程序性死亡受体1和淋巴细胞激活基因3在食管胃交界部腺癌围手术期的表达及意义

 目的 探讨进展期食管胃交界部腺癌（AEGJ）患者术后外周血中程序性死亡受体1（PD-1）和淋巴细胞激活基因3（LAG-3）在T淋巴细胞中表达的变化，了解根治性手术创伤对机体细胞免疫功能的影响。方法 102例进展期食管胃交界部腺癌行开腹根治性R0切除+D2淋巴结清除术。应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞比例及PD-1、LAG-3在T细胞中的表达水平。结果 实验组和对照组比较，术前CD3⁺和CD3⁺ CD4⁺ T淋巴细胞显著降低（P<0.05），PD-1和LAG-3在CD4⁺、CD8⁺ T细胞的比例均显著增高（P<0.05）。CD4⁺ PD-1⁺ T细胞的比例在术后显著增加：术后第1天达到最大值，然后逐渐下降，但在术后第7天的比例仍显著高于术前。CD8⁺ PD-1⁺ T细胞的比例则在术后逐渐增加，到术后7天达高峰。术后CD4⁺LAG-3⁺ T细胞在外周静脉血淋巴细胞中的比例呈逐渐升高趋势，但仅术后7天显著高于术前（t=2.199, P=0.029）。术后CD8⁺LAG-3⁺ T细胞在外周静脉血淋巴细胞中的比例略有变化，但差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 食管胃交界部腺癌手术创伤可能是通过各种细胞因子导致CD4⁺PD-1⁺ T细胞比例改变，进而调节T淋巴细胞亚群比例，抑制细胞免疫能力。     

胃腺癌患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面抑制性分子PD-1的表达

目的:检测胃腺癌患者外周血中程序性死亡分子1（programmed death-1,PD-1）在CD4+T淋巴细胞上的表达水平,探讨其与胃腺癌的关系。方法:选取未经放、化疗或外科手术治疗的胃癌患者57例、疾病对照22例与健康对照20例,取新鲜抗凝血经流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测抑制性分子PD-1的百分比例;同时对胃腺癌患者进行TNM分期比较。结果:胃腺癌患者外周血中PD-1在CD4+T淋巴细胞上的表达水平（10.91±4.36）%比疾病对照（8.14±3.65）%和健康对照（7.37±3.06）%显著升高,Ⅲ-Ⅳ期胃腺癌患者的CD4+PD-1+T细胞的百分比例（11.9±3.85）%显著高于Ⅰ-Ⅱ期（9.08±3.13）%。结论:抑制性分子PD-1在胃腺癌外周血中CD4+T淋巴细胞表面表达增加,并随胃腺癌进展而升高,提示CD4+PD-1+T淋巴细胞与胃腺癌的发生发展相关。     

康莱特对晚期乳腺癌患者外周血CD4及PD-1阳性T细胞的影响

目的：检测康莱特（KLT）对晚期乳腺癌患者外周血CD4+及程序性死亡分子1（PD-1）阳性T细胞比例的影响,探讨KLT在乳腺癌患者中诱导抗肿瘤免疫的作用。方法选取接受过化疗或内分泌治疗后肿瘤进展的晚期乳腺癌患者30例,以KLT注射液处理;处理前后取外周血经流式细胞术检测治疗前后外周血中CD4+和CD4+PD-1+T淋巴细胞数量变化。并选取同期健康体检者20名为对照组,常规抽血检测。结果晚期乳腺癌患者治疗前外周血CD4+T细胞较健康人群低,而CD4+PD-1+T细胞的比例较健康人群高;经KLT治疗后的晚期乳腺癌患者外周血CD4+T细胞较治疗前显著增高,而CD4+PD-1+T细胞的比例较治疗前显著降低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 KLT有效降低晚期乳腺癌患者外周血CD4+PD-1+T淋巴细胞比例,减弱机体肿瘤免疫抑制状态。     

