胰腺发育不同阶段转录因子表达的研究进展

1型糖尿病主要因胰岛β细胞破坏引起胰岛素绝对缺乏,2型糖尿病兼具胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷。但目前的药物及激素替代治疗无法根本治愈糖尿病,只能延缓其进程。近年来通过体外诱导多能干细胞或成体细胞转变为胰岛素分泌细胞的研究,为治疗糖尿病提供了新的希望。本文旨在对胰腺β细胞发育过程中所表达的转录因子及其作用的相关研究进展进行综述。     

大鼠胰腺发育功能相关基因表达谱的分析

目的研究大鼠胰腺胚胎发育不同阶段的基因表达谱,对比其功能相关基因随大鼠胰腺发育的变化。方法采用显微分离及提取技术获得胚胎发育不同阶段胰腺组织并提取RNA,采用高密度寡核苷酸芯片(Affemetrix芯片)对胚胎发育至第12.5天、15.5天、18.5天胚胎胰腺和成年胰腺进行基因转录水平分析,用生物信息学方法分析具体基因的表达情况。结果胰腺的生物学功能尤其β细胞功能相关基因insulin RNA、amylopsin RNA、GLUT-2RNA等在胚胎第15.5及18.5天显著高表达。结论胚胎第15.5～18.5天直至出生是胰腺功能完善和成熟的阶段,这个时期以细胞功能成熟为主。     

GSIS相关基因在大鼠胚胎胰腺发育后期表达模式

目的探讨大鼠胚胎发育晚期胰腺13细胞GSIS功能相关基因的表达趋势。方法利用显微分离方法分离胚胎15．5d（E15．5）和胚胎18．5d（E18．5）胰腺组织，提取RNA并与大鼠基因组芯片杂交。数据处理后，获得E15．5和E18．5胰腺组织基因表达谱。进而利用RT—PCR对芯片结果进行验证。结果在E15．5至E18．5，肝核因子（hepatocyte nuclear factor，Hnf）1α及4α特异表达，其下游基因胰岛素1（Insl），葡萄糖转运体2（Glut-2）、L型丙酮酸激酶（L—PK）和醛缩酶B（Aldolase B）表达上调，而葡萄糖激酶（GCK）无表达。RT-PCR方法进一步验证，Hnflα及Hnf4α在E18．5特异表达，至初生时，Hnflα表达下调，Hnf4α无表达，GCK明显表达。结论Hnflα及Hnf4α及其下游基因在大鼠胚胎胰腺发育后期出现高表达。     

第12至38周胚胎胰腺的组织发生

用同种异体胰腺和胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的研究已较普遍,并应用于临床取得一定疗效,但是目前尚存在某些问题影响移植后的效果。本文通过123例人胎胰腺组织发生的观察,对影响胰腺和胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的因素进行初步探讨。     

吻合血管的胚胎胸腺及胰腺联合移植治疗糖尿病

为治疗需供用外源性胰岛素的糖尿病，行吻合血管的胎胸腺腹腔胃网膜上移植。１９９４年５月至１９９５年５月共进行４例手术，４例均有效，首例在移植２５天后完全脱离胰岛素治疗，至今已８个月，其余２例也有效，目前仍在观察之中，４例患者的生活质量均有不同程度改善，并发症得到控制，作者首次采胚胎胸胰腺和脾脏的吻合血管联合移植术，认为同时调节免疫系统和增加胰岛素分泌应有更好的移植效果。     

人胚胎胰腺增殖细胞核抗原的表达

探讨不同胎龄中人胚胎胰腺内、外分泌部细胞的增殖水平 ,将 3 0例 8～ 3 7周人胚胎胰腺分成四组 ,A组 8～ 14周 8例 ,B组 15～ 2 1周 8例 ,C组 2 2～ 2 8周 8例 ,D组 2 9～ 3 7组 6例 ,分析增殖细胞核抗原 (PCNA)表达水平。胚胎 8周时 ,可见由单层柱状上皮围成的原始胰管 ,并向外突出 ,PCNA阳性率达 99%。在 9～ 14周的胎胰中 ,内、外分泌部PCNA阳性率分别为 (3 1.6± 4.1) %、(90 .6± 6.9) % ;15～ 2 1周的胎胰中内、外分泌部PCNA阳性率分别 (2 0 .0± 8.6) %、(4 3 .0± 14 .0 ) % ;2 2～ 2 8周胎胰中内、外分泌部阳性率分别为 (2 9.0± 7.8) %、(60 .2± 10 .0 ) % ;胚胎 2 9～ 3 7周中内、外分泌部PCNA阳性率分别为 (3 5 .1± 15 .4) %、(5 8.5±11 1) % ;各胎龄段胰腺外分泌细胞PCNA的阳性表达均显著高于内分泌细胞 (P <0 .0 0 1) ,胚胎发育早期阶段 (9～ 14周组 )外分泌细胞PCNA的阳性表达明显高于其它胎龄 (P <0 .0 0 1)。胚胎发育晚期阶段 (2 9～ 3 7周 )内分泌部PCNA阳性率均高于其它胎龄组。结论 :在胚胎发育过程中胰腺外分泌部细胞增殖水平高于内分泌部 ,随着胎龄的变化 ,胰腺内、外分泌细胞的增殖水平也发生了变化     

