光质对灵芝生长及抗氧化酶系统的影响

目的 以飞船搭载的灵芝Ganoderma lucidum菌株为材料,研究不同光质对灵芝生长形态及抗氧化酶活性的效应,找出适于灵芝生长的最佳光质,为光质选择提供理论依据.方法 栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化,并测定抗氧化酶体系中主要酶活性.结果 不同光质处理的弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹数与对照差异显著.不同光质处理对灵芝子实体产量和灵芝孢子粉产量均有影响.红色、蓝色光质处理提高了过氧化物酶( POD)、过氧化氢酶(CAT)活性.蓝色光质处理提高了可溶性蛋白量,并且使丙二醛(MDA)在生长末期保持相对较低水平,从而延缓了灵芝子实体衰老.绿色、黄色光质抑制了抗氧化酶活性,导致灵芝子实体可溶性蛋白量下降及MDA量上升,加速了灵芝子实体的衰老过程.结论 蓝色光质可以使灵芝子实体维持较高的抗氧化酶水平,促进可溶性蛋白合成,从而增强灵芝代谢,延缓灵芝衰老.     

人参生长与生理特性对镉胁迫的响应

目的研究重金属镉(Cd)胁迫对人参生长及生理特性的影响。方法通过筒栽试验,对不同质量分数Cd处理(0、0.3、1.0、2.0、4.0 mg/kg)下人参的生物量、叶色值(SPAD)、抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)进行测定与分析。结果随着Cd胁迫质量分数的增加,人参相对生长率呈现逐渐降低的趋势,与Cd添加质量分数之间呈显著负线性相关(P0.05);人参叶片SPAD值呈降低趋势;而人参不同部位抗氧化酶活性及MDA量均有不同程度的升高,根和叶的MDA量与Cd质量分数呈显著正线性相关(P0.05)。同一Cd水平处理下,人参不同部位MDA量表现为叶茎根。结论人参具有适应一定Cd质量分数(≤1.0 mg/kg)胁迫土壤环境的能力,此时可增强自身抗氧化酶活性等生理生化反应来清除活性氧,保持膜稳定,缓解Cd胁迫带来的伤害;然而在处理质量分数1.0 mg/kg时,人参MDA量显著增加,氧化损伤严重,影响植物生长,导致人参生物量下降。     

光质对灵芝菌丝体生长及内源IAA代谢调控的研究

采用新型LED冷光源设置不同光质条件,动态观测灵芝菌丝体生长、内源IAA含量和其相关酶活性变化及多糖积累情况,研究光质对灵芝菌丝体生长、内源IAA水平及活性成分积累的影响,揭示光质作用于灵芝的效应及机制,为灵芝菌丝体培养提供科学的理论依据.研究发现,蓝光处理菌丝体生长稳定,多糖含量明显高于其他处理,综合优势明显;红光处理在灵芝菌丝体生长前期能显著提高其内源IAA水平,加快其生长;绿光处理菌丝体生长缓慢,鲜重少,但其折干率大.不同光质对灵芝菌丝体IAA代谢相关酶活性有显著影响:蓝光处理灵芝菌丝体IAA含量始终处于较低水平,其吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、过氧化物酶(POD)以及色氨酸合成酶活性变化均为前期高而中后期低;黄光处理菌丝体IAA含量居中,但其IAAO、色氨酸合成酶活性最大.结果表明不同光质影响灵芝菌丝体生长,同时对其内源IAA水平也有显著影响.     