监测肾癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞在术后免疫治疗中的作用

目的:探讨肾癌患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞的监测在术后辅助免疫治疗中的作用。方法:将24例肾癌患者随机分为两组:A组,根治性肾切除术后行IFN-α辅助免疫治疗;B组,单纯行根治性肾切除术;C组,10例健康对照。分别在术前、术后1周以及术后3个月免疫治疗结束时采集外周血样本,流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+CD25、CD4+CD25high T淋巴细胞亚群含量,并计算各部分比值。结果:A、B组术前CD4+CD25+、CD4+CD25high T淋巴细胞亚群总体上增加,并且其含量随肿瘤分期的进展而增加(P<0.05),但部分患者并不高于健康对照组。免疫治疗后,肾癌患者CD4+CD25+T淋巴细胞总体略有上升,但术前较高的患者中,约2/3下降。结论:利用流式细胞仪监测肾癌患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞亚群可反映机体抗肿瘤免疫状态,有助于预测免疫治疗的预后,为肾癌尤其是早期肾癌术后辅助免疫治疗的选择提供参考。     

晚期肺腺癌患者一线化疗后T淋巴细胞亚群变化及临床意义

背景与目的机体的免疫功能异常与恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关。T淋巴细胞亚群是反映细胞免疫功能的重要指标之一。本实验研究晚期肺腺癌患者一线化疗后外周血T淋巴细胞数量的动态变化,探讨化疗后机体免疫状态变化的动态过程,为制定化疗联合免疫治疗方案提供实验依据。方法 49例经病理学确诊的IIIb期-IV期肺腺癌患者,与33例正常人比较外周血T淋巴细胞数量。然后患者随机进入2个实验组,分别采用培美曲塞、顺铂联合方案及多西他赛、顺铂联合方案化疗,应用流式细胞仪检测化疗前后不同时间点淋巴细胞的组成。结果肺癌患者的CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD25+等T细胞的数量与健康对照组比较存在差异,P值分别为0.012,0.034和0.006;化疗后第4天及第7-10天CD3+、CD3+CD4+比例升高,至第21天逐渐恢复至治疗前水平;2个化疗组比较CD3+细胞比例均升高,而培美曲塞组第4天CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+升高,CD3+CD8+及CD8+CD28-比例降低,差异均具有统计学意义。部分缓解患者较早期疾病进展患者的第4天及第7-10天CD3+CD4+细胞升高;第4天CD3+CD8+、CD8+CD28-细胞降低。结论晚期肺腺癌患者免疫功能处于抑制状态。化疗后第4天免疫功能得到一定程度恢复,至第21天恢复至治疗前水平。培美曲塞似乎对化疗后短期内免疫功能的改善有更明显的作用。化疗后免疫格局的改变可能与预后有关。     

外周血PD-1及相关免疫指标在鼻咽癌患者放化疗过程中的变化及其意义

目的：检测鼻咽癌患者接受放化疗过程中T细胞表面PD-1表达、T细胞亚群等免疫指标的水平,探讨不同治疗时间段内患者的免疫功能。方法：收集2015年4月至2015年9月在福建省肿瘤医院经病理确诊的30例鼻咽癌患者的血液标本,通过流式细胞术动态监测患者在不同治疗时段（治疗前、新辅助化疗后、放疗结束）的免疫指标水平,包括T细胞上PD-1及T细胞亚群、NK细胞、B细胞等。结果：与治疗前相比,新辅助化疗后外周血CD3+细胞、CD4+T细胞、CD8+CD28+T细胞及CD4+/CD8+比值显著升高,而CD19（+ 即B细胞）及CD3-CD16+CD56（+ 即NK细胞）细胞水平显著下降（均P<0.05）。放化疗结束后,外周血CD4+细胞、CD8+CD28+T细胞、CD4+/CD8+比值下调至较治疗前更低的水平（均P<0.05）,而NK细胞的比例则表现为上调（P<0.05）。与治疗前相比,放疗后T细胞PD-1的表达水平显著升高（P<0.05）。结论：鼻咽癌患者外周血T细胞亚群比例在新辅助化疗后上调,而放疗结束时明显下降,提示放疗结束时患者的免疫功能受到显著抑制;T细胞PD-1的表达水平在放疗结束时显著上调,意味着放化疗结束时可能正是使用PD-1抑制剂的良机,抗PD-1维持治疗有望产生更高效持久的抗肿瘤效应。     

