利用分子生物学方法检测鼻咽癌颈部转移性淋巴结中EB病毒基因研究(二)

目的利用分子生物学方法聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＳＢＨ）为隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据。材料与方法利用ＰＣＲ基因扩增技术和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测经针吸活检取材或活检取材的２０例鼻咽癌（ＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）（实验组）３３份标本和２６例非鼻咽癌（对照组）２７份标本中ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）。结果在ＮＰＣ组中ＥＢＶ基因检测，１７／２０例是阳性，１８份针吸活检取材标本中１３／１８呈阳性；对照组中仅３／２０例ＥＢＶ检测呈阳性，其中２例为霍奇金病，１例鼻咽腺样增殖体。结论ＥＢ病毒基因检测结果再次显示本研究能准确地为隐性鼻咽癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据，而且针吸活检取材较石腊切片取材更省时，痛苦小而经济。应强调的是分析ＥＢＶ检测结果应与病理，临床检查相结合     

EBV—BHRF1基因阳性与阴性细胞株与3种诱导调亡因素抵抗性差异的研究

目的 观察ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因阵性与阴性细胞株对３种诱导细胞凋亡因素的抵抗力差异。方法 ＰＣＲ扩增ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因片段诱导后经电镜及电泳ＤＮＡ检测细胞凋亡。结果 分别从Ｂ９５－８、Ｒａｊｉ及人低分化鼻咽癌细胞株（ＳＵＮＥ－１）ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒的ＢＨＲＦ１全基因片段，而Ｋ５６２、ＹＡＣ细胞株则不含该基因片段。分别经上述３种方法处理后，前３种细胞株的形态及ＤＮＡ电泳行为未发生明显改变，而     

鼻咽癌中EB病毒基因组状态研究

用多聚酶链反应扩增Ｅｐｓｔｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的Ｂａｍ ＨＩ Ｗ片段，在２０例低分化鼻咽癌活检组织中，检测出ＥＢＶ ＤＮＡ片段；裸鼠低分化ＮＰＣ移植瘤株ＳＵＮＴ－１从第３４代持续存在ＥＢＶ ＤＮＡ，其相应体外细胞株ＳＵＮＥ－１第１至６２代仍阳性。     

EBV-BHRF1基因阳性与阴性细胞株对3种诱导凋亡因素抵抗性差异的研究

目的观察ＥＢＶ┐ＢＨＲＦ１基因阳性（ＳＵＮＥ┐１、Ｒａｊｉ和Ｂ９５┐８）与阴性（Ｋ５６２、ＹＡＣ）细胞株对３种诱导细胞凋亡（ａｐｏｐ┐ｔｏｓｉｓ）因素（无血清培养４８小时，４３℃作用１０分钟或２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用２４小时）的抵抗力差异。方法ＰＣＲ扩增ＥＢＶ┐ＢＨＲＦ１基因片段诱导后经电镜及电泳ＤＮＡ检测细胞凋亡。结果分别从Ｂ９５┐８、Ｒａｊｉ及人低分化鼻咽癌细胞株（ＳＵＮＥ┐１）ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒的ＢＨＲＦ１全基因片段，而Ｋ５６２、ＹＡＣ细胞株则不含该基因片段。分别经上述３种方法处理后，前３种细胞株的形态及ＤＮＡ电泳行为未发生明显改变，而后２种细胞株则出现典型的细胞凋亡特征，即细胞核凝缩，细胞膜及细胞器基本保持完整；ＤＮＡ电泳出现梯形（Ｌａｄｄｅｒ）条带。结论初步揭示ＢＨＲＦ１基因产物在抑制上述因素所诱导的细胞凋亡方面起着重要作用     

利用分子生物学方法检测鼻咽癌患者颈部转移性淋巴结中EB病毒基因研究

目的利用分子生物学方法（ＰＣＲ基因扩增技术和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交）为隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌提供诊断和鉴别诊断参考依据。材料与方法采用ＰＣＲ基因扩增技术和ｈｕｔｈｅｒｎ印迹杂交回顾性检测１７例鼻咽癌（ＮＰＣ组）颈转移性淋巴结和１７例来自其他肿瘤（对照组）的颈转移性淋巴结石腊切片中ＥＢ病毒基因。结果在ＮＰＣ组中，１５／１７标本ＥＢ病毒基因检测阳性，２／１７标本ＥＢ病毒基因检测阴性。这２例病理为低分化鳞癌。对照组中仅２／１７例ＥＢ病毒基因检测阳性，其中一例是非何杰金淋巴瘤，另１例是甲状腺乳头状腺癌。结论在隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌，ＥＢ病毒基因检测是有价值的，从而能给予及时的治疗。     

