针刺对MCAO大鼠血SOD、MDA、GSH-PX的影响

研究针刺对大脑中动脉阻断(MCAO)所致局限性脑缺血大鼠血液超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的影响。采用穿线法阻断大脑中动脉复制大鼠脑缺血模型，研究针刺人中、内关以及曲池、足三里等穴位对大鼠血SOD、MDA、GSH—PX的影响，并与针刺地机、经渠穴位和假手术组对照。结果表明，针刺曲池、足三里组血液MDA含量降低；各针刺组血液中SOD、GSH—PX水平无明显改变。针刺曲池、足三里穴位可降低MDA的含量。     

亚低温对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α表达的影响

目的：探讨亚低温对大鼠急性脑缺血／再灌注损伤后神经功能及缺血脑组织中TNF—α表达的影响。方法：取健康成年雄性SD大鼠150只。随机均分为假手术组、脑缺血再灌注常温组、脑缺血再灌注亚低温组；根据再灌注时间不同，每组分别于再灌注8h，24h，3d，7d，30d各处死10只大鼠，并取其缺血脑组织，其中5只用于免疫组化染色，另外5只用于RT—PCR检测TNF—αmRNA。结果：脑缺血再灌注后，TNF—α阳性细胞数在再灌注1d时即达高峰，3d后迅速下降，再灌注7d时即降到较低水平，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α及其mRNA表达假手术组很弱，缺血再灌注后TNF—α及其mRNA在8h表达为顶峰，随后有所下降，但直到再灌注7d仍然保持相对高的表达水平，一个月基本恢复正常；其表达在亚低温组较常温脑缺血组有显著地下降（P〈0．05），但仍较假手术组高（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后TNF—α明显升高，应用亚低温可以降低TNF—α升高的程度；亚低温可以明显减少缺血再灌注后脑梗死的区域，并能明显改善缺血再灌注大鼠的神经功能。提示亚低温治疗对脑的保护作用有可能通过降低TNF—α水平来实现的。     

二巯丙磺钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨二巯丙磺钠 (Na DMPS)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :用复制大鼠 4 动脉阻断模型 ,观察脑缺血再灌注损伤的水份和钙含量变化及组织学和超微结构改变 ,以及Na DMPS脑室内给药 (icv)对上述指标的影响。结果 :脑缺血 2 0min ,再灌注 60min ,可造成脑水份 ,钙含量明显增加 ,组织形态学检查亦见缺血再灌注损伤。缺血前 2 0minicvNa DMPS 90 0 μg·kg 1,能显著降低脑水份和钙含量 ,逆转脑缺血再灌注损伤。结论 :Na DMPS对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

L-精氨酸、氨基胍和胍丁胺在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的: 观察L-精氨酸 (L-Arg)、氨基胍 (AG) 和胍丁胺 (AGM) 对大鼠局灶性脑缺血组织中一氧化氮 (NO) 含量的影响,探讨3种药对脑缺血再灌注损伤大鼠是否具有保护作用和NO在脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法: 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血 (MCAO) 模型,大鼠行为学改变用Longa评分标准来评价,血清NO浓度用酶标仪检测,脑内诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)用免疫组织化学方法测定。结果: 与假手术组相比,模型组、L-Arg组、AG组和AGM组在缺血再灌注12、24、72 h的NO含量均显著增加(P<0.05);与模型组相比,在缺血再灌注12 h,L-Arg组行为学评分显著降低(P<0.05),NO含量显著升高(P<0.05);在缺血再灌注24 h,AG组和AGM组行为学评分显著降低(P<0.05),NO含量也显著降低(P<0.05)。在缺血再灌注12、24、72 h,L-Arg组的iNOS阳性细胞数与模型组相比无显著差异(P>0.05);而AG组和AGM组则均显著低于模型组(P<0.05)和L-Arg组(P<0.05)。结论: 脑缺血再灌注损伤后血清NO和海马内iNOS的表达随时间有动态变化。L-Arg在术后12 h、AG和AGM在术后24h对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠有保护作用。     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤血清IL-8的影响