大鼠胰腺发育过程中胰岛素释放功能完善的研究

目的: 明确大鼠胰腺发育不同时期胰岛素合成及释放相关基因的表达差异,探讨胰岛素分泌功能完善的过程? 方法:分离并提取SD大鼠胚胎发育12.5天(E12.5)?E15.5?E18.5?新生?出生后21天及成年大鼠胰腺组织,利用Affymetrix公司的高密度寡核苷酸芯片检测大鼠发育各阶段胰腺组织基因表达谱并分析胰岛素合成及释放相关基因的特异及差异表达情况?分别进行正常新生鼠?成年鼠血糖水平及正常新生第1?3?7?10?12天大鼠腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)?采用ELISA法测定新生鼠和成年鼠血中胰岛素浓度?新生大鼠胰岛细胞原代培养观察新生鼠胰岛细胞的形态?结果:在胰岛素合成及释放相关基因中,胰岛素基因及其特异性转录因子如PDX-1在大鼠E12.5~E15.5时即开始有表达,以后胰岛素基因持续存在且表达增多;胰岛素胞吐过程中的关键基因Syntaxin-1a?Vamp-2?Rab-3a?Munc13-1等从E15.5开始出现,以后表达量亦增多;而葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)相关基因中,葡萄糖转运体-2(Glut2)在胚胎早期开始表达,葡萄糖激酶(GCK)在胚胎中晚期才表达?自E18.5即检测到大鼠血中胰岛素的存在,随着胚胎的发育,血胰岛素浓度逐渐升高?新生大鼠对葡萄糖负荷不能耐受,出现IPGTT异常,出生1周以后IPGTT才逐渐趋于正常?新生鼠的胰岛形态与成年鼠相似,但体积相对较小,透亮度稍差?结论:大鼠胚胎胰腺发育早中期即已具备胰岛素合成及分泌的能力,但新生鼠刚出生时,其胰岛功能仍尚未完善,出生以后才逐渐对葡萄糖负荷有良好的反应性?     

胚胎停止发育120例相关因素分析

胚胎停止发育（简称胎停育）是临床妊娠中常见的疾病,为深入研究其原因,对120例发生胎停育夫妇进行了系统检查,以期发现导致胎停育的原因。     

大鼠胰腺不同发育时期胰岛素分泌相关基因的表达

目的探讨与胰岛素分泌相关基因在大鼠发育不同阶段的表达趋势。方法采用高密度寡核苷酸芯片和RT—PCR技术对孕12．5d（E12．5）、E15．5d（E15．5）、E18．5d（E18．5）初生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析。结果在大鼠发育不同阶段胰岛素mRNA持续表达；调控胰岛素基因表达的相关转录因子多在E12．5或E15．5开始表达（分别占60％和20％）；与胰岛素分泌相关的基因多在胚胎发育中后期开始表达（占66．7％），其中基因Rim1在胰腺发育不同时期呈现差异表达，于初生期达到表达高峰。结论胚胎发育中后期是胰腺内分泌部发育的关键阶段。     

因意外而中止妊娠的6～8周人胚脑发育及相关因子表达的形态学研究

目的 研究人胚脑早期发育过程中细胞的增殖、分化、凋亡及相关因子的表达变化,为明确人胚脑发育过程中的细胞增殖、分化和凋亡机制提供依据.方法 收集因意外而中止妊娠的6～8周人胚,采用TUNEL染色和免疫组化SABC染色,观察脑的发育、增殖和凋亡细胞的分布及相关因子的表达.结论 人胚脑6周时,端脑、间脑、中脑、后脑与末脑已形成.6～8周,各脑均由生发层(GL)、中间层(IL)和边缘带(MZ)组成.6～7周时,TUNEL法标记的细胞及PCNA、Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、Rb和P53阳性细胞分布于各脑的GL和IL,其沉淀物出现在圆形或椭圆形细胞的胞核和胞浆中;8周时,Fas和Rb阳性细胞分布于各脑的IL,其沉淀物出现在梭形细胞的胞浆和突起中,TUNEL法标记的细胞及其它因子阳性细胞的分布同6～7周.各因子的表达与细胞增殖和凋亡的发生在时间和空间上基本一致.结论 人胚脑发育过程中,神经祖细胞的增殖和凋亡同时发生,Fas、Fas-L和Bax可能介导凋亡的发生, Bcl-2则可能通过抑制细胞凋亡而维持细胞的存活,Rb与P53可能在神经祖细胞正常增殖和分化中起监控和维持作用.     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞分泌细胞因子的影响

