遗传修饰的毒素用于疫苗和佐剂

迄今 ,疫苗的研制仍以传统的方法进行 ,例如 ,细菌毒素用传统的化学方法脱毒。生物技术和分子生物学的发展使人们对几种细菌毒素的结构 -功能关系有了很好的认识。有赖于此 ,细菌毒素的遗传减毒成为可能。依此方法 ,已产生了遗传脱毒的百日咳毒素 ( PT)。这种分子在婴儿中有高度的免疫原性和效力 ,现已成为百日咳无细胞菌苗 ( Pa)的组分。相同的细菌毒素分子脱毒策略已应用于霍乱毒素 ( CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素 ( L T)。当去除毒性的毒素突变体与几种抗原结合接种于粘膜部位时 ,突变体表现出高度的免疫原性和强烈的佐剂性。这些成功的结果表明 ,研制更强有力、更安全的疫苗是可行的     

无细胞百日咳疫苗特异性毒性检测方法现状及展望

 百日咳毒素是百日咳杆菌重要的保护性抗原,经化学方法脱毒成为百日咳类毒素后制成的无细胞百日咳疫苗（acellular pertussis vaccine,APV）具有残余毒性和毒性逆转的可能性,所以建立特异性毒性检测方法对于保证APV的安全性是十分必要的。此文就国内外APV特异性毒性检测方法的现状做一综述,并结合近几年国外研究的毒性检测新方法进行展望。     

含用DNA重组方法获得的百日咳毒素的百日咳无细胞菌苗在婴幼儿中的免疫原性

作者报道了由用DNA重组方法获得的无毒性百日咳毒素（PT－9K／129G）构成的无细胞菌苗对婴幼儿的安全性和兔疫原性。研究表明PT－9K／129G比化学脱毒的PT分子更安全、更具有兔疫原性。无细胞菌苗应能诱     

新一代百日咳无细胞菌苗和重组菌苗

４０年代研制的百日咳全细胞菌苗成功地控制了百日咳流行。对这种菌苗的反应原性的担心导致无细胞菌苗的研制，日本应用无细胞菌苗作常规免疫，证明它安全，有效而且副作用较小。具有不同抗原组分和浓度的新型菌苗正在进行临床试验，以进一步提高无细胞菌苗的效力。用某些化学方法脱毒的百日咳类毒素的毒性仍可恢复，为了解决这个问题，研制了含有遗传学方法脱毒的百日咳毒素（ＰＴ）的重组百日咳菌苗。Ｓ１基因的定位诱变能消除ＰＴ     

新一代百日咳无细胞菌苗和重组菌苗

40年代研制的百日咳全细胞菌苗成功地控制了百日咳流行。对这种菌苗的反应原性的担心导致无细胞菌苗的研制。日本应用无细胞菌苗作常规免疫,证明它安全、有效而且副作用较小。具有不同抗原组分和浓度的新型菌苗正在进行临床试验,以进一步提高无细胞菌苗的效力。用某些化学方法脱毒的百日咳类毒素的毒性仍可恢复,为了解决这个问题,研制了含有遗传学方法脱毒的百日咳毒素（PT）的重组百日咳菌苗。Sl基因的定位诱变能消除PT的ADP-核糖基转移酶活性、B寡聚物基因的突变能减少有丝分裂原和血凝活性。含有Sl Lys9Gly129 PT类似物的重组菌苗证明是安全的,反应原性较弱,免疫原性较强。     

戊二醛用于制备百日咳菌苗

Arya等认为百日咳全细胞菌苗中的戊二醛可促进抗体应答。作者在室温20～22℃用戊二醛与不同菌株的百日咳菌液作用,共制备了19批戊二醛灭活百日咳菌苗。其中10批为开始研究时制备的,所用戊二醛购自印度(Burgyone,India.);两年后又制备了9批,所用戊二醛是Wako精纯化学有限公司生产。两次研究结果非常相似。在Iida等的报告中,也观察到戊二醛用于脱毒百日咳菌的类似情况。Arya等认为虽然原材料(包括戊二醛)的质量控制是重要的,但是戊二醛在百日咳或其他的细菌毒素的灭活/脱毒中也许不起决定作用。用戊二醛对破伤风和白     

