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1.
多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 深入研究视网膜母细胞瘤(RB)内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用SSCP分析、DNA序列测定以及多重PCR等技术,检测分析RB肿瘤内Rb、p53,p16,p15及p12等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约74%的RB肿瘤有Rb基因点突变,16%显示,p16基因缺失,但p53及p21基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 RB的发病和病变的进展主要是由于以Rb基因为核心的代谢 相似文献
2.
邓锡云 《癌变.畸变.突变》1994,6(5):72-74
尽管视网膜母细胞瘤基因产物(p110RB1)的精确功能仍不清楚,但是最近的资料表明它通过调节那些促使细胞进入或停留在静息状态或G0状态的基因或者那些促使细胞通过G1期的基因的转录而在细胞的增殖调控中发挥作用。现有资料很难对p110RB1在很多种组织中均有表达而视网膜母细胞瘤基因的突变只引起少数组织的肿瘤这一现象作出合理的解释。 相似文献
3.
目的:克隆有特异调控活性的人CD34基因5’端转录调控序列。方法:根据已知的CD34抗原基因5’-端启动子调控序列,自行设计2对引物,用巢式-PCR方法从染色体DNA中成功的克隆661bp长度的CD34抗原转录调控序列(CD34TRS,CD34TRS片段插入启动子报告质粒pEGFP-1,观察重组质粒pCD34EGFP在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA序列分析证实,克隆的CD34启动子序列与文献报道的顺序基本一致,能特异调探EGFP基因在造血细胞系细胞K562中表达。结论:所克隆的人CD34分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。 相似文献
4.
戚玲 《国外医学(肿瘤学分册)》1995,22(3):172-173
RB蛋白是细胞转录的调节因子,可抑制细胞分裂周期所必需的基因表达,RB蛋白由突变失活,可使细胞开始分裂,导致我限制地增殖和克隆选择。70%的视网膜母细胞瘤中在RB基因周围出现染色区即等痊等基因的缺失。 相似文献
5.
背景与目的:LCRG1基因的调控机制至今不清楚,本研究拟克隆LCRG1基因的转录起始区上游序列,寻找与其表达有关的调控序列。方法:利用生物信息学技术预测LCRG1基因5′端调控区域的启动子活性区域,采用PCR方法从人基因组DNA中扩增LCRG1基因5′端调控区域1.776kb(-1191bp~ 585bp)片段,并将其构建到荧光素酶报告基因pGL3basic载体中。与内参照质粒PhRL-SV40共转染COS7细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果:成功扩增LCRG1基因5′端调控区域1.776kb(-1191bp~ 585bp)片段,测序正确;pGL3-1776启动子活性大约为阳性对照组pGL3-control的0.16倍,为阴性组pGL3basic的35倍。结论:成功克隆LCRG1基因5′端调控区域1.776kb(-1191bp~ 585bp),该片段具有启动子活性。 相似文献
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背景与目的:LCRG1基因的调控机制至今不清楚, 本研究拟克隆LCRG1基因的转录起始区上游序列, 寻找与其表达有关的调控序列.方法:利用生物信息学技术预测LCRG1基因5′端调控区域的启动子活性区域,采用PCR方法从人基因组DNA中扩增LCRG1基因5′端调控区域1.776 kb(-1 191 bp~ 585 bp)片段,并将其构建到荧光素酶报告基因pGL3 basic载体中.与内参照质粒PhRL-SV40共转染COS7细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性.结果:成功扩增LCRG1基因5′端调控区域1.776 kb(-1 191 bp~ 585 bp)片段,测序正确; pGL3-1776启动子活性大约为阳性对照组pGL3-control的0.16倍,为阴性组pGL3 basic 的35倍.结论:成功克隆LCRG1基因5′端调控区域1.776kb(-1191 bp~ 585 bp),该片段具有启动子活性. 相似文献
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8.
