苦豆碱对氧糖剥夺再灌注损伤后海马神经元的保护作用

目的:探讨苦豆碱对氧糖剥夺再灌注损伤后海马神经元的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型,MTT法检测神经细胞的存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,激光共聚焦显微镜(CLSM)测定海马神经元细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位水平(MMP),利用hoechst33342检测细胞凋亡率。结果:与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,苦豆碱(25,50,100 mg/L)组可显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶漏出率,抑制Ca2+浓度升高,苦豆碱(25,50,100 mg/L)组能显著降低线粒体膜电位水平,降低细胞凋亡率。结论:苦豆碱对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

黄芪与川芎有效成分配伍对乳鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 研究黄芪与川芎有效成分(黄芪甲苷、藁本内酯、川芎嗪、阿魏酸)配伍对乳鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用.方法 原代培养海马神经元细胞,以免疫组化染色法鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE),建立缺氧缺糖损伤模型,MTT法确定药物安全浓度.细胞随机分为正常组、模型组、阳性对照组、配伍组,比色法检测细胞中半胱氨酸蛋白...     

丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的：基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法：采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物,体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根(SP)提取物低、中、高剂量组(10、30、100 mg·L^-1),除空白组外,其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率,显微条件下观察细胞形态,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡。结果：丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的...     

丹参浸膏中有效成分对小鼠的体外透皮实验研究

应用单室扩散释药装置，采用高效液相色谱方法定量测定，对中药丹参两种有效成分丹参素和原儿茶醛进行了离休鼠皮透过实验研究。结果表明，丹参素和原儿茶醛均可透过鼠皮，其累积透过量随透皮时间延长而增加，加入透皮促进剂月桂氮酮后，透皮效果明显增强。     

银杏叶提取物EGb761对海马神经元氧糖剥夺后神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:通过观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGb761)对氧糖剥夺处理的原代培养海马神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨EGb761对脑缺血的神经保护作用。方法:采用海马神经元培养氧糖剥夺损伤(OGD)模型,分为正常对照组、OGD组及EGb761组,观察神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl-2表达情况。结果:EGb761组较OGD组能明显减少神经元凋亡,上调Bcl-2表达(P<0.05)。结论:EGb761对氧糖剥夺处理后的海马神经元具有明显保护作用。     

D301树脂吸附丹参有效成分的研究

目的 :考察利用大孔树脂D301,富集丹参水提取液中有效成分丹参素及原儿茶醛 ,去除杂质 ,降低出膏率 ,提高膏中有效成分含量。方法 :以丹参素 ,原儿茶醛为指标 ,HPLC检测分离前后有效成分的含量变化。结果 :D301树脂能够有效的吸附丹参素和原儿茶醛。结论 :采用D301树脂可以作为改进分离纯化工艺 ,去除杂质 ,提高粗提物中有效成分含量。     

人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用

目的探讨人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用。方法神经元置于三气培养箱(85%N_2、10%H_2、5%CO_2混合气体)中用无糖细胞外液中培养1.5 h,构建氧糖剥夺,分为对照组、模型组、人参皂苷Rb_1组(0.2、2、20μmol/L)及人参皂苷Rb_1(20μmol/L)+LY294002(1μmol/L)组。采用LDH法和PI/FDA双染检测神经元活性和凋亡率,Western blot法检测神经元p-Akt表达。结果与模型组比较,人参皂苷Rb_1(2、20μmol/L)可显著降低神经元凋亡率、LDH释放(P0.05),人参皂苷Rb_1(0.2、2、20μmol/L)可显著提高神经元p-Akt表达(P0.05);与人参皂苷Rb_1组(20μmol/L)比较,人参皂苷Rb_1+LY294002组可显著逆转人参皂苷Rb_1对神经元凋亡、LDH释放的抑制作用,以及对p-Akt表达促进作用(P0.05)。结论人参皂苷Rb_1可经激活PI3K/Akt来减少OGD诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧损伤原代神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的原代神经元细胞活力及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响.[方法]取新生24 h内SD大鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,并通过免疫荧光法进行MAP-2目的蛋白鉴定;建立神经元OGD/R损伤的体外模型,CCK-8检测不同浓度的心脑舒通胶囊对体外正常培养和OGD...     

