miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

miR-601靶向调控MMP-17抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭CSCD

目的探讨miR-601对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法RT-qPCR检测NSCLC组织中miR-601的表达,并分析表达水平与癌细胞侵袭和淋巴结转移的相关性。将miR-601 mimics瞬时转染A549细胞或H1299细胞,Transwell实验检测其对两种细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学预测miR-601相关靶基因,采用双荧光素酶实验进行靶基因验证。检测miR-601的靶基因对A549细胞或H1299细胞迁移及侵袭能力的影响。结果miR-601在NSCLC组织中表达明显降低(P<0.001),且降低水平与癌细胞的浸润(P<0.007)及淋巴结转移(P<0.011)密切相关。瞬时转染miR-601 mimics能明显抑制A549细胞或H1299细胞的迁移及侵袭能力。生物信息学及荧光素酶报告实验提示MMP-17是miR-601的靶基因。MMP-17能促进A549细胞或H1299细胞的迁移和侵袭,但其促进迁移侵袭的能力可被miR-601抑制。结论miR-601通过靶向调控MMP-17而抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭。     

miR-30a通过靶向调控ZEB2抑制非小细胞肺癌的迁移与侵袭

目的:探讨miR-30a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达情况及miR-30a在肺癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及其机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-30a在不同NSCLC细胞株中的表达情况;采用脂质体2000转染miR-30a mimics和E盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2） siRNA;通过qRT-PCR检验miR-30a mimics和ZEB2 siRNA的转染效率及转染后ZEB2 mRNA的表达水平变化;Western blot检测转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后ZEB2蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-30a和ZEB2的相互作用机制;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-30a和干扰ZEB2对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:实验结果显示,与正常人支气管上皮细胞相比,在不同NSCLC细胞株中miR-30a的表达呈不同程度下调;NSCLC细胞转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后均获得满意的转染效果:miR-30a mimics和ZEB2 siRNA明显降低了NSCLC细胞中ZEB2的mRNA和蛋白的表达水平,组间差异具有统计学意义。双荧光素酶报告实验验证miR-30a对ZEB2 3' UTR具有直接调控作用。细胞迁移实验和侵袭实验结果显示,与Blank组和NC组相比,miR-30a过表达组和ZEB2基因沉默组的A549细胞迁移和侵袭能力均明显降低,说明miR-30a mimics和ZEB2 siRNA均对A549细胞细胞迁移和侵袭有抑制作用。结论:上调miR-30a的表达水平可以负调控ZEB2转录后表达水平,通过抑制上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的进程来抑制肺癌细胞的转移和侵袭。     

miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响北大核心

目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors,并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9,从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

miR-126通过靶向调控Crk基因抑制非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭

目的:探究miR-126通过靶向调控Crk基因来调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及侵袭。方法:应用实时定量PCR检测NSCLC组织及其癌旁肺组织中miR-126和Crk mRNA的表达。应用荧光素酶报告基因系统验证Crk是miR-126的靶基因。在NSCLC细胞转染miR-126 mimics或特异沉默Crk的siRNA后,用MTT法检测NSCLC细胞增殖能力,Transwell测定NSCLC细胞侵袭能力。结果:与癌旁肺组织相比,miR-126在肺癌组织中表达显著降低（P＜0.05）,Crk mRNA在肺癌组织中表达明显升高（P＜0.05）。miR-126直接作用于Crk-3' UTR的预计靶位点;MTT细胞增殖实验及Transwell侵袭实验表明,miR-126过表达或Crk基因沉默均能减弱肺癌细胞增殖及侵袭能力（P＜0.05）。结论:miR-126通过靶向调控Crk来抑制NSCLC细胞的增殖及侵袭。     

miR-145通过下调OCT4基因抑制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌"保护性"miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平及CD133百分比。双荧光素酶报告基因检测证明miR-145可作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位。结论 miR-145可通过下调OCT4基因表达抑制A549肺腺癌细胞株中干细胞的增殖,是一种潜在的肺癌"保护性"miRNA。     

miR-374 a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况.采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975...     

miR-218靶向SFMBT1影响肺癌细胞凋亡的研究

目的:探讨miR-218对肺癌细胞凋亡的影响。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、H322和支气管黏膜上皮细胞16HBE中miR-218表达水平。以A549细胞为研究对象,预测miR-218的靶基因可能为含有4个mbt的Scm相关蛋白（SFMBT1）,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因,细胞转染miR-218模拟物、模拟物阴性序列、SFMBT1小干扰RNA、小干扰RNA阴性序列,以不处理的细胞为对照,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中miR-218和SFMBT1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:miR-218在肺癌细胞中表达水平明显低于支气管黏膜上皮细胞16HBE,并且A549细胞中miR-218水平最低。miR-218模拟物和野生型的SFMBT1共转染后细胞荧光素酶活性降低。转染miR-218模拟物后细胞中miR-218水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低。转染SFMBT1小干扰RNA后细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡率升高。结论:miR-218可以负调控靶基因SFMBT1的表达促进肺癌细胞凋亡。     

miR-572 通过靶向调控 WWOX 影响肺癌细胞恶性生物学行为

目的 探讨miR-572靶向氧化还原酶的WW结构域（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）调控肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 选取50例2016年3月—2018年5月十堰市太和医院手术切除肺癌组织及其相应的癌旁组织。利用脂质体转染技术将miR-572 inhibitor和miR-572 mimics转染至肺癌A549和L9981细胞;采用qRT-PCR检测miR-572和WWOX的mRNA表达水平,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。通过生物信息学软件Targetscan分析miR-572的靶基因,荧光素酶报告基因实验检验miR-572和WWOX的靶向关系。结果 miR-572在肺癌组织和细胞中高表达（均P<0.05）。下调miR-572后,肺癌细胞A549、L9981中miR-572表达水平均降低（均P<0.05）,细胞增殖能力也降低（均P<0.05）,细胞G0/G1期比例和细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;而上调miR-572后,肺癌A549、L9981细胞增殖能力升高（均P<0.05）,细胞G0/G1期比例和细胞凋亡率则降低（均P<0.05）。WWOX在肺癌组织和细胞中低表达（均P<0.05）,且在肺癌组织中WWOX与miR-572表达呈负相关（r=-0.669,P<0.001）。下调WWOX可逆转下调miR-572对肺癌细胞的增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。 结论 下调miR-572可抑制肺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向负调控WWOX有关。