Notch信号通路在骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中的作用

骨髓间充质干细胞(MSCs)具有多向分化潜能,可以通过细胞移植治疗多种疾病,并且在一定的条件下可以通过诱导分化为心肌细胞(CMs),为治疗心血管疾病带来了希望.在细胞的增殖和分化中,Notch 信号通路起到了非常重要的作用,本文对在 MSCs 分化为 CMs 过程中 Notch 信号通路的具体作用做一综述.     

骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究进展

无论是在体外实验还是在体内实验,骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)都可以向中枢神经系统(CNS)神经细胞分化,但争议颇多。因为功能性神经元不仅要具有典型神经元的形态、特异性标记,还要求具有可兴奋性、能和其他神经元形成突触联系、产生突触电位等,所以对骨髓间充质干细胞是否能诱导出真正具有功能的神经元存在很大分歧。在此对BMSCs向神经细胞诱导分化研究的现状、存在的问题及发展前景给予综述。     

间充质干细胞对恶性肿瘤影响的研究进展

<正>间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种起源于中胚层发育早期的具有全能干细胞特点的造血干细胞以外的另一类干细胞,因具有自我更新、多向分化以及免疫调节等功能,临床已被广泛应用于脊髓损伤、糖尿病足和一些自身免疫性疾病的治疗。     

间充质干细胞治疗老年衰弱研究进展

在全球老龄化加速的当下,老年衰弱是老年人群中亟待解决的公共卫生问题,迫切需要找到有效且有针对性的干预手段.近年来间充质干细胞(MSCs)在再生医学领域的巨大进展及应用,以及MSCs的功能与老年衰弱的病理生理机制的契合,为老年衰弱的干预带来了机遇.本文对MSCs治疗老年衰弱的研究进展进行综述,旨在为衰弱的干预提供参考.     

诱导间充质干细胞向心肌细胞分化方法及分化机制进展

干细胞在体外特定条件下,可特异的向某种组织类型细胞进行分化,其中包括向心肌细胞分化。目前,胚胎干细胞(em-bryonic stem cells,ESCs)虽然具有这方面的功能,且其分化效率较一般成体细胞高,但是由于伦理问题限制了其在临床的应用。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不仅取材方便,且没有伦理争议,是最具希望的再生医学种子细胞,引起了人们的极大关注。目前对于体外诱导不同来源的间充质干细胞向心肌细胞分化方法的实验研究很多,主要包括化学试剂诱导和模拟体内微环境诱导两大类。该文就MSCs向心肌分化的体外诱导方法和分化机制的研究进展作一综述。     

人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的：研究人骨髓间充质干细胞（hMSCs）在体外分离纯化、培养扩增和向心肌样细胞诱导分化的条件。方法：体外分离培养hMSCs,纯化传代至第三、四代,加入不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）进行不同时间的孵育,用MTT测定细胞的生长活性,确定最佳的浓度和孵育时间。4周后行电镜,免疫组化染色及逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测。结果：诱导后细胞呈心肌样细胞改变,电镜下可见肌丝形成,免疫组化显示部分细胞胞浆α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）、肌钙蛋白-T（troponin-T）阳性。RT-PCR检测显示心肌特异转录因子GATA-4、Nkx2.5有表达。结论：hMSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在5-Aza的诱导下可向心肌样细胞分化,可成为心肌损伤移植治疗的理想细胞材料。     

人脐带间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法采用直接贴壁法从脐带中分离UC-MSCs,取第3代细胞作流式细胞术鉴定其表型。用β-巯基乙醇、尼克酰胺和碱性成纤维生长因子(bFGF)诱导UC-MSCs(诱导组),对照组在未添加任何诱导试剂的培养基中培养。倒置显微镜下观察UC-MSCs的形态学变化;取诱导后3周的细胞进行双硫腙染色,采用化学发光免疫法测定培养上清液中胰岛素水平,RT-PCR检测胰岛细胞相关基因的表达。结果细胞高表达UC-MSCs相关抗原CD90、CD105和CD13,而低表达造血细胞相关抗原CD34、CD45和HLA-DR。UC-MSCs经诱导后细胞形态由梭形变为圆形或椭圆形,双硫腙染色为阳性。诱导组胰岛素水平明显高于对照组[(0.305±0.065)μU/ml vs.(0.085±0.024)μU/ml](P<0.01)。RT-PCR显示诱导后细胞表达胰岛细胞相关基因。结论 UC-MSCs具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能。     