乳腺癌患者手术前后外周血免疫细胞亚群FCM检测分析

目的：探讨乳腺癌患者手术前后免疫功能状态变化及临床意义。方法：手术前后3－6d抽取外周静脉血，流式细胞术（FCM）检测CD3^ 总T淋巴细胞、CD4^ 辅助T细胞、CD8^ 杀伤／抑制T细胞、CD4^ /CD8^ 、CD56^ NK细胞、CD19^ 总B淋巴细胞、CD25^ IL-2受体细胞比例。结果：乳腺癌术后外周静脉血CD3^ 总T淋巴细胞、CD4^ 辅助T细胞、CD25^ IL-2受体细胞比例较术前显著增高，CD56^ NK细胞比例显著下降，CD8^ 杀伤／抑制T细胞、CD4^ /CD8^ 比值、CD19^ 总B淋巴细胞变化差异无显著性。结论：乳腺癌术后机体处于正性免调节状态，表现在以T淋巴细胞介导的细胞免疫反应为主，其发生机制及临床意义值得探讨。     

宫颈鳞癌患者外周血和肿瘤组织中PD-1/PD-L1及相关免疫细胞的变化特点及其临床意义

目的： 探讨PD-1/PD-L1通路及相关免疫细胞在宫颈鳞癌（cervical squamous cell cancer,CSCC）发生、发展中的变化特点及其临床意义。 方法： 收集2018年12月至2020年9月在福州市第一医院接受手术的CSCC患者和健康体检人员的癌组织/宫颈组织和外周血样本,分为健康对照组、宫颈上皮内癌变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅱ级组、CIN Ⅲ级组和CSCC组,代表 CSCC 发生、发展进程各阶段,每组 50 例。ELISA 法检测各组人员的外周血血浆中 PD-1、PD-L1、叉头状转录因子 P3（FOXP3）的表达水平,FCM法检测各组人员外周血PD-1 + CD4 + CD25 + CD127 -/low 细胞的数量,应用多色荧光组织染色法检测肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）在CSCC组织中的分布特点。 结果： 随着模拟的CSCC发生和发展,外周血中PD-1、PD-L1和FOXP3 的表达呈上升趋势,术后则呈下降趋势。在CSCC患者抗凝全血中,CD4 + 、CD4 + CD25 + CD127 -/low 以及PD-1 + CD4 + CD25 + CD127 -/low 细胞占淋巴细胞的比例增加。在CSCC组织中可见大量CD4 + 、CD8 + 和FOXP3 + 细胞浸润,其中CD4 + 和FOXP3 + 细胞主要围绕肿瘤细胞聚集区分布、CD8 + 和PD-L1 + 细胞则呈广泛弥漫性分布。 结论： PD-1、PD-L1、FOXP3和适应性调节性T细胞是促进CSCC发生发展的重要因素,其可作为ESCC免疫治疗的靶点和临床预后的潜在标志物。     

rhG-CSF对正常供者淋巴细胞亚群及其活化的影响

 目的　研究人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对供者淋巴细胞亚群及其表面活化标志的影响。方法　应用流式细胞术检测 2 2例异基因造血干细胞供者rhG CSF动员前、中、后外周淋巴细胞亚群的比例及T淋巴细胞活化指标的变化。结果　rhG CSF动员第 4天 ,淋巴细胞数、B淋巴细胞、CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞绝对值均明显升高 ;CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞的比例及CD4 /CD8值动员前、中、后无明显变化。除CD4 + CD2 5 + 、CD4 + CD4 5RO+ 表达动员后降低外 (且于动员停止后第 7天恢复至动员前水平 ) ,其余活化标志的表达无明显变化。结论　rhG CSF可暂时性升高正常供者的淋巴细胞数及降低T淋巴细胞活化水平 ,但于停止动员后 1周恢复至动员前水平     

