SUMO特异性蛋白酶3在HBV复制中的作用机制

目的初步探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)在HBV感染中的作用机制。方法体外培养HepG2.2.15细胞,或利用HBV转基因小鼠肝脏组织,通过表达SiRNA干扰等,经蛋白质印迹、实时PCR、免疫组织化学染色等实验技术,检测SENP3在HBV感染细胞模型中的表达。结果 HBV DNA与其PBMC中SENP3的含量呈反比。健康对照组PBMC中SENP3的平均蛋白水平是CHB患者的7.4倍(P0.05)。HBV转基因小鼠肝脏中SENP3表达显著降低,小鼠肝脏组织中AKT磷酸化水平增高,是健康对照组的4.1倍(P0.01)。SENP3在HBV DNA全基因重组质粒转染的HepG2受体细胞(HepG2.2.15)中表达量显著低于未转染HBV DNA的HepG2细胞。与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞中AKT磷酸化水平显著增高,其含量平均是HepG2细胞的5.2倍(P0.01);在HepG2.2.15细胞中转染SENP3质粒使其过表达,则AKT磷酸化水平降低,HBV DNA含量降低,并与SENP3质粒浓度呈负相关性;分别向HepG2.2.15细胞转染100ng和500ng的SENP3质粒,则细胞中HBV DNA含量由对照组中的7.983.03×106 IU/mL降低至3.45×106 IU/mL和1.92×106 IU/mL;应用siRNA干扰SENP3在HepG2.2.15细胞中的表达,则Akt磷酸化水平升高,其浓度是对照组的5.6倍(P0.01)。结论机体HBV DNA载量与SENP3的表达量呈负相关,SENP3可通过抑制肝细胞AKT磷酸化水平,降低HBV DNA载量。     

胰腺癌组织黏蛋白MUC1表达的意义

目的:探讨MUC1在胰腺癌组织中的表达及其在胰腺癌诊断和治疗中的意义．方法:采用免疫组化方法检测43例原发性胰腺癌组织和15例正常胰腺组织中MUC1的表达．结果:MUC1在胰腺癌组织中的阳性表达率为 67．4％,明显高于正常胰腺组织(20．0％),与正常胰腺组织之间存在统计学差异(x2=8．293, P<0．01)．MUC1在胰腺癌组织中阳性表达率与胰腺癌淋巴结转移及TNM分期存在关联(x2= 5．180,P=0．023;x2=4．289,P=0．038)．结论:MUC1可作为胰腺癌患者预后评价指标,并可用于诊断及作为免疫治疗的靶抗原．     

ERCC1与RRM1在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的 研究胰腺癌、癌旁组织、正常胰腺组织中DNA损伤修复蛋白ERCC1,RRM1表达及其临床意义.方法 选取吉林大学第一医院2009年1月至2012年6月手术切除胰腺癌及癌旁组织34例,正常胰腺组织20例,标本经常规石蜡包埋,采用SABC法行免疫组化染色.结果 在胰腺癌组织中ERCC1高表达14例(4l.2％),RRM1高表达10例(29.4％),癌旁组高表达率分别为67.6％、52.9％,正常胰腺组织分别为70.0％、80.0％.两种基因的高表达率均低于癌旁组及正常胰腺组(P＜0.05).在有无淋巴结、肿瘤大小、分化程度因素中分析ERCC1及RRM1的高低表达无统计学差异.结论 ERCC1及RRM1基因的表达缺失与肿瘤的发生密切相关,其表达与否对肿瘤大小、分化程度、区域淋巴结转移等无显著影响.     