间充质干细胞治疗哮喘的研究进展

哮喘作为一种慢性炎症疾患,其发病率在世界范围内仍呈上升趋势。目前研究表明哮喘是多个免疫细胞参与的气道炎症与高反应疾病,其中CD4+T淋巴细胞在调控气道炎症中发挥主要作用。目前以糖皮质激素为首的抗炎药物联合长效β2受体激动剂为主的症状缓解药物作为一线治疗方案,并不能达到哮喘的理想控制效果及逆转哮喘病理改变,因此有必要寻求哮喘防治新方法。间充质干细胞是一类具有高度可塑性的细胞群体,除具有多向分化潜能外,还具有免疫调节作用。目前研究表明间充质干细胞可定植到肺组织并分化为肺上皮细胞,通过免疫调节作用,改善Th1/Th2失衡,上调Treg细胞数量,调控Th17比例等机制缓解哮喘病情。目前间充质干细胞治疗哮喘的大多数实验尚停留在动物实验水平,临床应用较少,间充质干细胞移植在临床中的应用尚面临巨大的挑战。     

自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

目的 探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性.方法 采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞.从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定.结果 自体脑脊液诱导后的间充质干细胞呈现神经干细胞改变,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征结构和生物学特性.结论 白体脑脊液能定向诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化.     

间充质干细胞治疗骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症是临床常见病,易导致骨折等并发症。好发人群为50岁以上的中老年,尤其以绝经后妇女居多。其特征为骨量不足以及骨骼强度降低,导致骨组织脆性增高。现有的药物治疗均无法避免诱发不良反应及并发症,所以开发新的治疗方法意义重大。近年来,间充质干细胞疗法由于其较强的自我增殖及多向分化潜力、免疫调节能力、自分泌和旁分泌功能以及低免疫原性等优点而备受关注。本文综述多种不同来源间充质干细胞治疗骨质疏松症的研究进展。     

The effects of 17 Beta-Estradiol primed mesenchymal stem cells on the biology of co-cultured neutrophil

ObjectivesMesenchymal stem cells (MSCs) can influence immune effector cells. It is proved that MSCs respond to various Toll-like receptor (TLR) ligands, which could ultimately result in changes in their immunomodulatory effects. Neutrophils play an essential role in the first line defense system and their function can be regulated by MSCs. Estrogen is a female hormone that contributes to sex differences in several immune-related diseases. With regard to the stated facts, this research aims to elucidate the effects of estrogen treatment on the ability of TLR4-primed MSCs to regulate neutrophil functions.MethodsFollowing isolation and characterization, MSCs were stimulated with LPS as a TLR4 ligand and subsequently incubated with different concentrations (0, 10, 20 and 40 nM) of estrogen for 48 hrs. Then, MSCs were co-cultured with neutrophils to investigate the vitality and function of the co-cultured neutrophils.ResultsOur results indicated that TLR4-primed MSCs could decrease the viability and neutral red uptake potential of co-cultured neutrophils. Furthermore, neutrophils co-cultured with TLR4-primed MSCs exhibited a decrease in the respiratory burst intensity after being challenged with opsonized yeast. Interestingly, treating TLR4-primed MSCs with estrogen reversed the observed alterations in neutrophil functions.ConclusionIt appears that estrogen can alter the interaction between MSCs and neutrophils.     

