肺癌的发生与P16蛋白表达的关系

P16抑癌基因是一种肿瘤抑制因子，其所编码的蛋白是周期素依赖激酶抑制蛋白的一种，在细胞周期进程中起负调控作用。P16蛋白缺失或异常可导致周期依赖激酶4（CDK4）活性上升，引起细胞增殖失控，导致Rb蛋白磷酸化，促进细胞从G1期向S期转变和细胞增殖。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

曲古抑菌素A对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长增殖、细胞周期相关基因CDK4、Cyclin D1、Rb表达的影响.方法 分别以不同浓度的TSA处理MCF-7细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR方法检测CDK4、Cyclin D1、Rb mRNA的表达水平;用Western blotting法检测MCF-7细胞的CDK4、Cyclin D1、Rb蛋白表达.结果 各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P＜0.01),细胞滞留在G1期;经不同浓度TSA处理的细胞CDK4和Rb mRNA表达水平没有明显变化;Cyclin D1的mRNA表达水平显著下降.CDK4蛋白表达水平也没有明显变化,Cy-clin D1和pRb磷酸化蛋白的水平明显下降.结论 TSA抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖可能是通过下调Cyclin D1和Rb蛋白的磷酸化水平来实现的.     

A激酶锚定蛋白9提高ERK通路活性促进肺腺癌细胞A549增殖和迁移

目的：探讨A激酶锚定蛋白9（AKAP9）对肺腺癌细胞A549的作用及其可能的分子机制。方法：通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）法检测shRNA的沉默效果;通过MTT和克隆形成实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549增殖的影响;Transwell实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549迁移的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测周期相关蛋白P27、细胞周期素D1（Cyclin D1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）的表达和细胞外信号调节激酶（ERK）通路中表皮生长因子受体（EGFR）、ERK的磷酸化水平。结果：RT-qPCR和Western blot结果显示,shRNA可以有效地沉默肺腺癌细胞A549中AKAP9的表达（P ＜0.01）。MTT和克隆形成结果示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的增殖和克隆形成能力（P ＜0.01）。Transwell实验示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的迁移能力（P ＜0.01）。流式细胞术结果示,与对照组相比,沉默AKAP9可以诱导肺腺癌细胞G1-S期阻滞（P ＜0.01）。Western blot结果示,与对照组相比,沉默AKAP9增加细胞周期负性调控因子P27,减少正性调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,并降低EGFR、ERK的磷酸化水平（P ＜0.01）。结论：沉默AKAP9可以通过抑制ERK通路活性减弱肺腺癌细胞A549增殖和迁移的能力。     

泰山照山白金丝桃苷诱导人乳腺癌细胞的细胞周期阻和凋亡的机制研究

目的 观察泰山照山白金丝桃苷（Hyperin）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期及凋亡影响及其机制.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,加入不同金丝桃苷浓度处理,运用MTT法检测细胞生长、流式细胞术PI染色检测细胞周期,western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）、细胞周期蛋白A （Cyclin A）及caspase3的表达.结果 与对照组相比,经金丝桃苷处理后细胞生长呈时间及浓度依赖性抑制;MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,该期细胞比例增多;CDK2、Cyclin A蛋白水平的表达与对照组相比明显下降而caspase3蛋白水平的表达明显升高.结论 通过细胞周期的G2/M期阻滞诱导细胞凋亡可能是金丝桃苷发挥抗肿瘤作用的可能机制之一.     

CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养,实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组,采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组,通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P<0.05）;沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P<0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P<0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白 CDK2/4（P<0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）、EMT 相关蛋白 Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P<0.05）,同时上调E-Cadherin（P<0.05）;沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P<0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）,EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P<0.05）,同时下调E-Cadherin（P<0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少;沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P<0.05）,并促进其泛素降解（P<0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.01）。结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠细胞周期的双重调控作用及其机制

目的：探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠骨髓和肿瘤细胞周期双重调控的作用机制。 方法：本研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组。除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型。治疗组用40g/（kg·d）双黄升白颗粒治疗6d后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数（proliferationindex,PI）;蛋白印迹法和免疫组织化学法检测骨髓及肿瘤组织中细胞周期蛋白依赖激酶4（cyclin-dependent kinase4,CDK4）、细胞周期蛋白依赖激酶6（cyclin-dependent ki-nase6,CDK6）和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达。 结果：模型组骨髓及肿瘤的G0/G1期细胞比例均低于空白组（P〈0.05）,PI和CDK4、CDK6、cyclin D1表达高于空白组（P〈0.05）。治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyclinD1表达均高于模型组及空白组;肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyc-lin D1表达均低于模型组及空白组。 结论：双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的细胞周期具有双重调控作用,其机制可能与双重调节cyclin D1、CDK4和CDK6表达有关。     