麻醉与手术对乳腺癌患者围手术期免疫功能的影响

[目的]探讨喉罩通气全凭静脉麻醉下乳腺癌改良根治术对患者围手术期T淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞（NK细胞）的影响。[方法]随机选择Ⅱ～Ⅲ期术前化疗或非化疗乳腺癌患者各25例．A组为术前未化疗组,B组为术前化疗组：分别于麻醉前、手术结束时、术后第1d及术后第3d用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、NK细胞值。[结果]与麻醉前相比,两组患者术后第1d、第3d的CD8^＋和NK细胞下降明显（P〈0．05）．而CD4^＋／CD8^＋显著性升高（P〈0．05）;但两组间术后第1d、第3dCD3^＋、CD8^＋、NK细胞以及CD4^＋／CD8^＋比较差异无显著性（P〉0．05）。[结论]喉罩通气全凭静脉麻醉下乳腺癌改良根治术对术前化疗或非化疗患者的免疫系缔部有一定的抑制作用．而这种抑制作用与患者术前是否讲行辅助化疗无关．     

外周T细胞淋巴瘤患者中PD-1的表达对CD45RA+、CD45RO+T细胞的影响

目的:探讨外周T细胞淋巴瘤(PTCL)患者淋巴瘤组织中PD-1的表达与外周血中初始和记忆T细胞水平的关系.方法:20例PTCL患者采用免疫组化法检测淋巴瘤组织中PD-1的表达,采用流式细胞术检测CHOP方案化疗前后外周血中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T细胞的比例,分析PD-1的表达与T细胞亚群的关系.结果:PD-1、PD-L1蛋白在PTCL患者中表达升高,PD-1阳性患者疗效较差.PD-1阳性患者中CD4+T细胞、CD8+T细胞明显低于PD-1阴性患者;PD-1阴性组患者CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+、 CD8+CD45RO+T细胞明显高于PD-1阳性患者,差异有统计学意义.结论:PTCL患者中存在PD-1/PD-L1蛋白的表达异常,PD-1阳性患者存在更明显的T细胞免疫功能缺陷.     

联合检测外周血T淋巴细胞AgNOR活性及T淋巴细胞亚群评估食管癌围手术期细胞免疫变化规律

背景与目的食管癌患者存在着细胞免疫功能抑制,测定T淋巴细胞核仁区的AgNOR活性及T淋巴细胞亚群,可以了解T淋巴细胞的免疫活性状态,对研究肿瘤的生物学行为具有重要意义。本研究旨在通过动态观察食管癌患者围手术期外周血T淋巴细胞AgNOR的活性及T淋巴细胞亚群的变化规律,研究细胞免疫机能状态及手术对食管癌患者细胞免疫功能的影响。方法分别抽取75例健康人外周血和70例食管癌患者术前、术后第3天、术后第9天的外周血,利用KL型肿瘤免疫图像分析系统检测AgNOR活性,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群。结果食管癌患者术前AgNOR活性[(5.5±0.8)%]明显低于健康人[(7.1±0.8)%](P<0.00),CD3 、CD3 CD4 无明显变化(P>0.05),CD4 CD25 、CD4 /CD8 明显上升(P<0.05),CD3 CD8 、CD8 CD25 亚群明显下降(P<0.00)。术后第3天外周血T淋巴细胞AgNOR、CD3 、CD3 CD4 与CD4 /CD8 最低,术后第9天最高;CD3 CD8 亚群、CD4 CD25 亚群、CD8 CD25 亚群则从第3天开始逐渐恢复,术后第9天最高。食管癌患者术后第9天CD3 、CD3 CD4 与健康人相比无显著性差异(P>0.05);外周血T淋巴细胞AgNOR、CD3 CD8 与CD8 CD25 仍未恢复到健康人水平(P<0.05);CD4 CD25 仍明显高于健康人(P<0.00)。结论手术创伤引起食管癌患者暂时性细胞免疫抑制,但从第3天开始可观察到细胞免疫功能恢复,术后第9天继续恢复,但仍未恢复到正常水平。     

Effect of blood transfusion during radiotherapy on the immune function of patients with cancer of the uterine cervix: role of interleukin-10

: To analyze prospectively the effects of blood transfusion administered during radiotherapy (RT) on the immune function of patients with locally advanced cervical cancer.