间充质干细胞临床应用的安全性问题

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员,起源于中胚层和外胚层,因其具有易分离、趋化性、免疫调节作用、多向分化潜能等生物学特性而日益受到人们的关注,并成为细胞疗法中治疗各种难治性疾病的热门种子细胞,然而细胞疗法所涉及的潜在风险还不确定。本文就间充质干细胞应用所涉及的安全性问题作综述,并强调建立规范化的应用标准更有利于细胞产品在临床上的应用和推广,给广大患者带来真正的福音。     

人脂肪间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞的实验研究

目的体外定向诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞的分化。方法人脂肪间充质干细胞分3个阶段进行诱导,第一阶段培养在含适当浓度的2-巯基乙醇的高糖-达氏修正依氏培养基(HG-DMEM)培养2d,第二阶段在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的HG-DMEM培养基中诱导6d,第三阶段在含适当浓度的2-巯基乙醇和B27和尼克酰胺高糖无血清DMEM培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化。对照组用HG-DMEM培养。在相差显微镜下观察细胞的形态;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导前后nestin、胰岛素基因的表达;用免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素的表达;诱导第三阶段进行双硫腙染色鉴定胰岛B样细胞团。结果未经诱导的脂肪间充质干细胞呈长梭形贴壁生长,诱导后细胞逐渐变圆,并聚集成团。诱导8d细胞nestin基因呈阳性表达,诱导14d细胞nestin基因表达量下降,胰岛素基因表达呈阳性。诱导后的细胞团双硫腙染色呈棕红色。结论2-巯基乙醇、EGF、bFGF及尼克酰胺等可在体外诱导人脂肪间充质干细胞分化为具有分泌胰岛素功能的胰岛样细胞。     

体外培养成人脂肪间充质干细胞生物学特性及诱导分化为心肌细胞的研究

目的通过分离、培养脂肪间充质干细胞观察其生物学特性及诱导分化为心肌细胞,为心肌再生提供良好的干细胞来源。方法胶原酶消化分离成人脂肪来源的间充质干细胞并进行传代培养,倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪测定CD29、CD31、CD34、CD44及细胞周期,MTT绘制细胞生长曲线。用第3代细胞进行诱导分化,观察不同浓度5-氮杂胞苷(5-Aza,1,3,5,10,15,20μmol/L)及不同作用时间(12,24,48,72h)诱导其向心肌细胞分化的差别,采用最佳浓度10μmol/L,最佳作用时间24h进行实验,分别在第7,14,21,28天用免疫细胞荧光染色鉴定心肌细胞α-横纹肌、肌球蛋白重链(MHC)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达,第14天反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌发育相关基因NKX2.5的表达。结果倒置相差显微镜下观察原代细胞,可见细胞呈梭型、核圆形或椭圆形,偶见双核。传代细胞核原代细胞形态相似,排列有了一定的方向性。流式细胞仪检测结果显示,第1、3、5代细胞均高表达CD29和CD44;而CD31始终表达很弱,可认为呈阴性表达;CD34在第1、3代细胞弱表达,在第5代细胞表达逐渐减弱为阴性。细胞生长曲线显示前3d处于细胞潜伏状态,第4天进入对数生长期,第10天达到顶峰。细胞周期检测结果显示G1期细胞为85.93%,S期为7.24%,G2期为6.83%。10μmol/L5-Aza诱导后7d进行免疫细胞荧光染色,未见有α-横纹肌、MHC、cTnI表达。14d少量细胞α-横纹肌和MHC阳性表达,cTnI阴性表达。21d表达α-横纹肌和MHC的细胞数量增多,并可见少量cTnI阳性表达。28dα-横纹肌、MHC、cTnT阳性表达数目均增多,RT-PCR结果显示NKX2.5呈阳性表达。结论成人脂肪中可以分离出脂肪间充质干细胞并且可以在体外培养传代,经过5-Aza的诱导可以向心肌细胞分化,为干细胞移植治疗和组织工程学种子细胞提供了更多的选择。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的机制研究