藤黄酸抑制NF-κB信号通路阻滞Raji细胞周期进程

目的探讨藤黄酸对人B细胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞系Raji细胞周期的影响及可能的信号通路。方法采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹检测Cyclin D3、Cyclin E和NF-κB蛋白表达。结果藤黄酸能明显抑制Raji细胞增殖,呈剂量依赖性阻滞Raji细胞周期于G0/G1期,下调Cyclin D3、Cyclin E和NF-κB蛋白表达。结论藤黄酸通过抑制调节Cyclin D3和Cyclin E的表达,阻滞细胞周期进程,该过程可能与NF-κB传导通路有关。     

小整合膜蛋白22在肺癌恶性进展中的作用机制研究

目的 探讨小整合膜蛋白22(SMIM22)在肺癌恶性进展中的作用及分子机制。方法 使用TCGA数据库获取SMIM22在肺癌组织中的表达水平；在H1299和H1975细胞中干扰SMIM22基因表达，定量聚合酶链反应（qPCR）观察其干扰效果并用CCK8检测干扰对肺癌细胞增殖的影响、流式细胞术检测干扰肺癌细胞凋亡和周期的影响；蛋白免疫印迹（Western Blot）检测干扰SMIM22对H1299细胞中p-MEK、MEK和c-myc蛋白水平的影响；qPCR检测干扰SMIM22对c-myc下游基因Cyclin D2、Cyclin E1、CDK2和CDK4的mRNA表达的影响。结果 与癌旁组织相比，SMIM22在肺癌组织中表达升高（P<0.05）;SMIM22高表达与肺癌患者不良预后相关。SMIM22表达降低，能抑制肺腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡并将细胞周期阻滞在G0/G1期。敲低SMIM22后，与MEK-MYC通路相关的蛋白（如p-MEK、 c-MYC）表达水平降低，相关基因（如Cyclin D2、Cyclin E1、CDK2、CDK4）表达水平也降低（P<0.05）。结论 SMI...     

PTEN基因影响K562细胞周期的分子机制探讨

【目的】探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响。【方法】将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、CyclinD1、CyclinD2、CDK4、P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。【结果】与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示：G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4 mRNA及Cyclin D1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加。【结论】PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期。     

脑神经胶质瘤病人脑脊液TSGF及HGF对新生血管生成相关因子的影响

目的:探讨恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)及肝细胞生长因子(HGF)对脑神经胶质瘤进展的影响及与新生血管生成相关因子的关系.方法:选择87例胶质细胞瘤病人,WHO胶质细胞瘤分级(Ⅰ级29例,Ⅱ级26例,Ⅲ级21例,Ⅳ级11例,检测各级病人脑脊液TSGF及HGF、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮生长因子(EGF)及促血管生成素1(Ang-1).结果:Ⅱ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01).Ⅱ级病人VEGF较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ang-1均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01),bFGF及Ang-1均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01).TSGF与VEGF、bFGF及Ang-1均呈正相关关系(P<0.05～P<0.01),HGF与VEGF亦呈正相关关系(P<0.01).结论:脑脊液内TSGF及HGF水平升高是导致神经胶质瘤分级进展的重要因素,其过程与新生血管生成相关因子水平升高密切相关.     

组织因子与脓毒症的关系

脓毒症是感染继发的全身炎性反应综合征,重组活化蛋白C的抗凝作用对脓毒症患者已取得肯定疗效,使脓毒症导致的凝血异常受到重视。组织因子是感染诱发的主要凝血因子。该文作者就其与脓毒症的关系作一综述。     

心理社会因素对医学生自信水平的影响

目的：寻找影响医学自我评价的有关因素，为提高他们的自信程度提供参考。方法：采用个人评价问卷（PEI）、应付方式问卷、症状自评量有（SCL－90）及一般情况调查表（自制）对450例学生进行调查，结果：性别、身高、体重、班委、恋爱、母亲文化程度，父亲健康状况，家庭经济状况，解决问题，求助等因素与PEI量表总分量呈显著正相关，SCL－90各因子呈显著分和总均分及自责，幻想，退缩，合理化与PEI量表总分负相关。结论：医学生的自我评价受到自身心理状况，应付方式、家庭状况等因素的影响。     

表皮生长因子和转化生长因子在子宫内膜息肉的表达

目的探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子(TGF)与子宫内膜息肉的关系。方法对我院2012年1月至2014年1月收治的70例子宫内膜息肉患者的内膜息肉及正常内膜组织内转化生长因子及表皮生长因子的表达进行测定。结果在息肉组织腺体及间质上表达,表皮生长因子、转化生长因子的表达明显高于周围内膜,差异有统计学意义(P<0.05),转化生长因子在息肉组织腺体与间质上的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论表皮生长因子和转化生长因子的表达与子宫内膜息肉的发生有着直接影响。     

卒中后抑郁的危险因素多因素分析

[目的]探讨急性脑卒中后抑郁(poststroke depression,PSD)发病的危险因素.[方法]选择脑卒中患者50例,对所有患者依据CCMD-3进行诊断,然后进行Hamilton抑郁量表测试,分为三组.按starkstein法将病灶定位,采用多因素分析.[结果]①急性PSD发生率为62%,其中轻度抑郁占52%,中度抑郁占38%,重度抑郁占10%.②病灶最前点与额极的距离,以及病灶最后点与枕极的距离,均与抑郁症成负相关.③神经功能缺损的严重程度、合并症、经济状况是影响抑郁症的主要相关因素,而病灶所在的大脑半球、CT扫描上显示的陈旧病灶、性别、年龄、中风性质与抑郁症的发生无明显的相关性.[结论]PSD的发生率较高,且与躯体、心理、社会等多方面因素有关.     