LED光源的不同光质对灵芝菌丝体生长及抗氧化酶活性的影响

目的:研究不同光质对灵芝菌丝体生长及抗氧化酶活性的影响,为灵芝菌丝体培养提供科学的理论依据.方法:采用新型半导体发光二极管(LED)光源设置不同光质处理,动态观测灵芝菌丝体生长、多糖含量及抗氧化酶活性变化.结果:蓝光处理及黑暗对照条件下灵芝菌丝体生长较快,黑暗对照条件下菌丝体形态纤细、菌落淡薄,蓝光、白光处理菌丝体粗壮、菌落浓密.白光处理菌丝体生物量积累最高,蓝光次之.绿光处理灵芝菌丝体POD酶活性波动变化较大,生长中后期显著高于其他处理.白光处理菌丝体CAT酶在生长过程中始终保持较高活性.生长前期黄光处理菌丝体SOD酶活性最高,后期黑暗对照SOD酶活性较高.前期绿光处理菌丝体多糖含量较高,生长后期蓝光处理菌丝体多糖含量显著高于其他处理.结论:光质影响灵芝菌丝体生长代谢,蓝光利于灵芝菌丝体生长代谢.     

镉胁迫对广西田七生长及品质的影响

目的通过研究镉胁迫对田七生长及药材品质的影响,探究镉吸收、运输与分配机制,为保障田七重金属安全提供理论支撑。方法以三年生田七为试验材料,采用盆栽方法,设计不同镉污染处理(0、5、10、20、30、40、50 mg/kg)对田七生长及品质进行研究。结果除5 mg/kg镉处理外,其余处理均有不同程度地显著抑制田七的生长,不同镉处理均显著增加田七根部镉的含量,镉处理40 mg/kg时达到最大。结论在试验范围内,随着镉处理浓度的升高,田七的茎高、茎粗、叶长、叶宽、叶面积、须根数等均有不同程度的变化,大体呈现逐步降低趋势;田七皂苷含量除镉浓度5 mg/kg时Rg1、Rd有提高趋势外,其余均呈下降趋势;田七地下部吸收镉表现出逐步显著增加的趋势。     

光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量影响的研究

目的 研究光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量和组分的影响。方法 采用新型LED冷光源设置不同光质处理,动态观测灵芝菌丝体生长、总三萜酸量及三萜酸组分的变化情况。结果 不同光质处理灵芝菌丝体形态、生长速度、生物量和总三萜酸量及单体三萜酸在组分、相对量及各组分间的比例都有所变化。蓝光处理菌丝体在整个培养期始终保持稳定增长;红光处理菌丝体前期生长速度及生物量最大,但是中后期生长速度显著下降,生物量增加缓慢,次于蓝光;绿光处理菌丝体前中期生长速度及生物量均最小,然而培养后期增加明显,干物质迅速积累。灵芝三萜酸在菌丝体培养第7天时已大量产生,随培养时间延长种类增多,组分量降低。绿光和蓝光处理对提高灵芝菌丝体三萜酸种类和量均有明显优势。结论 光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量和成分均有显著影响,蓝光对促进灵菌丝体生长及三萜酸积累综合优势明显。     

灵芝代谢产物抗肿瘤作用的研究

目的 了解灵芝代谢产物对肿瘤细胞的作用.方法 ①体质量为18～22 g昆明140只小鼠随机分为7组,其中6组左前腋皮下注射S180,然后分别给予生理盐水、腹腔注射含灵芝代谢产物培养基、环磷酰胺、腹腔注射含灵芝代谢产物培养基加抗血清组、口服含灵芝代谢产物培养基组和单纯腹腔注射抗血清组处理,未注射S180的20只给予生理盐水,一周后处死各组动物观察各组肿瘤质量大小、血清TNF-α水平、血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶变化.结果 腹腔注射含灵芝代谢产物培养基加抗血清组能有效减轻荷瘤小鼠的肿瘤质量,其质量减轻程度与环磷酰胺无差异.结论灵芝代谢产物中的羟基可能参与了抗肿瘤作用.     