超滤工艺对丹参注射液中有效成分的影响研究

目的:采用正交试验法,研究超滤工艺对丹参注射液有效成分的影响。方法:以丹参素钠、原儿茶醛为检测指标,观察其有效成分超滤前后的成分变化,并采用正交试验法考察不同孔径聚砜膜(PS膜)、操作压力、操作温度以及原液浓度对有效成分透过率的影响。结果:正交结果显示,超滤膜的孔径对丹参素钠和原儿茶醛的动态透过率有显著的影响,此外,聚砜膜对丹参素钠和原儿茶醛还有微量的吸附作用。结论:该研究为丹参注射液的工艺优化提供参考。     

丹参滴注液与头孢西丁钠的配伍稳定性研究

目的:研究丹参滴注液与头孢西丁钠的配伍稳定性。方法:在模拟临床用药浓度条件下,考察丹参滴注液与头孢西丁钠配伍后溶液的外观、pH、不溶性微粒的变化,采用高效液相色谱法测定配伍后4 h内丹参素钠、原儿茶醛和头孢西丁的含量。结果:4 h内配伍液的外观、pH无明显改变。随着时间的延长,不溶性微粒数增多,三者的含量均逐渐降低。结论:丹参滴注液与头孢西丁钠配伍后4 h内不稳定,不建议配伍使用。     

基于UPLC-Q/TOF-MS的丹参-川芎对局灶性脑缺血大鼠保护作用的脂质组学研究

目的研究丹参-川芎水煎液冻干物对局灶性脑缺血模型大鼠脂质代谢异常的调节作用。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组及丹参-川芎干预组。末次给药后采集血浆,采用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q/TOF-MS)进行血浆脂质组学研究,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)处理脂质组学数据,考察丹参-川芎干预前后脂质代谢物组变化。结果成功复制了大鼠局灶性脑缺血模型,丹参-川芎水煎液冻干物对局灶性脑缺血大鼠异常脂质代谢表现出明显的改善作用,大鼠脑缺血损伤血浆脂质标志物为PS(21:0/0:0)、PG(12:0/17:0)、C16 sphinganine,phytosphingosine、PE [18:1(9Z)/0:0]、PC(16:1/2:0)、PC(0:0/18:0)、PC(16:1/0:0)、PC(16:0/0:0)、PC(18:2/0:0)、PC(18:1/0:0)、PC(18:0/0:0)、PC(20:5/0:0)。结论丹参川芎水煎液冻干物具有脑缺血损伤保护作用,其机制可能与其对脂质,尤其是磷脂酰胆碱(PC)的调节有关。     

川芎化学成分研究

目的：研究川芎化学成分。方法：利用硅胶柱层析分离，薄层纯化，分离川芎化学成分，经理化常数测定，波谱分析等鉴定结构。结果：共分得7个化合物，分别为正十六烷酸（I），4，7－二羟基－3－丁基苯酞（Ⅱ），大黄酚（Ⅲ），咖啡酸（Ⅳ），原儿茶酸（V），阿魏酸（Ⅵ）和胡萝卜苷（Ⅶ）。结论：化合物Ⅱ为一新化合物，化合物I、Ⅶ为首次从该植物中分得。     

