基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究

目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。     

应用不对称PCR技术提高寡核苷酸基因芯片杂交效率

目的：比较采用常规PCR和不对称PCR分别进行样品的掺入荧光标记，应用于60met寡核苷酸芯片杂交，分析其对芯片杂交效率的影响。方法：以A／T克隆分别将NS1、NS2a、NS2b、NS4a和NS4b基因片段与pMD18-T载体连接，应用常规PCR和不对称PCR两种方法进行掺入荧光标记，将荧光标记样品与寡核苷酸芯片杂交，在相同条件下完成杂交清洗和芯片的扫描检测。结果：与常规PCR标记方法相比，采用不对称PCR技术标记单链样品与寡核苷酸芯片杂交，能提高芯片的杂交效率。结论：应用不对称PCR技术对样品进行荧光标记后，与寡核苷酸芯片杂交能提高芯片的杂交效率，有利于检测型寡核苷酸基因芯片的应用。     

用PCR制备检测丁型肝炎病毒基因芯片的探针

目的：制备诊断丁型肝炎病毒(HDV)cDNA基因芯片探针。方法：针对HDV病毒基因保守区域设计聚合酶链反应(PCR)引物，纯化PCR扩增产物克隆，并测序鉴定。结果：序列分析表明，所扩增的片段均属于HDV特异基因。结论：利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便、实用的方法。     

肺炎链球菌血清型鉴定的分子生物学检测方法

荚膜基因控制肺炎链球菌荚膜的生成,该基因是分子生物学方法检测血清型的基因基础,以不同分子生物学为基础的血清型检测方法针对荚膜基因的区域不一致。多重聚合酶链反应(PCR)、多重PCR反向线性杂交和基因芯片针对血清型特异性区域对血清型进行检测。限制性片段多态性和测序为基础的血清型检测方法利用相对保守区域的基因多态性和血清型相关对血清型进行检测。该文总结了多重PCR、多重PCR反向线性杂交、基因芯片、限制性片段多态性和测序检测血清型的方法。     

HIV基因芯片的初步研究

目的：建立HIV基因检测芯片的分析技术，方法：分离HIV 1U26942基因限制性显示片段作探针，应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片，然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交，以分析限制性显示基因片段的杂交动力学，经杂交后清洗和干燥，扫描芯片进行检测。结果：对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论：建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。     

乙型脑炎病毒与黄热病病毒联合诊断基因芯片的初步实验研究

目的制备乙型脑炎病毒（JEV）与黄热病病毒（YFV）联合诊断基因芯片。方法基于早期实验室研究挑选出28条寡核苷酸探针制备检测芯片。克隆于质粒上的乙型脑炎病毒和黄热病病毒基因片段用于检测探针特异性，经限制性显示技术扩增并标记，与芯片杂交后完成扫描和数据分析。结果JEV、YFV探针与相应的荧光标记样本杂交后，均能检测出阳性荧光信号，而空白对照则检出阴性信号。结论基因芯片技术为病毒检测提供了一种早期、可靠的方法，具有应用于多病毒临床鉴别诊断的前景。     

检测乙、丙型肝炎病毒基因芯片的制备

目的：探讨研制检测乙型和丙型肝炎病毒的基因芯片。方法：以HBV、HCV高度保守的基因片段为探针,同时用没有同源性的植物基因片段为内参照基因,制备成“乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片”。检测时抽提患者血清中的病毒核酸,进行RT－PCR扩增及荧光标记,然后与双检基因芯片杂交,结交结果用ScanArray3000扫描仪扫描。结果：双检基因芯片的内参照结果能做到绝对阳性和绝对阴性,同时对不同血清（正常人血清,乙肝E抗原阳性血清,丙肝RNA阳性血清,乙肝、丙肝阳性混合血清）能有效检测区分。结论：本研究成功地制作了乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片,可望使用于临床。     

SARS冠状病毒检测60 mer寡核苷酸基因芯片的设计及应用

目的设计并应用60 mer寡核苷酸基因芯片实现对SARS冠状病毒的检测.方法根据寡核苷酸基因芯片的设计原则设计出30条60 mer的寡核苷酸片段,覆盖SARS冠状病毒(以TOR2株为参考序列,GENEBANK索取号:AY274119)全基因组,点样制备成12×12的寡核苷酸基因芯片,将临床诊断SARS患者痰液标本抽提病毒RNA,采用限制性显示技术进行标记,将标记好的样品与芯片杂交,洗脱,扫描.初步探索寡核苷酸芯片诊断SARS冠状病毒的敏感性及特异性,并对芯片做进一步的优化.结果来自SARS患者样品与芯片上的多个SARS探针杂交,出现了明显的荧光信号;阴性和空白对照探针上没有杂交信号,而对照样品仅与一个SARS探针有杂交.结论采用60 mer寡核苷酸基因芯片可以从基因水平实现对SARS冠状病毒多段序列的平行检测,对于提高检出率有一定意义,此外,尚可用于监测在发病过程的各个阶段中病毒基因的活动状况.     