抗百日咳杆菌免疫力的血清学相关物

本文介绍了两项百日咳无细胞菌苗试验的血清学数据的分析结果，认为粘附素，菌毛和百日咳毒素抗体水平高与百日咳感染的可能性较低有关，与仅含有百日咳毒素或百日咳毒素和丝状血凝系组分的菌苗相比，含有百日咳抗原成分越多，百日咳无细菌菌苗就越有效。     

用ELISA法定量测定百日咳杆菌中的腺苷酸环化酶

产生于百日咳杆菌细胞质外的腺苷酸环化酶（AC）毒素作为候选百日咳无细胞菌苗已受到极大关注。从研制百日咳无细胞菌苗的观点出发,需要一种适宜的技术,以快速和准确地定量测定AC抗原。本文报告了使用竞争ELISA定量测定百日咳杆菌培养上清中的AC含量。     

百日咳无细胞菌苗:用裸鼠模型评价毒性回复

为评价百日咳无细胞菌苗的安全性,作者建立了一种动物模型,用以检测百日咳类毒素毒性回复。分别用经戊二醛脱毒的百日咳类毒素(GTA P类毒素)和福尔马林脱毒的百日咳类毒素(FP类毒素)免疫16克重雌性裸鼠和患白化病的雌性OF1小鼠,计数其白细胞到28天,作淋巴细胞增多促进活性试验。结果表明,每剂含GTAP类毒素12.5μg的吸附混合菌苗经不同程度稀释后,腹腔接种OF1小鼠,4周后用0.5μg毒素攻击,各免疫组小鼠均未发生淋巴细胞增多症,即使类毒素量少到1.56μg,其免疫小鼠的抗体应答     

基因脱毒的PT与FHA、69KDa联合的百日咳无细胞菌苗Ⅰ期临床试验

脱毒的百日咳毒素(PT)在全菌体菌苗中是主要成份,对儿童具有保护性,PT菌苗用化学处理灭活,此过程既降低分子的免疫原性,而且不可能完全排除毒性逆转的危险性,为避免这些问题,作者系用基因诱变,得到自然脱毒的PT,并将其与丝状血凝素(FHA)、69KDa蛋白制成一种新的菌苗,并进行Ⅰ期临床试验。新菌苗基因脱毒PT-9K/129G和FHA由     

白细胞介素12能增强百日咳无细胞菌苗的效力

作者曾用小鼠呼吸道感染模型证实,百日咳杆菌感染或百日咳全细胞菌苗免疫能诱导抗原特异性Th1细胞,且能完全抵御百日咳杆菌的气雾攻击,而用含脱毒百日咳毒素(PTd)、丝状血凝素(FHA)和69kDa外膜蛋白(pertactin)的无细胞菌苗免疫则诱导Th2细胞。     

百日咳杆菌外膜蛋白的提纯和保护力

最近的研究证明,百日咳全细胞菌苗（WCV）中的百日咳毒素（PT）、丝状血凝素和外膜蛋白复合物（OMC）在脑内（ic）试验（小鼠脑内保护力试验）中都显示有保护作用,并发现这些保护作用与某些毒力相关外膜蛋白（OMP）的存在有关。     

百日咳患者、健康者和百日咳类毒素接种者体内抗百日咳毒素IgG的亚类组成

作者用ELISA法分别检测了108份百日咳患者、128份健康者(85名儿童、43名成人)和13份经脱毒的百日咳毒素免疫的儿童血清中抗百日咳毒素(PT)IgG抗体及其亚类含量,旨在了解以上3种人群中抗PTIgG亚类构成的区别.108份患者血清取自75例百日咳患者.其中5份采自症状出现两周内血清,45份采自症状出现后2～5周内血清,其余54份采自症状出现5周后血清.128名健康者中有85名未接种过百日     