UPLC-DPPH-PAD-ESI-TOF/MS在线联用技术快速筛选丹参中的抗氧化成分

目的建立超高效液相色谱-(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)-二极管阵列检测器-电喷雾飞行时间质谱联用技术(UPLC-DPPH-PAD-ESI-TOF/MS)快速筛选鉴别天然产物中抗氧化成分的方法,并用于丹参中抗氧化成分的快速发现。方法采用WatersACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×3.0 mm,1.8μm),以乙腈-0.2%甲酸水进行梯度洗脱,体积流量0.35mL/min实现丹参提取物的快速分析。柱后流出液与另一路DPPH溶液(0.3mL/min)通过三通阀注入PEEK反应线圈(内径0.25 mm,长度10 m)混合反应后流入检测器检测,检测波长为254和517 nm,通过517 nm下产生的负峰所对应的样品色谱峰来筛选丹参中的抗氧化成分。结果采用UPLC技术在低体积流量下实现样品的高效分离,避免了高体积流量引起的基线噪音、显著提高了在线筛选方法的分辨率和灵敏度,降低了溶剂消耗。采用该方法在丹参提取物中共筛选出31个抗氧化活性成分,采用PAD-ESI-TOF/MS初步鉴定出11种,活性验证实验表明,咖啡酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素均具有较好抗氧化活性,其中,咖啡酸的DPPH半数清除浓度(IC50)值为29.00μmol/L,明显优于阳性对照维生素C。结论该方法分离速度快、分辨率和灵敏度较高、溶剂消耗低,为复杂天然产物中抗氧化成分的快速发现研究提供了方法和技术支持。     

丹参化学成分及其药理作用研究进展

丹参Salvia miltiorrhiza是一味临床常用的具有活血化瘀功效的中药。丹参有着广泛的药理作用,临床主要用于月经不调、心悸失眠及各种心血管疾病,尤其是心绞痛和心肌梗死等疾病的治疗。丹参化学成分是其发挥药理作用的重要物质基础,综述了丹参化学成分及其药理作用的国内外研究进展,分析丹参研究现状及研究方向,为其进一步开发利用提供一定的参考。     

川芎种质鉴定标记开发和系统发育研究

目的基于藁本属Ligusticum叶绿体基因组高频插入缺失区域开发InDel标记,同时结合通用条形码对道地川芎及其常用混伪品进行种质鉴定和系统发育研究。方法通过8个DNA通用条形码ycf1、matK、ITS2、rpoC1、rbcL、rpoB、trnK、psbA-trnH序列片段对采集的26个川芎样品及其常用混伪品进行了扩增和测序,采用了遗传距离统计法、barcoding gap分析法和构建系统发育树法进行亲缘关系和系统发育研究。同时利用InDel分子标记,采用构建进化树法对道地川芎及其混伪品物种进行分子鉴定。结果 rbcL片段保守位点最多(97.32%),且GC含量最高(44.9%)。rbcL+rpoB片段具有最小的平均种内遗传距离(0.002 5),psbA-trnH片段具有最大的平均种间遗传距离(0.429 2)。trnK片段和rbcL+rpoB片段具有最高的种间变异,psbA-trnH片段的"barcodinggap"区重叠度最小。采用的8对DNA通用条形码无法准确地鉴定道地川芎药材与其他混伪品物种。InDel分子标记的聚类分析中,24对InDel引物中的4对引物组合能准确地鉴定出道地川芎,并将道地川芎及其混伪品物种聚类为4个分支,其中一个分支为采集的道地川产川芎药材。结论 InDel标记对道地川芎及其常用混伪品的鉴定能力高于通用条形码。对于传统的通用DNA条形码,由于遗传成分差异大,无法区分川芎及其常用混伪品。新开发出的InDel分子标记可以有效地鉴定道地川芎及其常用混伪品,从分子水平上为川芎道地性研究提供有效手段。     

亳州产丹参药材UPLC-MS指纹图谱研究

[目的]研究和建立亳州产丹参药材的超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)指纹图谱,考察不同批次丹参药材的质量稳定性,为全面的评价其整体质量提供依据。[方法]采用UPLC-MS法分别对水溶性成分和脂溶性成分进行测定,对10批样品的相似度进行计算分析;对共有峰进行标定,并通过MS数据对色谱峰进行指认。[结果]建立了10批亳州产丹参药材中水溶性成分和脂溶性成分的UPLC-MS指纹图谱,标定共有峰18个,其中水溶性成分8个,脂溶性成分10个,鉴定了其中9个色谱峰的化学成分,10批样品的相似度均大于0.90。[结论]该方法准确可靠、重现性好,可以用于丹参药材的整体质量评价。     