SENP1蛋白在老年脑胶质瘤中的表达及其与预后的相关性

目的探讨SUMO特异性蛋白酶(SENP-1)蛋白在老年脑胶质瘤中的表达及其与预后的相关性。方法 145例老年脑胶质瘤患者,选取脑胶质瘤癌灶旁未见明显组织学改变的组织区域正常脑组织为对照组。根据免疫组织化学法检测SENP1蛋白在老年胶质瘤及正常脑组织中表达的结果,比较SENP1蛋白在两组中的阳性表达率。分析脑胶质瘤组织中SENP1蛋白的阳性表达与临床病理特征的关系,应用Kaplan-Meier法分析SENP1蛋白表达与脑胶质瘤预后的关系。结果 SENP1在脑胶质瘤组织中的阳性表达率高于正常脑组织(P<0.05)。SENP1在临床分期为Ⅲ和Ⅳ期的脑胶质瘤组织中的阳性表达显著高于Ⅰ和Ⅱ期,在淋巴结转移组织的表达显著高于无淋巴结转移者,大病灶组织中SENP1的阳性表达显著高于小病灶组(P<0.05),在不同性别患者中,不同分化程度中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。提示SENP1的表达与脑胶质瘤的临床分期、淋巴结转移和脑胶质瘤的病灶大小相关。SENP1阴性表达组的中位生存期显著高于阳性表达组(P<0.05)。结论 SENP1在脑胶质瘤组织中的阳性表达显著增强,且与老年患者的预后密切相关,SENP1阴性表达的老年脑胶质瘤患者具有更长的生存期。     

PDK1在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨PDK1在胰腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:对44例胰腺癌及其癌旁正常组织标本,分别应用RT-PCR方法和Western blot方法检测其PDK1的mRNA和蛋白表达,并和临床病理指标进行统计学分析.结果:经RT-PCR检测胰腺癌组织中PDK1表达水平明显高于癌旁正常组织(0.352006 vs 0.074887,P<0.01);Western blot检测发现72.727%(32/44)PDK1蛋白的表达癌组织中高于癌旁组织,有统计学差异(P<0.01).PDK1在胰腺癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和分化程度均无相关性(P>0.05),而与T分期、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05).结论:PDK1在胰腺癌中表达上调,可能与胰腺癌发生、发展及转移有关.     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达

目的 克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的SUMO-Specific Protease(SENP)基因,并对其序列进行生物信息学分析,原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法 提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段,连入克隆载体pGM-T,测序后进行生物信息学分析;根据分析结果克隆SENP的催化活性区,构建其原核表达载体pET-28a(+)-SENPc,在E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot观察表达结果。结果 成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列,生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同,二级结构以无规则卷曲为主,其催化活性区位于126-497aa,被一段插入序列分割成两个部分;构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,在相对分子量约43 kD的位置出现目的 蛋白条带,与理论值相符。结论 成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区,为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。     

亲环素A蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

亲环素A(Cyclophilin A,CypA)是免疫抑制剂环孢素A(Cyclosporin A,CsA)在细胞内的作用靶点,具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(Peptidyl-prolyl cis-transisomerase, PPIase)活性.最近研究示Cyp A蛋白在非小细胞肺癌[1]、前列腺癌细胞 [2]、直肠癌[3]、喉癌[4]、食管癌[5]等肿瘤组织中高表达.另有研究报道CypA表达与子宫内膜癌预后密切相关[6].胰腺癌起病隐匿,其术后5年生存率低于5%[7].     

高迁移率族蛋白1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的　研究胰腺癌 (PC)组织中高迁移率族蛋白 1(High mobility group box1,HMGB1)蛋白表达 ,并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小、浸润、淋巴及血道转移的关系。方法　用免疫组织化学SABC方法 ,检测 73例胰腺癌组织、10例癌旁组织、6例正常胰腺组织 HMGB1蛋白表达。结果　HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达 (76 .7% ) ,在癌旁组织中仅有微弱表达 ,正常胰腺组织无表达 ;HMGB1的阳性率与癌分化程度无关 (P>0 .0 5 ) ;与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关 (P<0 .0 1)。结论　 HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达 ,可作为胰腺癌生长、转移及预后的重要判定指标。     