目的 :研究三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤血清IL - 8的影响。方法 :线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断 (middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)局灶性脑缺血模型 ,缺血 2h ,再灌注 3h ,放免法测定血清IL - 8的含量。结果 :5 0mg/kg-1ip ,qd× 7d能降低大鼠脑缺血再灌注后血清IL - 8的含量。结论 :三七总皂苷通过降低大脑缺血再灌注后血清IL - 8的产生和释放 ,对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

丹参酮ⅡA保护脑缺血再灌注损伤的蛋白组学机制研究

目的 建立大脑缺血再灌注（I/R）损伤小鼠模型，探讨丹参酮ⅡA(Tanshinone IIA)对其神经保护作用及可能的蛋白组学机制。方法 将70只C57BL/6N雄性小鼠随机分为假手术组、缺血再灌注损伤模型对照组、丹参酮ⅡA治疗组。模型组采用大脑中动脉栓塞法（tMCAO）制作脑I/R损伤模型，丹参酮ⅡA治疗组采用10 mg/kg丹参酮ⅡA腹腔注射长时程干预28 d，进行神经功能评分及脑梗塞体积测定，取损伤半侧脑组织进行蛋白组学检测。结果 丹参酮ⅡA治疗可以降低脑I/R损伤后的神经功能评分，减少脑梗塞面积；蛋白组学分析显示丹参酮ⅡA治疗组与模型组比较，有109个差异蛋白表达，模型组与假手术组比较，有168个差异蛋白表达，3组比较差异表达蛋白45个，丹参酮ⅡA治疗后蛋白表达谱差异主要与脂质代谢调节、铁代谢等蛋白水平相关。结论 丹参酮ⅡA能保护脑缺血再灌注损伤，其长时程保护作用机制可能与调控脂质代谢及铁代谢等多个通路的共同作用有关。蛋白组学特征为研究丹参酮ⅡA保护脑缺血再灌注损伤的分子基础提供了一定的科学依据。     

异丙酚对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激的影响及作用机制

目的 探讨异丙酚对脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠的神经保护作用及机制。方法 30只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)及异丙酚组，每组10只。采用Zea Longa评分评估神经功能损伤；HE染色观察大鼠大脑缺血区形态结构；流式细胞仪与TUNEL检测海马神经元凋亡率；免疫荧光检测葡萄糖调控蛋白78 (GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达；Western blot检测脑组织内质网应激相应蛋白p-PERK、p-EIF-2a、ATF4和CHOP的表达。结果 与Sham组相比，I/R组大鼠神经功能评分明显升高、海马神经元凋亡率显著升高、p-PERK、p-eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达明显上调；给予异丙酚治疗后，神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率均显著降低，p-PERK和p-eIF2α、ATF4和CHOP蛋白的表达降低。结论 异丙酚通过抑制p-PERK-p-elF2α-ATF4-CHOP通路和内质网应激保护脑缺血再灌注损伤大鼠的脑神经。     

姜黄素对脑缺血再灌注模型大鼠的神经保护作用及其机制

目的:观察姜黄素对脑缺血再灌注大鼠模型的神经保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠随机分为3组:模型组、姜黄素组和假手术组,模型组采用血管内线栓阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,姜黄素组在缺血前1h腹腔注射姜黄素200mg/kg,随后每12h腹腔注射姜黄素60mg/kg(共5次)。再灌注后3h、24h和72h测定脑组织含水量、伊文斯蓝(EB)含量(反映血脑屏障破坏情况),免疫印迹法测定脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平。结果:脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织含水量及EB含量增加,MMP-9高表达。姜黄素治疗能够减轻神经功能损伤,降低脑组织含水量和EB含量,并降低MMP-9表达水平(P<0.01)。结论:姜黄素通过降低脑缺血再灌注大鼠MMP-9表达水平及血脑屏障通透性,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