灵芝及灵芝多糖对造血的影响

《本草纲目》记载,灵芝无毒,益心气,入心充血,助心充脉,安神,益肺气,补中,增智慧,好颜色,利关节,坚筋骨,祛痰,健胃,活血等功效。灵芝多糖为其主要有效活性成分。有关灵芝及灵芝多糖临床应用减轻放化疗所致骨髓抑制,改善放化疗后实验动物骨髓造血功能,增加白细胞总数,提高存活率以及抗辐射的作用有很多报道,本文就灵芝及灵芝多糖对造血影响的基础研究与临床应用综述如下。     

环境胁迫下次生代谢产物的积累及道地药材的形成

文章总结了环境对植物,特别是植物次生代谢产物积累影响的研究成果,并在介绍环境胁迫影响次生代谢产物积累的4种假说的基础上,分析了环境对道地药材形成的影响,指出逆境可能更利于中药道地性的形成,提出了道地药材形成的逆境效应理论,并初步探讨了环境胁迫影响药材道地性研究的思路和方法。     

二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响

目的探讨二氧化氯作为消毒剂应用于灵芝栽培和液体培养。方法平板法测定灵芝菌丝的生长和摇瓶发酵法测定灵芝的生物量。结果在未高温灭菌的培养基中添加0.7%(v.v-1)的二氧化氯,灵芝菌丝生长良好;灵芝菌丝液体发酵重量接近对照组。结论为灵芝栽培和液体发酵培养奠定基础。     

灵芝一共生真菌的脑苷类成分研究

目的：为了从灵芝Ganoderma lucidum中寻找新的天然抗肿瘤活性产物，对其次生代谢产物进行了较系统的研究。方法：利用柱层析和制备RP－HPLC从灵芝一共生真菌（Calcarisporium arbuscula)的发酵菌丝体中分得4个脑苷类化合物。结果：通过光谱分析鉴定，分别为：（4E，8E，3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十六烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（I),(4E,8E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基十六烷酰基－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅱ），（4E,8E,3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十八烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅲ，2－（2－羟基二十四烷酰氨基）－1，3，4－十八烷三醇（Ⅳ）。结论：I－Ⅳ均首次从齿梗孢属真菌中分离得到。     

灵芝多糖肽中单糖的组成

目的从灵芝Ganoderma lucidum子实体中分离得到的GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT43种多糖肽,对其单糖组成和摩尔比进行比较。方法多糖肽经三氟乙酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮(PMP)衍生化,在高效液相245nm紫外检测,使用KH2PO4(pH5.0)-乙腈(83.5∶16.5)等度洗脱,9种单糖的色谱峰分离清晰,大多呈基线分离。结果经实验确定GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸等9种单糖组成。结论灵芝子实体活性成分多糖肽中的核糖系属首次报道。     

碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价

目的从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究。方法赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15)。采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征。采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价。结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3%),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖。RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性。结论赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂。     

不同产地赤芝药材的质量分析

目的 对不同产地批次赤芝Ganoderma lucidum进行全面的质量评价，为灵芝药材质量标准的完善及优质赤芝原料药的筛选提供依据。方法 收集15批次各GAP基地的灵芝药材，参照《中国药典》2020年版方法及行业通用方法，考察其水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物，分别采用比色法、柱前衍生高效液相色谱法（PMP-HPLC）、高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定多糖含量并进行比较；采用比色法测定三萜甾醇含量，HPLC法进行灵芝酸A一测多评；同时对15批赤芝的HPLC指纹图谱进行差异比较。结果 15批赤芝药材均符合《中国药典》2020年版的质量标准要求，指纹图谱聚类分析和主成分分析（principal component analysis，PCA）结果表明山东聊城产赤芝能明显区别于其他批次样品。结论 15批赤芝药材均符合《中国药典》质量标准，说明国内赤芝GAP基地种植质量良好；同时山东聊城产赤芝能显著区别于其他产地批次赤芝样品，主要体现在三萜甾醇等有效成分的含量更高。     