国际百日咳学术讨论会

1988年4月20～22日,来自24个国家的164位学者(其中包括两名中国代表)出席了由民主德国微生物学和流行病学协会在柏林组织召开的国际百日咳学术讨论会。会议讨论了百日咳杆菌的活性成份,百日咳杆菌的分子克隆技术和百日咳无细胞菌苗进展及评价。现将会议主要内容整理报告如下。百日咳毒素的抗原结构及其亚单位各国实验室对百日咳杆菌所含的许多抗原和毒素成份进行了大量研究和分析。这些活性物质可能在致病机理或在宿主对疾病反应方面起重要作用,其中包括:百日咳毒素     

甲醛处理对重组无ADP核糖基化百日咳毒素的粘膜和全身免疫原性的的影响

PT-9k/129G是百日咳毒素（PT）的一种无毒性定点诱变(S1亚基中的关键氨基酸被置换）突变体。它丧失了腺苷二磷酸（ADP）核糖基转移酶活性而保留了全毒素的四级结构及真核细胞结合等其他特性。PT-9K/129G已获准作为新型百日咳无细胞菌苗的一种组分。本文通过小鼠模型评价天然或甲醛处理的PT-9K/129G的粘膜及全身免疫原性。     

学龄儿童血清中的百日咳丝状血凝素抗体及其保护作用

百日咳毒素（PT）、丝状血凝素（FHA）和69kDa外膜蛋白（OMP）是诱导机体产生抗百日咳保护性免疫力的最重要的抗原。作者对1992年9～12月芬兰西南部农村一所小学的两个班（7～12岁）中爆发百日咳的情况进行了调查。这两个班共有学生39人,他们在婴儿期都接种了3针DTP,其中31人在2岁时又加强接种了1针。在出现首例百日咳     

重组百日咳菌苗的进展

为了捉高百日咳菌苗的安全性,在研制百日咳无细胞菌苗的基础上,科学家们又采用DNA重组技术,研制百日咳灭活毒素,全毒素与类全毒素已能在体外装配,并已进行人体临床试验.     

检测百日咳毒素活性的中国仓鼠卵巢细胞簇集法的建立和初步应用

目的  建立检测百日咳毒素（pertussis toxin,PT）活性的中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞簇集法,并将建立的方法应用于无细胞百日咳疫苗生产的质量控制。方法  将PT标准品系列稀释后与培养的CHO细胞混合,观察PT引起CHO细胞簇集的敏感度,并研究反应时间、反应溶液的pH值、缓冲液浓度、加样顺序等因素对PT引起CHO细胞簇集的影响。应用建立的方法检测百日咳疫苗生产过程中脱毒前后的PT活性及丝状血凝素和百日咳黏着素组分中残留的PT活性。    结果  PT使CHO细胞发生最佳簇集的理想反应时间是24 h,最适pH值是7~8,适宜氯化钠缓冲液浓度为0.15 mol/L,最优加样顺序是先加CHO细胞再加PT。建立的CHO细胞簇集法的检测敏感度为10 pg/ml PT,且重复性良好。结论  CHO细胞簇集法可用于PT活性检测。     

用遗传学方法灭活的百日咳毒素成分组成的百日咳无细胞菌苗对婴幼儿的安全性和免疫原性

作者用DNA重组技术制备了百日咳无细胞菌苗PT-9K/129G, 它是百日咳毒素(PT)的非毒性衍生物,与天然PT相比,只有两个氨基酸不同,但含有PT的完整免疫学特性。每剂为含15μgPT-9K/129G蛋白、0.05mg硫柳汞和0.5mg氢氧化铝的0.5ml盐溶液。动物模型及成人志愿者试验已证实,PT-9K/129G的安全性和免疫原性优于化学脱毒的PT。本文报道在儿童中进行PT-9K/129G     

学龄前儿童加强接种DTP后对百日咳菌苗的抗体应答和反应

作者把百日咳全细胞菌苗加入到白喉和破伤风类毒素（DT）中,给学龄前儿童加强注射,同时评估其临床效果和不良反应。 190名已接受过DTP基础免疫、并面临接受DT加强注射的4～5岁儿童被随机分成两组,分别接种DTP和DT。免疫后6周采静脉血,用ELISA测定抗百日咳毒素（PT）、丝状血凝素（FHA）、凝集原2、3（AGGS2、3）的IgG抗体,同时测定白喉和破伤风的抗毒素