三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ　ＤＮＡ）。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＢＶ　ＤＮＡ的Ｓ区、前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区。以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０－６ｐｇ。以Ｓ、Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２）　７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３２）；以Ｃ引物和Ｘ引物扩增，阳性率差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。Ｓ引物扩增，阳性率与Ｃ引物比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）；与Ｘ引物比较，差异颇大（０．１０＞Ｐ＞０．０５）。１６例肝中均检出ＨＢＶＤＮＡ片段。结果提示，防治ＨＢＶ感染为我国ＨＣＣ一级预防的重要方面。Ｘ基因整合导致细胞恶变，Ｃ基因表达受阻逃避宿主的免疫监视可能是临床肝癌发生的机制。     

鼻咽癌高危人群,癌前病变的确立

１９８６￣１９９５年广东省鼻咽癌高发区对近１０万人，以鼻咽部间接鼻咽镜检查，ＥＢ病毒多种抗体检测，鼻咽光导纤维镜检查，活检组织病理检查及ＥＢ病毒ＤＮＡ、ＥＢＥＲｓ检测等手段进行前瞻性研究。具有下列条件之一者为处于癌前状态；（１）ＥＢ病毒ＶＣＡ／ＩｇＡ≥１：８０；（２）ＥＢ病毒ＥＤＡｂ≥６０％；（３）病毒ＶＣＧ／ＩｇＡ、ＥＡ／ＩｇＡ、ＥＤＡｂ三项中任何单项持纽高滴度或滴度持续升高。经病理检查；鼻咽粘     

中国南方鼻咽鳞状细胞癌与EB病毒感染的关系

目的：探讨中国南方鼻咽癌高发区鼻咽鳞状细胞癌或称角化性鳞状细胞癌（Ｋｅｒａｔｉｎｉｚｉｎｇ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＫＳＣＣ）是否也如非角化性癌那样与ＥＢ病毒感染有密切的关系。方法：应用ＰＣＲ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ、原 位分子杂交和免疫组化法检测３８例鼻咽鳞状细胞癌细胞中有ＥＢ病毒ＤＮＡ及其产物ＥＢＮＡ－１,ＥＢＮＡ－２,ＥＢＥＲＳ,ＬＭＰ－１,ＺＥＢＲＡ,Ｅ     

人乳头瘤病毒与p53、Bcl-2蛋白在外阴上皮内瘤变中的表达

人乳头瘤病毒与ｐ５３、Ｂｃｌ２蛋白在外阴上皮内瘤变中的表达武昕高兴华王雅坤常文庆外阴上皮内瘤变（ＶＩＮ）被视为癌前病变，目前许多研究表明，其与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染有关。ＨＰＶ感染后是否会诱发ｐ５３和Ｂｃｌ２癌基因的变化，我们采用ＰＣＲ和免疫...     

中线T细胞淋巴瘤与EB病毒关系的研究

为了解ＥＢ病毒在中线Ｔ细胞淋巴瘤中的感染情况，作者对遵义地区４６例中线Ｔ细胞淋巴瘤进行ＥＢＶ检测，用聚合酶链反应检测ＥＢＶ特征性的ＤＮＡ序列（ＥＢＶＤＮＡ），用ＲＮＡ原位杂交法检测ＥＢＶ编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ１／２）。结果：ＥＢＶＤＮＡ阳性率为７６．１％（３５／４６）；ＥＢＥＲ１／２阳性率为６７．４％（３１／４６）。鼻腔、鼻咽、口咽Ｔ淋巴瘤ＥＢＥＲ１／２阳性率分别为８８．９％（１６／１８）、７１．４％（５／７）、４７．６％（１０／２１）。在多形细胞性淋巴瘤中，中多形和大多形细胞性ＥＢＥＲ１／２阳性率为８０．０％（１６／２０），小多形细胞性为７３．３％（１１／１５）。结果表明ＥＢＶ感染与中线Ｔ淋巴瘤关系密切，它在该肿瘤的发病中可能起重要作用，中线Ｔ淋巴瘤的ＥＢＶ感染率与解剖学部位有关，多形细胞性淋巴瘤ＥＢＶ感染率较高，特别是中多形和大多形细胞性     

