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1.
TGF-β1/Smad3信号途径对牙本质涎磷蛋白基因表达的调控   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中TGF-β1及其信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的调控作用。方法:PCR法制备DSPP引物、构建带有DSPP启动子片段的萤火虫荧光素酶基因报告载体,通过瞬时转染入MDPC-23细胞后,检测报告基因活性。结果:在TGF-β1的作用下,Smad3可以发生转位表达,由细胞浆转入细胞核内。同时,过表达野生型Smad3可以显著增强TGF-β1对DSPP启动子活性的下调作用。结论:TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控;在DSPP启动子-2525-+54bp之间,存在TGF-β1/Smad3信号途径的结合位点,从而发挥对DSPP基因的调控作用。  相似文献   

2.
目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位。方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞(HDPSC)中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并检测在有无TGF-β1的刺激下细胞中pGL3-P-193~+86和pGL3-P-505~+86启动子活性的变化。pGL3-P-505~+86与Smad3共转染至细胞中,10ng/ml TGF-β1刺激2h后,提取细胞核蛋白,EMSA法检测DMP1基因启动子-505~-193bp区存在的Smad3结合位点。结果:HDPSC中瞬时转染Smad3后,其主要表达于细胞胞浆中,随着TGF-β1刺激不同时间后,Smad3在细胞中的表达出现从胞浆到胞核的转位。Smad3可明显加强TGF-β1下调pGL3-P-193~+86和pGL3-P-505~+86启动子活性的作用,在DMP1基因启动子-505~-193bp区至少有一个Smad3结合区域为-209~-201bp区的GTCTAGTCA序列。结论:Smad3是TGF-β1信号通路的下游作用分子,可介导TGF-β1下调D...  相似文献   

3.
目的:对比分析牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因启动子不同片段的启动活性。方法:选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察DSPP基因启动子不同片段的启动活性。结果:在MDPC-23细胞中,DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体均不同程度地表现了启动活性,其启动活性有差异(P〈0.01)。结论:DSPP基因启动子不同片段的启动活性有差异,其活性变化反映位于-95bp~54bp、-410bp~-195bp、-1243bp~-791bp、-1447bp~-1243bp、-3519bp~-2475bp区存在潜在的增强子;-195bp~-95bp、-670bp~-410bp、-2475bp~-1447bp区存在潜在的抑制子。进一步明确了DSPP基因启动子的结构,为今后研究DSPP基因的特异性表达奠定基础。  相似文献   

4.
目的:观察具有矿化活性的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)在重组人转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下对牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)表达和Dmp1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC矿化诱导模型,经10ng/L重组人TGF-β1刺激后,运用RT-PCR、报告基因检测等方法检测细胞在TGF-β1作用后Dmpl mRNA表达变化以及对pGL3-P-193-+86和pGL3-P505-+86 2个启动子片段重组报告基因载体活性的影响。结果:诱导矿化后具有部分成牙本质细胞样细胞特征的HDPSC经TGF-β1刺激后,Dmp1 mRNA的表达水平明显下降,并存在时间依赖性。pGL3-P-193-+86和pGL3-P-505-+86相对荧光素酶活性均下降,以pGL3-P-505-+86活性下降更明显,说明TGF-β1具有下调HDPSC Dmp1转录活性的作用。计算机分析结果发现,Dmp1基因启动子-505~+86bp区存在多个TGF-β1下游作用分子Smads的结合位点。结论:TGF-β1可下调Dmpl mRNA的表达水平和转录活性,以pGL3-P-505-+86活性下降更明显。启动子-505—-193bp区存在TGF-β1下游作用分子或转录因子的结合位点,从而参与下调Dmp1转录表达过程。  相似文献   

5.
目的:研究Smad蛋白在牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的作用。方法:细胞培养,瞬时转染和报告基因检测。结果:转化生长因子β1(transforning growth factor-β1,TGF-β1)抑制DSPP基因启动子活性。过表达野生型Smad3蛋白显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制,而过表达Smad3突变型蛋白则显著抑制了TGF-β1对DSPP基因启动子活性的影响。过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1抑制DSPP基因启动子活性无明显影响。结论:Smad3在介导TGF-b1对DSPP基因的转录调控中发挥重要的作用.  相似文献   