食管癌Rb基因启动子甲基化状态和甲基苄基亚硝胺对其影响的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的分析Rb基因表达异常原因,研究Rb基因启动子甲基化状态和甲基苄基亚硝胺(NMBzA)对Rb基因启动子的影响。方法采用限制性核酸内切酶酶切和PCR扩增方法。结果33.3%的食管癌组织Rb基因启动子存在MspⅠ型高甲基化,40.0%的食管癌组织Rb基因启动子存在HpaⅡ型高甲基化。1例标本存在MspⅠ和HpaⅡ两种类型的高甲基化。恒河猴1次灌喂30mg/kgNMBzA后1,2,3天,其食管上皮Rb基因启动子HpaⅡ、MspⅠ类型甲基化逐渐增强;第5天其Rb基因启动子HpaⅡ、MspⅠ类型甲基化程度明显下降。结论食管癌组织中Rb基因表达异常可能与启动子高甲基化有关,NMBzA通过启动子甲基化对Rb基因调控产生影响。 相似文献
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目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础。方法以人胚肾293细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法克隆hTERT 5’端上游旁侧序列长约1.1kh的启动子片段,经DNA测序无误后克隆人荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTER Tp重组质粒,用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A549、SPC-A-1、LTEPa-2、NCI—H446、YTMLC、GLC-82、A2,以及人胚肺成纤维细胞株MRC5,转染48h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性。结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1kb。DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,其5’端和3’端分别位于hTERT基因转录起始位点上游1126bp和43bp,片段长度为1084bp。采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功。瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性,而在MRC-5细胞株中无转录活性。结论该实验克隆的1084bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性,在人胚肺成纤维细胞中无转录活性。hTERT启动子有可能作为调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗。 相似文献
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Characterization of the human N-ras promoter region 总被引:3,自引:0,他引:3
Overexpression of ras proto-oncogenes has been implicated in cancer development. We therefore initiated a study of the human N-ras promoter to determine the regions that control N-ras expression and their potential for interaction with DNA-binding proteins. N-ras CAT constructs were stably integrated into K562 cells by electric field-mediated gene transfer in order to determine functional regions within the human N-ras promoter. A significant proportion of promoter activity was found to lie within a 439 bp fragment comprising an untranslated exon (exon 1) with the adjacent 5' sequence and a small CpG island. A 109 bp [corrected] fragment at the 5' end of exon 1 was essential for promoter activity, while a 45 bp [corrected] deletion from within this region decreased promoter activity by two-thirds. Unlike the human H-ras and mouse K-ras promoters, the N-ras promoter did not exhibit bidirectional activity. DNAse footprinting of the 439 bp fragment revealed seven protected regions, many of which contain sequences homologous to known DNA-binding protein sites (MLTF/myc, CREB/ATF, AP-1, AP-2, myb and E4TF1). In contrast, four putative Sp1 sites did not footprint. Using purified MLTF and appropriate competitors in gel shift and DNAase footprinting assays, we demonstrated binding of MLTF to the MLTF consensus sequence within exon 1. 相似文献
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PC-1基因在肿瘤组织中的表达及其启动子区的克隆和活性分析 总被引:7,自引:0,他引:7
背景与目的:PC-1是在骨转移和雄激素非依赖的前列腺癌细胞株C4-2中高表达的新基因。本文拟研究PC-1基因在多种人肿瘤组织和正常组织中的表达水平,并对该基因的启动子区进行克隆及活性分析。方法:以PC-1基因特异性DNA序列为探针与10对肿瘤和正常组织的总RNA进行杂交;以C4-2细胞基因组DNA为模板,PCR扩增PC-1基因翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic上,将重组质粒瞬时转染C4-2细胞,荧光素酶定量分析检测启动子活性。结果:多肿瘤组织中PC-1基因的表达水平明显高于相应的正常组织中的表达;翻译起始位点上游340bp的片段没有启动子活性,而ATG前1099bp、1337bp,1579bp,1831bp和4939bp长度的片段都表现出启动子的功能活性。结论:PC-1基因在人前列腺癌以及多种肿瘤组织中被特异激活,表明该基因的功能可能和肿瘤的发生有关;研究的初步结果表明4939bp长度的启动子活性最强,以1831bp和4939bp之间可能含有转录增强子元件。 相似文献
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Genomic organization of the human retinoblastoma gene 总被引:7,自引:0,他引:7
A T'Ang K J Wu T Hashimoto W Y Liu R Takahashi X H Shi K Mihara F H Zhang Y Y Chen C Du 《Oncogene》1989,4(4):401-407