: In a total of 15 patients, 7 transfused and 8 untransfused, lymphocyte populations, including CD3+, CD4+, and CD8+ T-cell subsets, B cells (CD19+), and natural killer (NK) cells (CD56+, CD16+, CD3−) were studied before (i.e., time 0), during (i.e., times 1 and 2), and after (i.e., time 3) therapy. Expression of the early (CD25) and late (HLA-DR) activation markers on CD3+ T cells, the intracellular levels of perforin in CD8+ and CD56+ cells, and interferon (IFN)-γ, interleukin (IL)-2, and IL-4 in CD4+ and CD8+ T cells were also measured. NK cell cytotoxicity against the NK-sensitive target K-562 cells and CD8+ T-cell-directed cytotoxicity against OKT3 hybridoma cells were also assessed. Finally, the plasma levels of the immunoregulatory cytokine IL-10 were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay.

: The mean absolute number of all lymphocyte subsets compared with pretreatment levels decreased significantly during RT of both transfused and untransfused patients (p >0.001), with no detectable differences between the two groups in terms of total lymphocytes or relative numbers of CD3+ and CD4+ T cells, CD56+ NK cells, or CD19+ B cells. In contrast, concomitant with an inversion of the CD4/CD8 ratio, a significant increase in the number of CD8+ T cells at time 2 and CD3+ T cells, CD8+ T cells, and NK cells at time 3 was found in the transfused patients compared with the untransfused group. The percentages of CD25+/CD3+ T cells and HLA-DR+/CD3+ T cells increased during RT of the untransfused patients, but CD3+ T cells showed decreased CD25 expression and increased HLA-DR expression in the transfused group. An increase of CD8+ IFN-γ+ T cells with a concomitant decrease in CD8+ IL-2+ T cells was found in the transfused vs. untransfused group, and no differences were noted in the percentage of CD4+ IFN-γ+ T cells and CD4+ IL-2+ T cells. The proportion of perforin-positive CD8+ and CD56+ cells was higher in the transfused group than in the untransfused group. However, CD56+ cells and CD8+ T cells from the transfused patients showed markedly diminished cytotoxic function. Finally, IL-10 was detected only in the plasma of the transfused patients.

: Blood transfusion during primary RT for cervical cancer profoundly alters the magnitude and characteristics of radiation-induced immunosuppression. Elevated serum IL-10 in transfused patients may play a role in the disregulation of lymphocyte function, in particular, the depression of NK- and T-cell cytotoxicity. Investigation of alternatives to blood transfusion during RT that do not diminish host immunity is warranted.     