The examination of an EBV-DNase gene fragment in the paraffin-embedded NPC, precancerous and from high-risk population nasopharyngeal tissues

Objective: To examine if the EB virus appears in nasopharyngeal epithelial cells in the course of tumorigenesis in nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods: Based on the annual investigation of Sihui County, a cancer-prevention base of Sun Yat-sen University of Medical Sciences(SUMS) and Tumor Hospital out-patient clinic, more than 450 paraffin-embedded NPC tissue specimens, precancerous lesions and precancerosis from a high-risk population were collected for detection of an EBV-DNase gene fragment by an optimized PCR method. Results: In 145 of the 149 (97.3%) cases with invasive NPC, and 2 of 4 cases within situ NPC, only 2 of the 155 subjects with precancerosis was DNase gene positive, and all 47 cases examined in the out-patient department of the Tumor Hospital with precancerous lesions in the nasopharynx were negative. Conclusion: The universal presence of an EBV-DNase gene in NPC tissues and the paucity of EBV-DNase gene in nonmalignant and precancerous lesions in the nasopharynx in a high-risk population imply that carcinogenesis of NPC occurs before the appearance of EBV in the nasopharynx. This work was supported by “The National Eighth Five-Year Plan Foundation” (No. 85-914-01-08).     

THE EXAMINATION OF AN EBV-DNASE GENE FRAGMENT IN THE PARAFFIN-EMBEDDED NPCI PRECANCEROUS AND FROM HIGHRISK POPULATION NASOPHARYNGEAL TISSUES

ThereisalongterminNPCtumorigenesis,includingthestagesofprecancerosisconditionsandprecancerouslesions.[l-3]InordertoinvestigateinwhichstageoftumorigenesisEpstein-Barsvirusbeginstoappearinthelesions,in1994morethan450specimensofnasopharyngealbiopsiesinclUdingNPCandnoncancerousnasopharyngeallesionspecimenswerecollectedfromtheout-patientclinicoftheTumorHospitalandthecancer-preventionbaseofCancerCenterunderSUMS,wheretheprospectiveten-yearprogram(1986--1995)aboutthenaturepopulationathighAnriskf…     

鼻咽癌癌变过程中EBERs表达状况的研究

本文采用重组质粒ｐＳＰ６５（带有ＥＢＥＲｓ的基因）体外转录合成的地高辛标记的单链反义ＲＮＡ探针，用原位杂交方法检测处于癌变不同阶段的鼻咽活检组织中ＥＢＥＲｓ的表达状况。ＥＢＥＲｓ检出率为：鼻咽癌（２３／２４），正常鼻咽组织，慢性炎症增生及单纯性增生和化生（０／３０），异型增生和化生（５／８），头颈部其它肿瘤（０／５），鼻咽癌颈淋巴结转移灶（１／１），进一步证明：（１）ＥＢＶ与ＮＰＣ密切相关；（２）     

HHV-6感染在鼻咽癌发病中的意义

目的：探计鼻咽癌组织中人疱疹病毒6型(HHV—6)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)发病中的意义。方法：PCR检测27例正常鼻咽组织、21例异型增生及42例鼻咽癌组织中HHV一6DNA和EB病毒(Epstein—barr vims，EBV)DNA存在状况，用免疫组化检测36例NPC组织中EBVLMPl蛋白的表达及40例NPC组织中p53基因的表达。结果：异型增生和NPC组织中HHV一6 DNA的阳性率分别为4．7％和26．2％，EBV DNA分别为4．6％和95．2％；正常鼻咽组织不存在HHV一6DNA，EBVDNA为25．9％。NPC组织中EBV—LMPl蛋白阳性率为47．2％，HHV一6阳性NPC中LMN表达阳性率(81．8％)显著高于HHV一6阴性者(32．0％)。HHV一6阳性与阴性的NPC中p53表达的阳性率无显著性差异，但HHV—6阳性的NPC中p53表达强度显著性增高。结论：NPC组织中存在HHV—6的感染，与EBV—LMP1蛋白表达上调呈正相关。提示在NPC的发生中HHV—6可能直接参与和(或)通过上调EBV—LMP1的表达而起作用，并可能参与鼻咽癌发病中p53过表达的调控。     