目的观察不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞分泌的IL-6、TGF-β、TNF-αmRNA表达的影响,以17β-雌二醇作为阳性对照比较淫羊藿甙与雌激素对于细胞因子表达影响的差异。方法体外培养新生SD大鼠颅盖骨分离的成骨细胞,加入不同浓度的淫羊藿甙及17β-雌二醇,用RT-PCR测定的IL6、TGF-βα1、TNF-αmRNA的表达水平的变化。结果10μg／ml淫羊藿甙和三个浓度的17β-E2都能够促进TGF-β1 mRNA的表达,抑制IL-6和TNF-αmRNA的表达。5μg／ml的淫羊藿甙能够促进TGF-β1mRNA的表达并抑制IL-6 mRNA的表达。但对于TNF-α mRNA表达没有抑制作用。其中三个浓度的17β-E2组和淫羊藿甙组之间对于IL-6和TNF-αmRNA表达的影响没有显著性差别,而10-8mol／L17β-E2对TGF-β1 mRNA表达的影响作用最强。结论淫羊藿甙治疗骨质疏松的部分机理可能与抑制IL6、TNF-α mRNA的表达和促进TGF-β1 mRNA的表达有关。     

磷酸二酯酶3A在小鼠受精卵早期发育中的表达

目的:研究磷酸二酯酶3A(PDE3A)在小鼠受精卵第1次有丝分裂中的表达.方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测小鼠受精卵在第1次有丝分裂的G1、S、G2及M期,在mRNA水平PDE3A的表达.结果:在mRNA水平,PDE3A在G2、M期的表达较G1、S期明显增高.结论:小鼠受精卵中有PDE3A基因的表达;在小鼠受精卵第1次有丝分裂过程中,PDE3A在mRNA水平的表达具有阶段特异性,因而,PDE3A很可能参与对受精卵早期发育的调控.     

慢阻肺急性发作期血清炎性指标的变化研究

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性发作期患者体内炎性因子的变化及其与疾病发展的关系。方法以该院2011年1月-2013年1月间收治的80例COPD患者为观察组,将该院同期进行的80例健康体检者作为对照组．比较两组患者炎性细胞因子和病情监测指标的差异及相关性。结果观察组患者各炎性细胞因子含量高于对照组,其差异有统计学意义（P〈O．05）。在COPD患者中,炎性因子与病情监测指标间呈现线性关系。结论在COPD急性发作期患者体内各炎性因子含量是上升的,且其于COPD的病情发展程度有关,可作为临床诊断与监测指标,具有积极意义。     

大鼠不同程度急性胰腺炎的胰腺微循环系列变化

本实验通过诱发大鼠不同程度病变的急性胰腺炎后,对大鼠的胰腺进行了病理检查和墨汁灌注、透明。观察了不同程度胰腺炎时,胰腺的病理和微循环结构的变化。结果表明:随着胰腺炎的病变由轻到重,由水肿型发展到出血坏死型,胰腺的微循环结构也有由小血管扩张充血到痉挛缺血,充盈不足,最后到血管破裂出血,栓塞中断的逐渐加重的变化过程。     

咖啡因暴露对小鼠胚胎发育的影响

目的:评价孕前和孕期咖啡因对雌性小鼠受孕、着床及胚胎发育的影响。方法:孕前和孕期灌胃给予不同剂量咖啡因(60,120和240 mg/kg.d),以等容积蒸馏水作正常对照。记录各组母鼠体重增长率、小鼠受孕率、着床数和胎盘重量,进行活胎的一般情况检查(体重、身长、尾长)及外观、内脏、骨骼畸形检查。结果:与正常对照组比较,咖啡因组母鼠体重增长率明显降低(P<0.01,P<0.05),咖啡因组小鼠的受孕率明显降低,受孕延迟,吸收胎和死胎数发生率亦增加,呈剂量依赖性,但各组着床数无明显差异。咖啡因小、中、大剂量组胎鼠平均体重、身长、尾长、胎盘重均明显低于正常对照组(P<0.01,P<0.05),胎鼠宫内发育迟缓(FGR)发生率分别为6.8%、23.3%、98.3%;各组胎鼠外观、内脏、骨骼畸形检查未见异常。结论:孕前和孕期咖啡因暴露可致小鼠受孕延迟,胎鼠吸收胎、死胎、FGR发生率升高。     