目的体外诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白(PTN)mRNA的表达,以了解MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制。方法密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养。取第6代MSCs设对照和试验组进行诱导,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数。免疫细胞化学法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP)-2,胶原酸性蛋白(GFAP)和诱导前、诱导后12 h PTN mRNA的表达。结果接种24 h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形。3 d后可见梭状细胞呈集落状生长,10～14 d融合。第5～6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态。诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞。12 h变形细胞增多,细长突起相互连接。24 h后变形细胞增多不明显。诱导后12 h大部分细胞表达NSE(64.79±0.07)%、MAP-2(60.05±0.09)%,未检测到GFAP的表达,RT-PCR半定量检测有NSE mRNA的表达(0.66±0.15)。实验组诱导后12 h细胞有PTN mRNA的表达(0.689±0.017)。结论建立了稳定的成人MSCs培养增殖体系,MSCs可体外诱导分化为神经元样细胞,在分化过程中有外观形态变化和特异性标志物NSE和MAP-2的表达,同时有PTN mRNA的表达,提示PTN可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化。     

香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖作用

目的 研究香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法 肌注香丹注射液和5-溴尿嘧啶核苷(Brdu);体外培养MSC,用四甲基偶氮唑法检测香丹注射液促进大鼠MSC的增殖作用,免疫组化检测MSC细胞的Brdu标记阳性率.结果 3种高浓度的药液对MSC的增殖与对照组比较有显著性差异;停药后3-7 d,香丹组Brdu标记阳性细胞率与生理盐水组比较有显著性差异.结论 香丹注射液有促进MSC增殖的作用.     

Mesenchymal stem cells for treatment of CNS injury

Brain and spinal cord injuries present significant therapeutic challenges. The treatments available for these conditions are largely ineffective, partly due to limitations in directly targeting the therapeutic agents to sites of pathology within the central nervous system (CNS). The use of stem cells to treat these conditions presents a novel therapeutic strategy. A variety of stem cell treatments have been examined in animal models of CNS trauma. Many of these studies have used stem cells as a cell-replacement strategy. These investigations have also highlighted the significant limitations of this approach. Another potential strategy for stem cell therapy utilises stem cells as a delivery mechanism for therapeutic molecules. This review surveys the literature relevant to the potential of mesenchymal stem cells for delivery of therapeutic agents in CNS trauma in humans.     

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。     

体外定向诱导脐血间充质干细胞向类肝细胞分化的研究

目的 探讨诱导人脐血间充质干细胞（UBCMSCs）向类肝细胞定向分化的可能性。方法 采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合，从人脐血中分离UBCMSCs；通过流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD44，确定UCBMSCs的比例。在UCBMSCs培养体系中，加入人肝细胞株L-02细胞培养上清液或诱导因子（联用HGF和FGF-4）共培养，检测诱导后第7天、14天细胞内细胞角蛋白18（CK18）、白蛋白及糖原的表达。结果 从脐血中分离获得均一贴壁的UBCMSCs；在UBCMSCs培养体系中，无论是添加L-02细胞培养上清液，还是采用诱导因子HGF和FGF-4，均可诱导UCBMSCs细胞内表达中晚期成熟肝细胞表面标志物CK8＆18、白蛋白及糖原。结论 密度梯度离心法和直接贴壁法相结合能够有效分离UCBMSCs；L-02人肝细胞培养上清液或诱导因子HGF、FGF-4均具有诱导UCBMSCs向类肝细胞定向分化的作用。     

两种猪自体骨髓间充质干细胞培养方法的比较

目的比较猪应用单纯直接贴壁法和密度梯度离心结合直接贴壁法两种方法分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞(MSCs)的培养效率,为临床应用提供理论依据和实验方法。方法取滇南小型猪的骨髓液用单纯直接贴壁法和密度梯度离心结合贴壁培养法两种方法分离猪骨髓间充质干细胞,体外培养扩增,绘制其生长曲线,通过显微镜观察培养细胞的生物学形状。结果直接贴壁法收集到的细胞扩增速度较慢,密度梯度离心法收集到的细胞扩增速度较快,细胞培养后成梭形。结论密度梯度离心结合贴壁培养法较单纯的直接贴壁法培养骨髓间充质干细胞的培养效率更高。体外培养的猪骨髓间充质干细胞生长稳定,增殖力较强。