Epstein-Barr virus in nasopharyngeal carcinoma in Indian patients

Formalin fixed paraffin embedded tissue blocks from 40 cases of nasopharyngeal carcinoma were investigated for the presence of Epstein-Barr virus (EBV). Heminested polymerase chain reaction was employed to amplify U 2 region of EBV DNA coding for EBNA 2 gene. This is the first study of its kind carried out in India. EBV was detected in 28 out of 40 (70%) nasopharyngeal carcinomas. Type A EBV was identified in 20 cases (71.4%), type B in 7 cases (25%) and coinfection in one case (3.5%). Either type A, or type B EBV, was identified in 22 out of 23 cases (95.7%) of undifferentiated nasopharyngeal carcinoma and 6 out of 15 cases (40%) of non keratinized squamous carcinoma. The higher incidence of EBV in non keratinized squamous carcinoma of nasopharynx assumes importance in view of the contrary reports in other studies. 26 cases were from Western India, of which 15 (57.6%) showed presence of type A EBV and 2 (7.6%) type B EBV. From Eastern Indian particularly Assam, 4 our of 5 cases showed positivity for type B EBV and 1 a coinfection. Whereas, from Bihar 3 out of 4 cases showed presence of type A EBV. From Middle East (Arabs) type A EBV was detected in 3 out of 5 cases of nasopharyngeal carcinomas. Geographically, type A EBV was far more prevalent in Western India, while in Eastern India particularly Assam, all five vases were positive for type B EBV. Thus, a significant variation in the type of EBV infection was observed in nasopharyngeal carcinoma in different ethnic populations in India.     

Screening nasopharyngeal carcinoma by detection of the latent membrane protein 1 (LMP-1) gene with nasopharyngeal swabs

BACKGROUND: Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a common head and neck cancer in Taiwan. The goals of the current study were to investigate whether a nasopharyngeal swab technique could provide enough DNA for polymerase chain reaction (PCR) analysis of the Epstein-Barr virus (EBV)-derived latent membrane protein 1 (LMP-1) gene and to determine the feasibility and reliability of diagnosing NPC by detection of LMP-1 in the nasopharynx. METHODS: 320 adults underwent nasopharyngoscopy and nasopharyngeal swab to obtain cells for the LMP-1 PCR assay; some patients also underwent nasopharyngeal biopsy. RESULTS: An amount of DNA that was sufficient for PCR was extracted from 96.3% of the swab samples. By detecting LMP-1 in nasopharyngeal swabs, NPC was diagnosed with a false positive rate of 12.7% (7 of 55 patients), a false negative rate of 1.6% (4 of 253 patients), sensitivity of 87.3% (48 of 55 patients), specificity of 98.4% (249 of 253 patients), a positive predictive value of 92.3% (48 of 52 patients), and a negative predictive value of 97.3% (249/256 patients). NPC was diagnosed by nasopharyngoscopy with a false positive rate of 38% (30 of 79 patients), a false negative rate of 0.4% (1 of 241 patients), sensitivity of 62% (49 of 79 patients), specificity of 99.6% (240 of 241 patients), a positive predictive value of 98% (49 of 50 patients), and a negative predictive value of 88.9% (240 of 270 patients). Only 7 (0.2%) of 256 patients with a diagnosis other than NPC had LMP-1 detected in the nasopharyngeal space. CONCLUSIONS: Detecting EBV genomic LMP-1 by nasopharyngeal swab diagnosed NPC with 87.3% sensitivity and 98.4% specificity. EBV genomic DNA usually is not detected by PCR-based methods in the nasopharyngeal space. Its incidence is estimated to be as low as 0.2% among the general population. The nasopharyngeal swab coupled with PCR-based EBV LMP-1 detection could serve as part of a screening program for high-risk populations.     