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模和定点突变

目的构建川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(Ligusticum chuanxiong caffeic acid-3-O-methyltransferase,LCCOMT)的三维模型,并利用定点突变对模型进行验证。方法利用同源建模构建LCCOMT的初始三维模型;对初始三维模型进行动力学优化;将优化后的模型对接咖啡酸,预测LCCOMT的活性位点;对预测的活性位点展开定点突变,检测突变型蛋白的生物活性。结果 LCCOMT的三维模型能够与咖啡酸成功对接,His268残基可能是LCCOMT的活性位点,推测其能够与咖啡酸3-OH形成氢键。H268N与H268Q2种突变酶分别丧失94.85%和95.28%的催促活性。结论同源建模能够准确预测LCCOMT的三维模型。His268为LCCOMT的关键氨基酸残基,其作用可能是作为共轭碱,参与咖啡酸3-OH的去质子化反应。     

正交试验法优选淫羊藿-川芎药对的配伍提取工艺

该研究采用L₉(3⁴)正交试验法,考察溶剂倍数、提取时间、提取次数、醇浓度等因素的影响,以淫羊藿苷,阿魏酸,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,宝藿苷I,藁本内酯的转移率为评价指标,采用HPLC多波长切换梯度洗脱技术和多指标综合加权评分法(权重系数为0.47:0.16:0.07:0.07:0.08:0.06:0.09),以SPSS 16.0软件分析,优选淫羊藿-川芎药对的最佳提取工艺为饮片浸泡1 h,以12倍量50%乙醇回流提取60 min.验证试验表明该工艺稳定可行,为淫羊藿-川芎的配伍及相关制剂研究提供了实验依据.     

川芎挥发油调控P-糖蛋白协同替莫唑胺的胶质瘤治疗作用及机制

目的研究川芎挥发油体内配伍替莫唑胺对C6胶质瘤大鼠抗肿瘤效果及作用机制。方法制备C6胶质瘤大鼠模型,对比替莫唑胺单独给药、川芎挥发油与替莫唑胺配伍给药后大鼠的体质量、生存状态、肿瘤体积的变化及抑瘤率;HPLC法测定替莫唑胺单独给药、川芎挥发油与替莫唑胺配伍给药后,替莫唑胺在胶质瘤U87-MG细胞内、外液中的浓度,并进行统计学分析;Western blotting法研究替莫唑胺单给药、川芎挥发油与替莫唑胺配伍给药后对U87-MG细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果与替莫唑胺单独给药比较,川芎挥发油与替莫唑胺配伍给药后大鼠肿瘤体积显著减小(P0.05),与川芎挥发油用量呈正相关,同时配伍组大鼠体质量上升趋势更快,生存状态较好。川芎挥发油可以促进替莫唑胺进入U87-MG细胞内液中,且随着挥发油浓度的增加,促进作用越强。其中6.25×10-3μL/mL川芎挥发油可显著增加替莫唑胺在细胞内液中的蓄积(P0.05)。Westernblotting实验结果表明,与替莫唑胺组比较,替莫唑胺和3.125×10-3、6.250×10-3μL/mL川芎挥发油配伍后,可极显著降低P-gp蛋白的表达水平(P0.01)。结论川芎挥发油可通过下调P-gp蛋白的表达,促进替莫唑胺进入胶质瘤细胞内,发挥协同抗肿瘤作用。     

不同干燥方式对丹参品质的影响

[目的]探索不同干燥方式对丹参品质的影响。[方法]采用真空微波干燥、户外晾晒、恒温鼓风烘烤3种方式干燥鲜丹参,并对制备样本有效成分、浸出物含量进行测定分析。[结果]户外晾晒有利于丹酚酸B和丹参素成分的保留,恒温鼓风烘烤有利于醇溶性浸出物成分的保留,真空微波干燥有利于总酚酸、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的保留。[结论]真空微波干燥方式处理鲜丹参,干燥效率高、有效成分损失少,具有广泛的应用前景。