6.
Cbfa1在Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因转录过程中的作用   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的:研究转录因子核心结合因子a1(Cbfa1)在Smad3分子调控牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因表达中的作用。方法:培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Cbfa1对TGF-β1调控目的基因dspp转录的影响。结果:Cbfa1可以抑制DSPP启动子的活性,TGF-β1可以降低Cbfa1对DSPP的抑制作用,当Cbfa1与Smad3共同作用于DSPP启动子时,对DSPP转录活性的抑制作用更强。Cbfa1的两个亚型Osf2和PEBP2αA在DSPP转录调控过程中可能发挥的功能不完全一致。结论:转录因子Cbfa1可以与Smad3共同作用,调控DSPP基因启动子的转录表达。  相似文献   

7.
核心结合因子α1对牙本质涎磷蛋白基因转录调控的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的观察核心结合因子α1(corebindingfactorα1,cbfα1)对牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因启动活性的影响。方法选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,DSPP基因上游2.6kb片段(-2475bp~ 53bp)为启动子。通过采用瞬时转染、报告基因等方法,用SPSS10.0统计软件包对结果进行统计学分析,观察在MDPC-23中,cbfα1对DSPP基因启动子启动活性的影响。结果在MDPC-23细胞中,pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3-cbfα1共转染组荧光素酶的表达量显著小于pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3共转染组(P<0.01)。结论cbfα1对DSPP基因上游-2475bp~ 53bp区域的启动活性有抑制作用。  相似文献   

8.
目的:研究成牙本质细胞系MDPC-23内Smad信号途径在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)调控Smad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Smad7基因表达的分子机制。方法:培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad蛋白分子对Smad7启动子活性的影响,实验数据采用单因素方差分析。结果:当Smad7启动子(-408bp至 112bp)荧光素酶活性载体表达在MDPC-23细胞时,其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加,而骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对其活性无明显影响。单独过表达Smad1、2、4、5对Smad7启动子活性无明显影响。Smad3过表达显著增强Smad7启动子活性,而Smad3与Smad4共转染进一步增强了Smad3的作用。过表达Smad3突变型载体或Smad3反义cDNA(AS-Smad3)均显著抑制TGF-β1对Smad7启动子活性的诱导作用。结论:在成牙本质细胞系MDPC-23内,TGF-β通过Smad3与Smad4协同调控Smad7基因转录。  相似文献   

9.
目的研究成牙本质细胞系MDPC-23内Smad信号途径在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)调控Smad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Smad7基因表达的分子机制.方法培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad蛋白分子对Smad7启动子活性的影响,实验数据采用单因素方差分析.结果当Smad7启动子(-408 bp至+112bp)荧光素酶活性载体表达在MDPC-23细胞时,其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加,而骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对其活性无明显影响.单独过表达Smad1、2、4、5对Smad7启动子活性无明显影响.Smad3过表达显著增强Smad7启动子活性,而Smad3与Smad4共转染进一步增强了Smad3的作用.过表达Smad3突变型载体或Smad3反义cDNA(AS-Smad3)均显著抑制TGF-β1对Smad7启动子活性的诱导作用.结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,TGF-β通过Smad3与Smad4协同调控Smad7基因转录.  相似文献   

10.
观察核心结合因子α1(core binding factor α1,cbf α1)对不同细胞中牙本质涎磷蛋(dentin sialophosphopmtein,DSPP)基因转录调控的影响。方法:选择Hela和小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞;DSPP基因上游2.6kb片段为启动子。采用瞬时转染、报告基因等方法观察在两种细胞中,cbfα1对DSPP基因启动子启动活性的影响。结果:在MDPC-23及Hela细胞中,pGL3-Enhancer-2.6K与pcDNA3-cbfα1共转染组荧光素酶的表达量均小于pGL3-Enhancer-2.6K与pcDNA3共转染组(P〈0.01):在MDPC-23细胞中变化更为明显。结论:cbfα1对DSPP基因的转录调控作用受细胞类型的影响。  相似文献   

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