环氧合酶-2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌中COX-2的表达及其临床意义.方法应用免疫组化SP法检测45例胰腺癌、11例慢性胰腺炎、7例胰腺良性肿瘤和10例正常胰腺组织中COX-2的表达.结果正常胰腺和慢性胰腺炎组织的导管上皮和腺泡细胞未见COX-2的表达,7例良性胰腺肿瘤有2例COX-2呈阳性表达,45例胰腺癌中,有34例COX-2呈阳性表达,阳性率为75.6%.COX-2在胰腺癌中的表达显著高于正常胰腺、慢性胰腺炎和胰腺良性肿瘤(χ2分别为19.79、21.16和6.28,P<0.0001、P<0.0001和P<0.01),COX-2表达水平的高低与胰腺癌的部位、分化程度、转移和TNM分期之间无显著性差异(χ2分别为2.10,1.27,0.44和0.21,P>0.05).结论 COX-2的过度表达在胰腺癌的发生中可能具有重要作用,COX-2抑制剂对胰腺癌的预防和治疗可能有效.     

环氧合酶—2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胰腺癌中COX-2的表达及其临床意义、方法 应用免疫组化SP法检测45例胰腺癌、11例慢性胰腺炎、7例胰腺良性肿瘤和10例正常胰腺组织中COX-2的表达。结果 正常胰腺和慢性胰腺炎组织的导管上皮和腺泡细胞未见COX-2的表达,7例良性胰腺肿瘤有2例COX-2呈阳性表达,45例胰腺癌中,有34例COX-2呈阳性表达,阳性率为75.6％。COX-2在胰腺癌中的表达显著高于正常胰腺、慢性胰腺炎和胰腺良性肿瘤(X_2分别为19.79、21.16和6.28,P<0.0001、P0.05)。结论 COX-2的过度表达在胰腺癌的发生中可能具有重要作用,COX-2抑制剂对胰腺癌的预防和治疗可能有效。     

结肠癌转移相关的基因-1在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨与结肠癌转移相关的基因-1（MACC1）在结肠癌中的表达及其与结肠癌发生、浸润、转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测20例癌旁正常结肠黏膜组织、22例结肠腺瘤组织和40例结肠癌组织中MACC1蛋白的表达,分析各组之间表达的差异及其与结肠癌临床病理特征之间的关系。结果结肠癌组MACC1的阳性表达率显著高于癌旁正常结肠黏膜及腺瘤性息肉组（90．0％比20．0％,27．3％）,P〈0．001。MACC1表达强度与患者的性别、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤直径大小及分化程度无相关性,与结肠癌浸润深度、TNM分期及腹腔播散和远处转移有关,并随着结肠癌浸润程度的加深、TNM分期的进展及发生腹腔播散和远处转移,MACC1的表达强度明显增高（P〈0．05）。结论MACC1的过表达在结肠癌的发生、浸润及转移过程中起重要作用。     

Bmal1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨钟基冈Bmal1在胃癌和癌旁组织中的表达及其临床意义.方法 收集15例胃癌和癌旁非癌新鲜手术标本,以实时荧光定量PCR检测Bmall mRNA表达.收集64例胃癌和癌旁组织,以免疫组化方法检测Bmal1表达,用图像分析技术分析Bmal1在不同组织中的表达差异,结合临床资料探讨其与胃癌临床病理的相关性.结果 胃癌组织中Bmal1 mRNA转录量为1.02±0.05,癌旁组织中为0.57-0.03,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).Bmal1蛋白在癌旁组织中主要位于细胞的胞核,平均吸光度值为0.1041 ±0.0543,而在胃癌组织中主要位于胞质,平均吸光度值0.1816±0.0128,Bmall在胃癌组织与癌旁组织差异有统计学意义(P＜0.05).Bmal1表达强度与年龄、胃癌分化程度相关(P＜0.05),Bmal1与性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移无相关性(P＞0.05).结论 Bmal1蛋白在胃癌组织中表达移位和表达上调可能与胃癌发生、发展相关,可能成为影响胃癌预后的重要因素.     