异氟醚对人肺泡巨噬细胞趋化因子和细胞因子mRNA表达的影响

目的　研究异氟醚麻醉中人肺泡巨噬细胞IL 8、IL 1β、TNF α、IFN γ、IL 4和IL 10mRNA的表达 ,探讨异氟醚对肺炎性反应的影响。方法　 2 4例肝脏部分切除手术病人随机分为异氟醚组 (n =12 )和对照组 (n =12 ) ,在麻醉诱导后即刻和 4h分别用纤维支气管镜行支气管肺泡灌洗 ,从灌洗液中收获肺泡巨噬细胞提取RNA ,逆转录合成cDNA以 β actin为内对照作PCR后电泳扫描求积 ,检测肺泡巨噬细胞上述细胞因子、趋化因子mRNA的表达。结果　异氟醚组麻醉诱导后 4h比麻醉诱导后即刻IL 8、IL 1βmRNA的表达显著增加 (P <0 .0 5 ) ,对照组麻醉诱导后 4h比麻醉诱导后即刻IL 8、IL 1βmRNA的表达轻度增加 (P <0 .0 5 ) ;在麻醉诱导后4h ,异氟醚组和对照组之间IL 8、IL 1βmRNA的表达水平差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。TNF α、IFN γ、IL 4和IL 10mRNA的表达在麻醉前后无明显变化。结论　异氟醚能增强病人肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子、趋化因子mRNA的表达 ,提示异氟醚可能加重肺部的炎性反应     

神经生长因子在人胚神经管早期发育中的定位表达

目的 研究捷安肽素的抗真菌作用机理.方法 采用形态学方法和同位素标记法.显微形态观察经捷安肽素处理后的供试真菌的形态学变化.进一步采用14C同位素标记的特异底物"尿苷二磷酸-(14C)-葡萄糖"示踪,研究捷安肽素对真菌(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶活性反应的影响.结果 研究神经生长因子(NGF)在早期人胚神经管发育过程中的定位表达.方法 采用免疫细胞化学ABC法染色,研究35天人胚的发育情况.结果 在人胚神经管的室管带中,神经元的细胞质和细胞核NGF免疫反应阳性;在中间带,一部分神经元的细胞核NGF免疫反应阳性,另外一部分神经元的细胞核NGF免疫反应阴性,而其突起NGF免疫反应阳性;在边缘带NGF的表达与中间带相似.在神经管的头侧NGF阳性反应较强,神经管的尾侧NGF阳性反应较弱.结论 NGF在人胚神经管免疫反应阳性,表明NGF可能是诱导神经管分化发育的重要信号分子,提示NGF可能在人胚神经管的发育中具有十分重要的作用.     

小白菊内酯抑制高糖刺激的人肾小球系膜细胞炎症因子表达的研究

目的:观察小白菊内酯(parthenolide,PTN)对人肾小球系膜细胞炎症因子表达的抑制作用.方法:①以MTS方法检测PTN和厚朴酚(0~50μmol/L)在人肾小球系膜细胞中的安全浓度.②将系膜细胞与高糖(50mmol/L)及不同浓度小白菊内酯(0~50μmol/L)共同培养24h,24h后ELISA法检测培养上清液中TNF-α、TGF-β1、MIP-1α与MCP-1蛋白的表达水平.结果:①0~50μmol/L的PTN浓度未对系膜细胞的增殖活力产生影响,但更高浓度的PTN可明显降低系膜细胞的增殖活力.②50mmol/L高糖可显著增加炎症因子TNF-α、TGF-β1、MIP-1α及MCP-1的蛋白水平.PTN呈剂量依赖性地抑制高糖刺激的炎症反应作用.结论:PTN能有效抑制高糖刺激后人肾小球系膜细胞炎症因子的表达,从而削弱高糖所致的系膜细胞炎症反应,为进一步阐明PTN改善DN的作用机制提供了实验依据.     

绝经期妇女骨密度与细胞因子的变化

目的：观察绝经后不年龄妇女骨密度与白细胞介素1（IL－1）、白介素6（IL－6）、肿瘤坏死因子（TNF－α水平的变化。探讨骨质疏松症（Ostoporosis,OP)的发病及其机理,方法：用双能X线吸收仪测定207例绝经前后不同年妇女骨密度,采用定量夹心酶联免疫测定血清IL－1、IL－6、TNF－α水平。结果：骨量减少28例,占14．95,OP72例,占38．5％,正常行经对照组20例,骨量减少1例,占0．5％,各年龀组与对照组差异显著（P＜0．01）,结论妇女绝经后,雌激素水平明显下降,雌对因子的抑制降低,因而IL－1、IL－6、TNF－α血清水平明显升高,增强了破骨细胞的活性和形成,使骨转换加快,OP发病率升高。