参附注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Nrf2信号通路的影响

目的:探讨参附注射液治疗在大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其对Nrf2信号通路的影响。方法:将68只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、缺血再灌注损伤加参附注射液(8 mg/kg)治疗组,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,再灌注后24 h对大鼠进行行为学评分后处死并取脑,采用免疫印迹法检测参附注射液对Nrf2、HO-1、NQO1和cleaved-caspase-3蛋白表达的影响,尼氏法检测脑缺血再灌注损伤后的神经元损伤程度。结果:参附注射液治疗可以显著增加核内Nrf2蛋白的表达(P0.05),显著增加脑缺血再灌注损伤围脑组织中HO-1、NQO-1的表达量(P0.05),明显减少cleaved-caspase-3蛋白的表达和受损神经元的个数,显著改善神经功能评分(P0.05)。结论:参附注射液可以通过上调Nrf2信号通路从而在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用。     

脑脉宝对大鼠脑缺血再灌注后血液流变性及血小权形态的影响

脑缺血再灌注损伤后存在高粘滞血症、红细胞变形性(ED)降低[1]、脑血流瘀滞、循环阻力增高及脑微循环障碍. 脑脉宝系根据祖国传统医学"气为血之帅, 血为气之母", "治风先治血, 血行风自灭"的理论和现代对缺血性脑血管疾病临床与药理研究成果研制而成的中药复方制剂, 本实验通过观察其对大鼠脑缺血再灌注损伤后血液流变性和血小板表面形态的影响, 探讨其对脑缺血再灌注损伤保护的作用机理.     

大鼠急性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性变化的实验研究

目的探讨一氧化氮和一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制。方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型，观察血清及脑组织NO含量和NOS活性的变化。结果脑缺血45min再灌注2h后血清及脑组织中NO含量及NOS活性增加，再灌注8h达高峰。结论NO及NOS在急性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用。     

星形胶质细胞条件培养液对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的作用

目的：探讨星形胶质细胞(Ast)条件培养液(ACM)对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的影响。方法：分离纯化培养大鼠大脑皮质Ast和神经元,体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,用ACM培养损伤后的神经元,测定其神经元的活性、存活率、死亡率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量。结果：ACM能使脑缺血再灌注损伤神经元的活性和存活率明显提高,使死亡率、LDH的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量显著降低。结论：(1)体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的变化具有一定的规律性;(2)ACM对受损的神经元具有重要的保护和修复作用;(3)Ast在脑缺血预适应中发挥重要的作用。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质 caspase-9、脑红蛋白表达和过氧化损伤的影响*

目的：探讨不同浓度半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）对大鼠损伤大脑皮质组织caspase-9 和脑红蛋白（NGB） 的表达、氧化损伤和脑组织形态学的影响。方法：大鼠按照随机数字表分为假手术组（Sham 组）、缺血再灌注组 （I/R 组）、CysC 低、中、高浓度组。线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血2h 再灌注24 h 后行H-E 染色,观察脑组织形态学变化;免疫组织化学法检测caspase-9 的阳性细胞数;免疫组织荧光法检测皮质神经元 NGB阳性细胞数;免疫印迹检测脑皮质组织中caspase-9 蛋白的表达。羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力, 化学比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）含量。结果：与 I/R 组相比,CysC 低、CysC 中浓度组caspase-9 表达较I/R 组明显减少;而CysC 高浓度组caspase-9 的表达明显升 高,与I/R 无明显差别。CysC 低、CysC 中浓度组caspase-9 阳性细胞数较I/R 组明显减少,NGB阳性细胞数较I/R 组显著增多,SOD和GSH-PX活力升高,MDA含量下降;而CysC 高浓度组caspase-9 阳性细胞数增多,NGB阳 性细胞数减少,SOD和GSH-PX活力降低,MDA含量升高;CysC 高浓度组与I/R 组相比,差异无统计学意义。结论： CysC 低、中浓度可能通过上调NGB的表达,下调caspase-9 的表达,减轻脑缺血再灌注后的自由基损伤。而浓度 过高则作用相反。     