NORE1A基因在肺癌组织中的表达缺失及相关因素分析

目的探讨抑癌基因NORE1A在肺癌组织中的表达缺失情况及其临床意义。方法采用RT-PCR技术检测46例肺癌组织及相应癌旁正常组织中NORE1A基因的表达缺失情况。结果(1)NORE1A基因在正常肺组织均有表达,在肺癌组织中表达缺失率为45%;(2)NORE1A基因在不同病理细胞类型标本中的表达缺失率不存在明显差异,P>0.05;(3)吸烟组和非吸烟组间NORE1A基因的表达缺失比较差异无显著性,吸烟组缺失率为48%,非吸烟组为42%(P>0.05);(4)淋巴结转移组的NORE1A基因的表达缺失率高于无淋巴结转移组标本,分别为60%和18%(P<0.01)。结论不能认为吸烟是导致NORE1A基因失活的一个具有重要影响的因素。NORE1A基因的表达缺失与肺癌发生有关,不仅发生于早期肺癌,而且可能在其晚期亦存在继发性大量失活。     

PFTAIRE蛋白激酶1在直肠癌中的表达情况及其临床意义探讨

目的探讨PFTAIRE蛋白激酶1(PFTK1)在直肠癌中的表达情况及其与患者临床特征的关联性。方法选择2017-01~2018-08于该院手术切除并明确诊断为直肠癌的组织样本56例,并选择其对应的癌旁组织样本56例。采用免疫组化染色技术检测样本PFTK1的表达情况,分析直肠癌组织PFTK1表达情况与患者临床特征的关联性。结果直肠癌组织PFTK1高表达40例(71.43%),癌旁组织PFTK1高表达18例(32.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织PFTK1高表达组(40例)与PFTK1低表达组(16例)在临床分期、N分期及T分期的分布情况方面存在显著差异(P<0.05)。另外,高表达组有淋巴结转移及术前癌胚抗原(CEA)>5 ng/ml的发生率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PFTK1在人直肠癌中的表达升高,并且PFTK1的高表达情况与患者的直肠癌的临床分期、N分期、T分期及淋巴结转移情况和术前CEA水平存在关联性。     

Diversin在结直肠癌中表达及与临床病理因素的关系

目的研究Diversin在结直肠癌组织中的表达及与临床病理因素的关系。方法收集沈阳医学院附属中心医院病理科结直肠癌蜡块组织51例及配对的癌旁组织,采用EnVision两步法检测Diversin在结直肠癌组织及癌旁组织中的免疫组织化学表达。结果 Diversin在结直肠癌组织阳性表达率(80.39%)明显高于癌旁组织(9.80%),且Diversin在不同分化程度,临床分级,淋巴结转移的结直肠癌患者中差异有统计学意义(P0.05)。结论 Diversin在结直肠癌中高表达,并且与结直肠癌患者的分化程度、临床分级、淋巴结转移有关,可能成为结直肠癌诊治的生物学标记物。     

WWOX基因在乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的研究WWOX基因在正常乳腺组织和乳腺癌中的表达与临床意义。方法采用免疫组化Power Vision两步法检测正常乳腺组织或纤维腺瘤、乳腺原位癌、浸润性乳腺癌中WWOX的表达情况。结果WWOX在正常乳腺组织和纤维腺瘤中的表达明显高于乳腺原位癌和浸润性乳腺癌(P均0.01)。结论WWOX起抑癌基因的作用,在乳腺癌中表达降低或缺失,提示其在乳腺癌的发生发展中起重要作用。     