利用基因芯片检测性传播疾病

目的 探讨基因芯片在性传播疾病检测中的应用。方法 针对中国主要流行的7种性传播疾病病原体,选择高度保守的特异基因片段为芯片探针．将其PCR扩增产物用MicroGrid Ⅱ型全自动点样仪点样于包埋有醛基的载玻片上,制备成性病检测基因芯片。对7种临床病原DNA样本及阴性样本进行扩增、标记,与芯片杂交后,用激光共聚焦荧光扫描仪检测并分析结果。结果 该芯片可以从病原体感染样本DNA中检测到阳性参照序列以及与病原体相对应的特异基因片段。结论 性病检测基因芯片能对性传播疾病病原体做出快速、准确的检测。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的 应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段，并进行克隆、测序分析，制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法 利用Olig06．4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMDl8-T载体并进行快速鉴定，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果 获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论 利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

HIV基因芯片的初步研究

目的建立HIV基因检测芯片的分析技术。方法分离HIV1U26942基因限制性显示片段作探针,应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片。然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交,以分析限制性显示基因片段的杂交动力学。经杂交后清洗和干燥,扫描芯片进行检测。结果对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。     

痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制

目的 对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究，为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法 根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针，人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA，采用限制性显示技术标记，标记样品与芯片杂交后，用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果 芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号，而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论 病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显，在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号，反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。     

戊型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步研究

目的制备戊型肝炎病毒诊断基因芯片并进行杂交验证。方法利用Oligo6.0软件针对戊型肝炎病毒诊断基因保守区域设计多对寡核苷酸探针,用芯片点样仪将其按照阵列设计打印在玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交,进而在芯片扫描仪中对得到的探针数据进行分析并实验验证。结果芯片杂交后得到的探针荧光强度好,信噪比高,符合临床样品的基因亚型,RT-PCR验证后得到的电泳结果与芯片实验一致。结论实验设计并制备的寡核苷酸戊型肝炎病毒诊断芯片能用于戊肝的检测,为这项疾病的实验室诊断提供了一种快速平行的检测方法。     

人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究

目的 应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究.方法 根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.共检测30份临床样本.结果 所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个.结论 基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行.     

微乳液多重PCR基因芯片法在早孕期无创性胎儿性别诊断中的应用

目的 探讨微乳液多重PCR基因芯片法在早孕期无创性胎儿性别诊断中的应用价值。方法 收集138例4—12孕周孕妇的外周血液样品，提取血浆DNA。选取胎儿DNAY染色体上的6个特异性序列SRY1、SRY2、SRY3、DYS1、DYS14和DYZ3基因作为男性胎儿标志物，采用微乳液PCR进行扩增，同时标记荧光，以β-globin基因作为阳性内对照。扩增产物与固定在基因芯片上的探针分子杂交，采用ScanArray 5000扫描仪扫描芯片。检测结果与胎儿出生性别进行比较。结果 最早的检出样品来自孕31d的孕妇，在78份男性胎儿孕育者血样中，有76份样本6个Y染色体特异序列均为阳性；60份女性胎儿孕育者血样中没有一个Y染色体特异序列阳性。微乳液多重PCR基因芯片法对男性胎儿早孕期检测的灵敏度达到97．4％，特异度达到100％。结论 微乳液多重PCR基因芯片法检测孕妇外周血中男性胎儿DNA的方法具有较高的灵敏度和特异度，能够早期鉴定胎儿性别，对性连锁遗传病的筛选具有潜在的应用价值。     

人胎盘基因表达谱芯片的初步研究

目的：制备人胎盘基因表达谱芯片，并用于基因差异表达分析。方法：用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探讨打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组与三氧化二砷处理的K562细胞总RNA，纯化mRNA后反转录成cDNA，再以限制性显示技术进行荧光标记，将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交，杂交后清洗芯片，干燥后对芯片进行扫描，分析杂交结果。结果：建立了较可靠的制备与检测基因表达谱芯片的方法，并筛选出45个差异表达基因片段，结论：制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。     

基因芯片技术在脑创伤研究中的应用

基因芯片(gene chip)是将大量的靶基因片段用点样仪有序地、高密度地(点与点之间的距离一般＜500μm)固定在玻璃、硅等固相载体上的一项技术.它将待测样品用荧光染料标记成探针与芯片杂交,杂交后的信号用激光扫描仪检测,计算机分析检测结果,可获得类似于传统的点杂交的分子杂交数据,比较各组织间靶基因表达谱的差异,以达到快速、高效、高通量及平行性地分析生物信息的目的.     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

基因芯片与卫生微生物检验

基因芯片又称DNA微阵列，是采用原位合成或显微点样技术，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面，有序地集成一系列可寻址识别的基因片段，与标记的样品进行杂交后，通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速检验或医学诊断，它具有高通量、可并行检测的特点。根据载体上核酸分子的不同，分为cDNA芯片和寡核苷酸芯片等。它在临床微生物检测中的应用为其在卫生微生物检验中的应用奠定了良好的基础。     

用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

目的：用cox1基因片段的PCR技术对亚洲带绦虫和牛带绦虫的快速鉴别。方法：用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物以及带绦虫cox1基因片段的通用引物,对贵州省都匀地区和从江地区的带绦虫虫卵和节片DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测和核酸序列测定,并用NC-BI Blast对扩增产物的核酸序列与NCBI数据库中带绦虫的cox1基因进行比对。结果：5株都匀带绦虫DNA样品经亚洲带绦虫cox1基因片段的特异性引物PCR,均扩增出约260 bp的产物,PCR产物的核酸序列与NCBI数据库中亚洲带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为100%;2株从江带绦虫的DNA样品用亚洲带绦虫特异性引物和牛带绦虫特异性引物的PCR均未见扩增产物,而通用引物PCR则扩增出约1 000 bp的产物,核酸序列与NCBI数据库中牛带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为99%,在牛带绦虫特异性引物的结合位点存在一个碱基差异。结论：常规PCR扩增特异性的cox1基因片段可快速鉴定亚洲带绦虫;从江牛带绦虫株的cox1基因特异性片段部分存在变异,导致与特异性引物结合能力的差异,可采用cox1基因通用引物PCR结合测序进行鉴定。