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分、氧化损伤和形态学的影响

目的探讨丁苯酞(NBP)预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分、氧化损伤和形态学的影响。方法 90只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(IR)、NBP预处理低剂量组(NBPⅠ)、NBP预处理中剂量组(NBPⅡ)和NBP预处理高剂量组(NBPⅢ),每组18只,制造模型前7d开始灌胃给药,1次/d。线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注24h后进行神经功能缺损评分;2,3,-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑组织梗死的情况;苏木素-伊红(HE)染色显微镜下观察脑组织形态学变化;采用羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,化学比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量。结果 (1)Sham组神经功能缺损评分为零,脑组织无梗死情况发生,神经元形态规则,脑组织中SOD、GSH-PX活性和MDA含量正常。(2)与IR组比较,NBP预处理各组大鼠神经功能评分显著降低(均P0.01),NBPⅠ、Ⅱ、Ⅲ组神经功能评分依次递减(均P0.05)。(3)与IR组比较,NBP预处理各组脑组织梗死体积依次减小(均P0.05),神经元损伤减轻。(4)NBP预处理各组脑组织中SOD、GSH-PX活性明显升高,MDA含量显著减少(P0.01);NBPⅠ、Ⅱ、Ⅲ组SOD、GSH-PX活性依次递增,MDA含量依次递减(均P0.05)。结论丁苯酞预处理可上调SOD、GSH-PX活性,降低MDA含量,减小脑梗死体积,减轻神经元损伤,发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠的预防性保护作用。     

脑缺血再灌注大鼠脑线粒体NO的生成及NOS活性的改变

目的和方法:在局部脑缺血再灌注大鼠模型上,于单纯缺血2 h及再灌30 min、2 h、4 h,分离脑线粒体,检测其内NO的生成以及NO合酶(NOS)活性的变化。结果:脑缺血时线粒体呼吸控制率(RCR)显著下降,再灌4 h稍有恢复。与此相对应,脑线粒体NO生成显著增加,再灌后随时间逐渐减少,4 h接近正常对照水平;脑缺血显著增加了脑线粒体总NOS活性,再灌后逐渐减弱,在所观察的时间范围内,仍显著高于对照水平,而iNOS活性无明显变化,总NOS活性变化主要取决于cNOS活性的改变。结论:脑缺血再灌过程中,脑线粒体中NOS/NO系统激活可能参与了脑组织缺血再灌注损伤。     

缓激肽选择性增加局部脑缺血大鼠血脑屏障的通透性

目的　研究颈动脉灌注小剂量缓激肽对缺血后血脑屏障通透性的影响及机制。方法　免疫组化分析正常脑组织的缓激肽B2受体所在。大鼠大脑中动脉结扎 1h或 2h再灌流 1h。用放射自显影方法检测缓激肽对血脑屏障通透性的变化。WesternBlot方法检测bNOS ,iNOS和B2受体。NOS检测盒检测NOS的活性。结果　正常脑组织毛细血管内皮未见B2受体表达 ,在神经细胞上发现B2受体的表达。缺血 2h再灌流1h缓激肽灌注缺血区血脑屏障通透性显著增加。WesternBlot结果提示 ,在缓激肽灌注组和对照组间 ,缺血皮质区bNOS和B2受体没有明显变化 ,各组中均未检测出iNOS。缓激肽灌注组的NOS活性显著高于对照组。结论　正常脑组织毛细血管内皮未表达B2受体 ,神经细胞上可见B2受体的表达。灌注小剂量缓激肽能选择性增加局部脑缺血大鼠血脑屏障的通透性     

金属硫蛋白对培养神经细胞迟发性损伤的作用和一氧化氮的表达

本文以新生大鼠原代培养皮质神经元为实验材料，造成迟发性神经元损伤模型．在不同时程内，测试培养液中的细胞乳酸脱氢酶漏出量和用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核着苷酸脱氢酶染色反应，观察培养细胞中一氧化氮合酶的表达水平．结果表明，缺血组在缺血与再灌流中，细胞乳酸脱氢酶漏出量明显高于对照组，差异显著（Ｐ＜０．００１）．一氧化氮合酶阳性神经元数量在缺血组的缺血时即明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），再灌流后一氧化氮合酶表达仍然强烈，与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）．当损伤细胞再灌流时，同时加入金属硫蛋白后，显示一氧化氮合酶表达减弱，和缺血组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１），细胞乳酸脱氢酶漏出量在再灌流后的早期近似于对照组．结合文献和本实验结果提示：在迟发性神经元损伤形成过程中一氧化氮起着重要作用；金属硫蛋白对脑缺血后迟发性神经元损伤有一定保护作用，是一种细胞保护剂，可望用于临床，控制缺血再灌流损伤。     