小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶1介导糖尿病性血管内皮细胞损伤修复的研究

目的利用小泛素相关修饰体(SUMO)特异性蛋白酶1(SENP1)解离过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的小泛素样修饰蛋白1(SUMO1)修饰。方法人脐静脉内皮细胞培养传代后分对照组、高糖组及SENP1组;Western blot法检测SENP1、SUMO1、PGC-1α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平;实时荧光定量PCR检测线粒体转录因子A(TFAM)、核呼吸因子2α(NRF-2α)和雌激素受体相关受体α(ERRα)的mRNA表达;ELISA测定乳酸脱氢酶(LDH);细胞划痕愈合方法、Transwell方法和体外血管模拟形成实验分别检测细胞自愈、迁移和形成血管拟态的能力。结果与对照组比较,高糖组共价SUMO1、PGC-1α和活化Caspase-3蛋白表达明显升高,SENP1蛋白表达明显降低,TFAM、NRF-2α和ERRα的mRNA表达明显降低,细胞划痕修复能力及模拟血管形成能力下降(P<0.05,P<0.01)。与高糖组比较,SENP1组SENP1蛋白表达明显升高,共价SUMO1、PGC-1α和活化Caspase-3蛋白表达明显降低,TFAM、NRF-2α和ERRα的mRNA表达明显升高,细胞划痕修复和迁移能力及模拟血管形成能力明显改善(P<0.05,P<0.01)。对照组、高糖组和SENP1组细胞上清液中LDH水平比较,差异有统计学意义[(24.66±6.39)ng/ml vs(302.45±30.54)ng/ml vs(174.08±21.03)ng/ml,P<0.01]。结论SENP1能够诱导PGC-1α发生去SUMO修饰,解除其对PGC-1α下游转录因子的抑制作用,改善线粒体功能,抑制高糖诱导的血管内皮细胞功能损伤作用。     

食管癌组织中Ebp1蛋白表达及意义

目的探讨Ebpc蛋白在食管癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化染色法检测220例食管癌患者的癌组织及其癌旁正常食管组织中Ebp1蛋白表达水平。结果食管癌组织中Ebp1蛋白阳性率显著高于正常食管组织（t=23．140,P=0．000）。单因素分析显示,与Ebp1mRNA表达高度相关的临床参数包括年龄、家族史、淋巴结转移、病理分级、浸润深度和临床分期;多因素分析结果表明,家族史、淋巴结转移、肿瘤体积、浸润深度、病理分级均是Ebp1蛋白表达的危险因素。结论Ebp1在食管癌发生、发展过程中起重要作用,可作为食管癌病情进展监测、转移潜能及预后评估方面的一个靶基因。     

LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化方法检测76例非小细胞肺癌中LKB1蛋白的表达情况。结果 LKB1蛋白在肺癌组织及癌旁正常肺组织中均有表达,LKB1在正常肺组织的阳性表达率显著高于癌组织(90.78%vs 65.79%,P<0.01)。LKB1蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达无显著性差异。LKB1蛋白在高分化肿瘤中的表达阳性率明显高于中-低分化肿瘤(81.82%vs53.49%,P<0.05)。LKB1蛋白在无淋巴结转移组的阳性表达率明显高于淋巴结转移阳性组(89.29%vs 52.08%,P<0.01)。结论 LKB1蛋白的低表达与肺癌的发生有关,并且影响肿瘤的分化及淋巴结转移,可能影响肺癌的预后。     

Expression and clinical significance of BDH1 in liver cancer

Liver cancer is a deadly disease with generally poor patient outcomes. BDH1 is a key enzyme that regulates the metabolism and synthesis of ketone bodies. This study sought to explore the prognostic relevance of BDH1 mRNA expression in liver cancer.We utilized the Cancer Genome Atlas datasets to analyze the relationship between BDH1 expression and clinical outcomes. We used Kaplan–Meier curves and Cox analyses to explore the relevance of BDH1 mRNA levels to patient prognosis. Further gene set enrichment analysis was conducted as a means of comparing differences in gene expression as a function of BDH1 expression.Liver cancer samples exhibited significantly decreased BDH1 mRNA expression, and that this downregulation was correlated with a number of clinicopathological variables including gender, histologic grade, stage, TNM classification, and both overall and relapse-free survival. We further determined that BDH1 mRNA expression was an independent predictor of liver cancer patient prognosis. A subsequent gene set enrichment analysis found genes affected by BDH1 expression to be those enriched in pathways relating to MYC and wnt/β-catenin signaling.Our preliminary findings demonstrate for the first time that low expression of BDH1 mRNA is a potentially valuable independent prognostic indicator for liver cancer detection.