食管鳞状细胞癌患者血清PD-L1含量与T淋巴细胞免疫功能的相关性探讨

目的:探究食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）患者血清程序性死亡配体-1（programmed death-ligand 1,PD-L1）含量与T淋巴细胞免疫功能的相关性。方法:收集2021年08月至2022年01月我院初诊的62例ESCC患者作为ESCC组,对照组29例来自相对健康人群,采用两独立样本Wilcoxon秩和检验比较两组血清PD-L1和T淋巴细胞亚群水平的差异及这些指标在ESCC组不同临床分期中的差异,绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）评价在临床分期中有差异的指标对ESCC临床进展的预测价值;采用χ2检验分析血清PD-L1与ESCC患者临床病理特征之间的相关性,两独立样本Wilcoxon秩和检验比较血清PD-L1高值组与低值组T淋巴细胞亚群水平的差异。结果:ESCC组PD-L1水平显著高于对照组,且Ⅲ-Ⅳ期的ESCC患者血清PD-L1含量明显高于Ⅰ-Ⅱ期（P<0.05）。ESCC组CD4+PD-1+T细胞百分比显著高于对照组（P<0.05）;而CD3+T细胞绝对值计数、CD4+T细胞绝对值计数、CD4+CD28+T细胞绝对值计数、CD8+CD28+T细胞百分比和绝对值计数明显低于对照组（P<0.05）。ESCC组Ⅲ-Ⅳ期CD4+PD-1+T细胞百分比明显高于Ⅰ-Ⅱ期;而CD4+CD28+T细胞百分比和绝对值计数明显低于Ⅰ-Ⅱ期（P<0.05）。血清PD-L1的含量与ESCC患者的临床进展密切相关,且具有较高预测价值（P<0.05）。PD-L1高值组CD4+PD-1+T细胞百分比明显高于低值组（P<0.05）,而CD4+CD28+T细胞百分比和绝对值计数、CD8+CD28+T细胞百分比和绝对值计数明显低于低值组（P<0.05）。结论:ESCC患者血清PD-L1水平与T淋巴细胞表面抗原PD-1和CD28表达水平密切相关,这可能是其抑制T淋巴细胞免疫功能、促进ESCC细胞免疫逃逸的重要因素之一。     

Differential depression of lymphocyte subsets according to stage in stomach cancer

Lymphocyte surface markers were determined in the peripheral blood lymphocytes (PBL) in 31 stomach cancer patients (15 males and 16 females) and 47 controls (20 males and 27 females) using an indirect immunofluorescence technique. The monoclonal antibodies used were Leu 2a (CD8, suppressor/cytotoxic T cells), Leu 3a (CD4, inducer/helper T cells), Leu 4 (CD3, pan T reagent), Leu 11 (CD16, natural killer cells) and Leu 12 (CD19, B cells). The numbers of PBL, CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ and CD19+ cells significantly decreased and the CD4:CD8 value increased in patients with stomach cancer compared to those in healthy volunteers. In stage I, PBL, none of the PBL subsets nor the CD4:CD8 value were significantly different from those of the controls. In stage II, the numbers of PBL, CD3+, CD4+ and CD8+ cells decreased. In stage III, the CD19+ cells decreased in addition to the decreased subsets in stage II. In stage IV, PBL and all subsets measured decreased. The CD4:CD8 value showed significant increases in stages II, III and IV, because the CD8+ cells decreased to a greater extent than did the CD4+ cells. Changes in the subsets were analyzed with regard to age, sex, performance status and smoking history, no significant relation being observed between these factors and lymphocyte subsets. From the present study, we have demonstrated that lymphocyte subsets were differentially depressed in the order of T cells, B cells and natural killer cells, with progression of the stage of disease.     

Elevated circulating CD19+ lymphocytes predict survival advantage in patients with gastric cancer

Background: Circulating lymphocyte subsets reflect the immunological status and might therefore be aprognostic indicator in cancer patients. Our aim was to evaluate the clinical significance of circulating lymphocytesubset in gastric cancer (GC) cases. Methods: A retrospective study on a prevalent cohort of 846 GC patientshospitalized at Hospital from Aug 2006 to Jul 2010 was conducted. We calculated the patient’s disease freesurvival (DFS) after first hospital admission, and hazard ratios (HR) from the Cox proportional hazards model.Results: Our findings indicated a significantly decreased percentage of CD3+, and CD8+ cells, a significantlyincreased proportion of CD4+, CD19+, CD44+, CD25+, NK cells, and an increased CD4+/CD8+ ratio in GC patientsas compared with healthy controls (all P < 0.05). Alteration of lymphocyte subsets was positively correlated withsex, age, smoking, tumor stage and distant metastasis of GC patients (all P<0.05). Follow-up analysis indicatedsignificantly higher DFS for patients with high circulating CD19+ lymphocytes compared to those with lowCD19+ lymphocytes (P=0.037), with CD19+ showing an important cutoff of 7.91±2.98% Conclusion: Circulatinglymphocyte subsets in GC patients are significantly changed, and elevated CD19+ cells may predict a favorablesurvival.