Localization of inducible nitric oxide synthase to mast cells during ischemia/reperfusion injury of skeletal muscle

Nitric oxide contributes to tissue necrosis after ischemia-reperfusion (IR). A biochemical and immunohistochemical study was made of the amounts and localization of both Ca++-independent nitric oxide synthase (NOS) II and Ca++-dependent (NOS I and NOS III) in rat skeletal muscle after ischemia and 0.5, 2, 8, 16, and 24 hours reperfusion. NOS II was not detectable in control muscle or during ischemia, was first detected after 2 hours reperfusion, increased further by 8 hours, and remained elevated at 24 hours. Both NOS II and nitrotyrosine, a marker of peroxynitrite formation, were localized exclusively to mast cells except after 24 hours reperfusion when some macrophages and neutrophils also showed positive immunoreactivity. Mast cells underwent extensive degranulation during reperfusion. NOS I was not detected in injured or control muscle. The level of NOS III, which was localized to the endothelium of blood vessels of all sizes in control muscle, decreased progressively during ischemia and reperfusion to reach undetectable levels after 16 hours reperfusion. These findings indicate that most of the nitric oxide formed during IR injury is generated by NOS II located almost exclusively in mast cells.     

9602方对脑缺血再灌小鼠脑能量代谢的影响

目的:观察9602方对脑缺血再灌小鼠脑能量代谢的影响。方法:复制小鼠脑缺血再灌损伤模型,应用核磁共振(NMR)技术和高效液相色谱(HPLC)仪,检测小鼠脑能量代谢的变化。结果:①NMR波谱显示,对照组和"9602"组缺血10min时,磷酸肌酸(PCr)峰显著性下降的同时无机磷(Pi)峰显著性上升,两组的PCr和Pi改变基本一致。不同之处在于:再灌后对照组小鼠PCr继续缓慢下降,至再灌10min时维持在低水平(55.50±14.94);而"9602"组再灌后,缺血时下降的PCr峰则开始回升,至再灌10min时为76.72±13.37,两组相比有显著性差异(P＜0.05)。再灌后对照组Pi峰则持续上升,至再灌10min时为109.76±55.41;而"9602"组在缺血时已升高的Pi峰则回降,至再灌10min时为79.99±30.28,但两组相比无统计学意义。在整个低血压缺血再灌全过程中,ATP的3个峰(α、β、γ)均无明显变化。②HPLC仪检测显示,"9602"组脑细胞能荷值(0.2884±0.0552)明显高于对照组(0.1104±0.0343),P＜0.01。结论:9602方能改善脑缺血再灌所诱导的细胞和组织能量代谢的障碍。     

注射用内给氧对缺血再灌注损伤兔肝脏SOD、GSH-PX活性和MDA含量的影响

目的 探讨注射用内给氧对缺血再灌注（ischemia／reperfusion，I／R）损伤兔肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法 48只健康新西兰长耳大白兔随机分为四组：假手术组（A组）、缺血再灌注组（B组）、缺血再灌注＋周围静脉注射用内给氧组（C组）、缺血再灌注＋肝动脉注射内给氧组（D组），每组12只。采用Pringle氏法建立肝脏I／R模型。比较四组大白兔缺血再灌注后1、2、24h肝组织的抗氧化能力（SOD、GSH-PX）、脂质过氧化产物丙二酮（MDA）含量。结果 与A组比较，B、C、D三组肝组织SOD、GSH．PX活力降低，MDA含量增高（P〈0．05）；与B组比较，C、D两组肝组织SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低（P〈0．05）；C组与D组比较，各参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 注射用内给氧对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，可降低MDA含量，提高SOD活力和GSH-PX活性。