used to induce cell apoptosis from the lens epithelial cells of the first and seventh passage to distinguish different sensitivities to apoptotic induction factor between normal and senescent cells. RESULTS: The senescent cells (41.17% +/- 5.24%) were detected in the lens epithelial cell culture of the seventh passage, which are higher than those of the first passage (0.98% +/- 0.39%). There was no apoptotic cell detected in the cell cultures undisturbed. Exposure of the first passage cells to camptothecin resulted in death of approximately 23.87% +/- 3.45% of the cells during a 36 hour exposure period. In contrast, significantly more lens epithelial cells died through the apoptosis (38.29% +/- 4.01%) from the seventh passage. CONCLUSION: Senescent cells increased with cell passage. Senescence lens epithelial cells do not undergo apoptosis if they were not disturbed. But the vulnerabilities to apoptotic induction between health and senescence cells were different.     

紫杉醇诱导兔晶状体上皮细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导兔晶状体上皮细胞(RLECs)凋亡和对细胞周期改变的作用以及对Fas和FasL基因表达的影响。方法 流式细胞仪分析检测Taxol诱导RLECs细胞周期的阻断；光镜和电子显微镜下观察细胞形态的变化；应用TUNEL法检测药物诱导的细胞凋亡；兔疫组化方法检测该药对Fas和FasL基因的表达。结果Taxol可将RLECs阻断于G2／M期并诱导其凋亡；可见凋亡小体；TUNEL染色显示散在的阳性细胞，且凋亡的细胞量随药物质量浓度的增加而增多；Taxol对RLECs的Fas及FasL基因的表达无明显影响。结论 Taxol不仅能阻断RLECs的分裂，还能诱导其发生细胞凋亡，但不是通过Fas／FasL途径介导的。