基于UPLC-QTOF-MS和多元统计分析的赤芝道地性研究

目的 研究不同产地、不同栽培方式对赤芝中三萜类成分的影响,为赤芝的道地性研究提供依据。方法 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法（UPLC-QTOF-MS）对120批赤芝样品进行化学成分分析。将赤芝样品按照浙产/非浙产、浙产段木/非浙产段木、浙产段木/浙产野生、不同发育时期进行模式分类,应用正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）对赤芝样品进行多元统计分析,用变量重要性投影（VIP）值、t检验筛选出组间差异显著的指标性成分。结果 从供试样品中鉴定出13种响应高、分离度好的灵芝酸类成分。筛选发现,浙产赤芝中灵芝酸D、灵芝烯酸D显著高于非浙产赤芝,可作为浙产赤芝的标志性成分;浙产段木赤芝中灵芝酸D、灵芝酸B、灵芝酸C₁、灵芝酸G的含量显著高于非浙产段木赤芝;段木赤芝中灵芝酸A等6个成分均显著高于野生赤芝;随着赤芝子实体逐渐成熟（现蕾期→开伞期→成熟期→采摘期）,多数灵芝酸含量呈现下降趋势,但部分样品采摘期（喷孢后）灵芝酸含量较成熟期（喷孢前）高,值得进一步研究。结论 浙产与非浙产赤芝成分差异较明显,且浙产段木赤芝与非浙产段木赤芝成分也存在明显差异,可能与生态环境、种植方式有关。     

赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。     

赤芝水提取物中的三萜类成分

采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、HPLC等色谱技术手段,从赤芝水提物中分离得到1个新的灵芝三萜酸和18个已知类似物。利用理化性质和波谱数据,鉴定新化合物为2β-acetoxy-3β,25-dihydroxy-7,11,15-trioxo-lanost-8-en-26-oic acid(1)。通过与文献数据比较,已知化合物分别鉴定为ganoderic acid H(2),12β-acetoxy-3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(3),ganoderenic acid D(4),ganoderic acid C1(5),ganoderic acid G(6),3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(7),ganoderic acid B(8),ganoderic acid C6(9),3β,15α-dihydroxy-7,11,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(10),ganoderic acid A(11),ganolucidic acid A(12),lucidenic acid E2(13),lucidenic acid N(14),lucidenic acid P(15),lucidenic acid B(16),lucidenic acid A(17),lucidenic acid C(18),lucidenic acid L(19)。虽然化合物2~19在赤芝中已经报道,但是化合物1是新化合物。因此,该研究进一步丰富了赤芝的化学成分,尤其是填补了赤芝传统水煎剂化学成分研究的空白。     

微波连续抽提用于灵芝三萜类成分的分析

结合索氏提取的原理,自制了微波连续抽提装置,通过与传统方法的比较,研究了微波连续抽提法的特点和萃取效率,并将其用于灵芝三萜类成分的分析.该法的萃取条件为:以95％乙醇为萃取溶剂,微波功率200 W,微波时间14.5 min(5个循环).将上述条件下的萃取结果与传统的回流提取、索氏提取、超声提取和微波萃取法进行比较.结果,微波连续抽提和常规的微波萃取分别需要14.5,10 min即可将灵芝三萜类成分的提取量达到最高,而其他非微波提取的方法则需要几十分钟甚至上百分钟.微波萃取10 min与回流提取120 min所得灵芝三萜的量基本一致,明显高于索氏提取和超声提取法,同时又远低于微波连续抽提法.更为重要的是,由三萜提取量所占粗提物的比例可知,微波连续抽提所得提取物的纯度远远优于其他方法.微波连续抽提有效结合了微波萃取和索氏提取的优点,因此比常规的微波萃取更能将药材中的目标成分提取完全,使分析结果更为准确,为中药的成分分析提供了一种新颖的、高效、快速、可靠的样品前处理技术.同时,由于该方法提高了药材利用率,并且所得提取物具有杂质含量低,有效成分含量高的特点,也可将其用于中药成分的制备和提取工艺的研究.