新生儿窒息患儿血浆组织因子和组织因子途径抑制物水平变化

目的探讨新生儿窒息血浆组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)含量变化及其意义。方法选择64例新生儿窒息患儿和同期32例正常足月新生儿(对照组)作为研究对象,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定脐血、窒息极期和窒息恢复期血浆TF、TFPI含量。结果新生儿窒息时,脐血TF含量明显升高(P<0.05),TFPI含量略有升高,TFPI/TF比值变小,与对照组比较二者差别无统计学意义(P>0.05)。窒息极期,外周血TF含量进一步升高,TFPI含量则出现下降,TFPI/TF比值继续变小,三者与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01);重度窒息组TF含量比轻度窒息组高(P>0.05)。窒息恢复期,外周血TF含量明显回落,轻度窒息组与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),但重度窒息组仍然高于对照组(P<0.05);TF含量轻度窒息组比重度窒息组低,但差别无统计学意义(P>0.05);TFPI含量3组之间比较差别无统计学意义(P>0.05);但TFPI/TF比值窒息组同对照组比较仍然明显降低(P<0.05);窒息恢复期TFPI/TF比值轻度窒息组比重度窒息组高,差别无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿窒息时,TF和TFPI含量出现明显改变,TF持续升高,而TFPI含量初期升高,极期降低,TFPI/TF比值降低,其变化程度与窒息程度呈正相关关系。     

组织因子、组织因子途径抑制物对脓毒症凝血异常的影响

目的探讨脓毒症时组织因子（tissue factor,TF）与组织因子途径抑制剂（tissue factor pathway inhibitor,TFPI）的表达及其平衡对凝血异常的影响。方法昆明小鼠72只采用盲肠结扎穿孔模型（cecal ligation and puncture,CLP）,分为正常组、假手术组和造模组,每组根据不同时间点（2、4、8、12 h）分4个亚组,每个亚组各6只,检测血小板计数和凝血指标,采用ELISA法检测血浆TF和TFPI浓度。结果盲肠结扎穿孔后,造模12 h组PT、TT、APTT和DD显著升高,Fbg和PLT计数显著降低,与正常组及假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。造模2 h组TF与TFPI均显著升高,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）;且TF浓度随时间呈进行性升高,而TFPI未见进一步升高。结论脓毒症时,血小板减少及TF、TFPI表达增加的失衡可能是诱发凝血异常进而参与MODS发生的关键因素。     

成纤维细胞生长因子及血管内皮生长因子在喉粘膜上皮中的分布及作用

目的：探讨成纤维细胞生长因子超家族成员（ｂＦＧＦ和ＫＧＦ）及血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与喉粘膜上皮与间质相互作用的关系．方法：用免疫组化方法和原位杂交方法，分别观察ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ在喉部正常粘膜（Ｎ）和炎症（ＩＦ）中的分布．结果：ｂＦＧＦ和ＫＧＦ的转录仅在Ｎ及ＩＦ的间质中出现，阳性反应位于血管内皮细胞和成纤维细胞，此外巨噬细胞也见阳性反应，上皮细胞均未见阳性表达．而ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达，部分血管内皮细胞及慢性炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ．在ＩＦ中，ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ的阳性率和反应程度较Ｎ均有所提高．结论：ｂＦＧＦ，ＫＧＦ和ＶＥＧＦ通过自分泌或（和）旁分泌途径促进上皮细胞生长及间质中的血管形成，在上皮与间充质细胞的交互作用中发挥着重要的作用．     

表皮生长因子受体和血管内皮生长因子在胃近端癌组织中的表达

目的检测表皮生长因子受体（EGFR）和血管内皮生长因子（VEGF）分别在胃贲门部和胃窦部癌组织中的表达情况,了解胃贲门癌和胃窦癌的生物学特性及不良预后的原因,指导胃癌术后的治疗。方法选取手术切除的胃贲门癌组织标本64例和胃窦癌组织标本67例,常规病理检查,应用链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接（S-P）免疫组化法检测癌组织中EGFR和VEGF蛋白表达,比较两组患者3年生存率。结果胃贲门癌组EGFR和VEGF蛋白表达率高于胃窦癌组（P〈0．05）。胃贲门癌组患者3年生存率差于胃窦癌组（P〈0．05）。结论胃贲门部癌组织中的EGFR和VEGF基因蛋白过度表达,与胃责门部癌生物学行为差、预后不良存在着密切关系,反映了贲门癌有较高复发和转移危险,提示有加强责门癌手术后辅助治疗的必要性。