鼻咽癌前期病变中的EB病毒感染

背景与目的：鼻咽癌中的浸润性癌细胞均感染了EB病毒（Epstein-Barr virus．EBV）。前期病变可见于早期鼻咽癌癌旁上皮。本研究旨在通过检测前期病变中的EB病毒,探讨EB病毒感染存鼻咽癌变过程中的作用,及其基因型在鼻咽癌变过程中发生的宿主内演变。方法：采用核酸原位杂交检测15例早期鼻咽癌活检组织中的EB病毒编码RNA（EBV—encoded RNA,EBER）。采用巢式PCR法检测前期病变和癌巢中的EB病毒类型和潜伏膜蛋白1（latent membrane protein 1,LMPI）EB病毒株。具有代表性的LMPI基因羧基末端PCR产物采用四色荧光终止序列技术进行DNA序列分析。结果：所有15例早期鼻咽癌中的绝大多数浸润性癌细胞均呈EBER阳性。在15例的期病变中．14例可检测到EBER阳性的异常上皮细胞和／或浸润性淋巴细胞。单个A型EB病毒可在9例癌巢（11例适用）及9例前期病变（10例通用）的DNA样本中检测到。EB病毒LMP1基因羧基末端在15例癌巢DNA样本中均可检测到,其中14例是30bp缺失型LMP1 EB病毒株,1例是野生型和30bp缺失型LMP1株的混合感染。在11例适合做EB病毒LMP1基因羧基末端扩增的前期病变的DNA样本中,5例呈野生型和30bp缺失型LMP1 EB病毒株的混合感染,4例是单个缺大型LMP1 EB病毒株感染,1例呈单个野生型LMP1 EB病毒株感染,1例呈阴性反应。野生型LMP1基因羧基末端的DNA序列与B95—8细胞的DNA序列完全一致;30bp缺大型LMP1基因羧基末端的DNA序列却其有30bp缺失（密码子：346～355）和4个错义点突变（密码子：334、335、338和366）。结论：鼻咽上皮细胞的EB病毒感染是癌变过程中侵袭前的事件;而在鼻咽癌变过程中,EB病毒基因型会产生宿主内的演变。     

鼻咽癌发生发展过程中EBER1表达的研究

目的：探讨ＥＢＶ与鼻咽癌发生发展的关系及其病理学意义。方法：应用原位杂交技术检测５０例鼻咽癌石蜡切片组织中ＥＢＥＲ１的表达及分布状况。结果：正常鼻咽粘膜上皮及其单纯性增生、鳞状化生上皮ＥＢＥＲ１表达均阴性,鼻咽癌组织中表达率为９８％（４９／５０）,且在转移灶中不丢失。鼻咽异型增生上皮亦可表达ＥＢＥＲ１阳性信号（１６／２０）,结论：ＥＢＶ与鼻咽癌关系密切,ＥＢＶ可能在鼻咽上皮的恶性转化过程中起重要作用,鼻咽上皮的异型性改变尤其是ＥＢＥＲ１阳性者可认为是癌前病变,随访监测可能有利于早期发现鼻咽癌。     

ESTABLISHMENT OF HIGH RISK POPULATION AND PRECANCEROUS LESION OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA(NPC)

ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴＯＦＨＩＧＨＲＩＳＫＰＯＰＵＬＡＴＩＯＮＡＮＤＰＲＥＣＡＮＣＥＲＯＵＳＬＥＳＩＯＮＯＦＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ（ＮＰＣ）ＨｕａｎｇＴｅｎｇｂｏ１黄腾波ＷａｎｇＨｕｉｍｉｎ２汪慧民ＬｉＪｉｎｇｌｉａｎ３李...     

抽吸性血痰患者的临床与实验室检查对鼻咽癌的鉴别诊断意义

目的:探讨抽吸性血痰患者 的临床与实验室检查结果对鼻咽癌 与非癌疾病的鉴别诊断意义。方法 将102例以抽吸性血痰为主诉的患 者,按最终诊断分为两组(鼻咽癌组 与非癌组),对其临床与实验室检查 资料进行回顾性分析、对比。结果 72例鼻咽癌患者的男女性别比为 2.79;中位年龄为43.6岁;血清E 病毒VCA/IgA抗体阳性率为 94.44%,阳性者中高滴度者占 70.59%;EA/IgA抗体阳性率 30.56%。30例非癌患者的性别比为 1.00;中位年龄39.24岁;血清E 病毒VCA/IgA抗体阳性率30.00% 阳性者中高滴度者占11.12%;没发 现EA/IgA抗体阳性者。结论:抽吸 性血痰患者的性别、年龄、病程和 EBV抗体水平等因素综合分析,有助 于鼻咽癌与非癌患者的鉴别诊断。