Tca8113和BcaCD885对口腔癌靶向隐形顺铂聚乳酸纳米粒的敏感性研究

目的：观察口腔鳞癌细胞系（Tca8113和BcaCD885）对口腔癌靶向顺铂聚乳酸聚乙二醇纳米粒（CDDP—PLA—PEG—NP，或称隐形聚乳酸纳米）的敏感性，并与顺铂（CDDP）对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性进行对比观察。方法：用四唑盐显色法（MTr法）检测CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP在1～8d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性，计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果：CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用，其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论：经改型后的CDDP—PLA—PEG—NP对口腔鳞癌细胞Tca8113和BcaCD885仍有强大的杀伤作用，为以后进一步的体内实验提供了依据。     

平阳霉素-活性炭纳米微粒对口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885细胞体外的杀伤作用

目的探讨平阳霉素-活性炭纳米微粒（PYM-CH-NP）对人舌鳞癌细胞系Tca8113和颊鳞癌细胞系Bca-CD885的药物敏感性。方法采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测不同剂量的PYM-CH-NP和平阳霉素（PYM）在7个时间点（1～7 d）对Tca8113和BcaCD885的杀伤效应,计算各时间点2种剂型的半数抑癌率浓度值（IC50）、抑癌率和药物抗肿瘤作用强度的相对值（RAA）,选择药物作用后第5天观察量效关系。结果PYM-CH-NP和PYM对Tca8113和BcaCD885均有较强的抑癌作用,其抗癌效应与药物浓度和作用时间相关。结论改型后的PYM-CH-NP保留了PYM的抗癌活性,且具有缓释性,作用于肿瘤时可以维持周围有效的浓度和作用时间,有效地杀伤肿瘤细胞。     

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的:探讨人口腔鳞癌细胞系(Tca8113和BcaCD885)对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒(CuBE- PLA-NP)的敏感性。方法:用四唑盐显色法(MTT法)检测用不同剂量的CuBE-PLA-NP和CuBE在1~8 d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性,计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果:CuBE-PLA-NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论:经改型后的淋巴靶向CuBE-PLA-NP没有降低CuBE成份的抗癌活性,同时,由于CuBE-PLA-NP具有淋巴靶向性,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。     

钾离子通道阻滞剂4-AP 对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响

目的：检测4-氨基啶（4-AP）对 Tca8113细胞株增殖的影响。方法：采用 CCK-8法检测不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株12、24、48 h 后对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测各组细胞周期变化。采用 SPSS19．0软件对数据进行统计学分析。结果：随着4-AP 浓度的增加和干预时间的延长,Tca8113细胞形态发生改变。在浓度5～100 mmol／L 范围内作用于细胞12～48 h,4-AP 浓度和时间依赖性地抑制了 Tca8113细胞的增殖（P ＜0．01）。不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株24 h后,G0／G1期的细胞所占的比例显著升高（P ＜0．01）;S 期细胞所占的比例显著降低（P ＜0．01）;4-AP 阻滞 Tca8113细胞株于G0／G1期。结论：4-AP 可能通过调控细胞周期抑制 Tca8113细胞株的增殖对细胞株分布有影响。     

A型钾离子通道对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响

目的:探究A型钾离子(Potassium,K⁺)通道抑制后对舌鳞状细胞癌株(Tca8113)细胞的影响。方法:全细胞膜片钳技术记录和分析A型K⁺通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)对Tca8113细胞K⁺电流的影响;MTT检测A型K⁺通道对细胞增殖的作用。结果:在终浓度为2 mmol/L 4-AP作用下,A型K⁺电流的峰值从(267.04±13.84) pA降到(124.81 ±5.24) pA。在一定范围内,不同浓度4-AP能抑制Tca8113细胞在体外的增殖,且抑制程度随药物浓度和作用时间的增加而增强。结论:A型K⁺通道参与Tca8113细胞增殖的过程,且A型K⁺通道阻滞剂能抑制Tca8113细胞的增殖。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

口腔颌面部肿瘤

婴儿色素性神经外胚层瘤的临床病理观察；Tca8113和BcaCD885对口腔癌靶向隐形顺铂聚乳酸纳米粒的敏感性研究；放疗对舌鳞癌Tca8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响；VEGFR3在不同临床分期舌癌癌周淋巴管中的表达；转化生长因子α及其受体在腺样囊性癌中的表达及相互关系     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

汉防己甲素抑制口腔癌细胞增殖与β-catenin表达的研究

目的：研究汉防己甲素（tetrandrine ,TET）对口腔癌细胞Tca8113的作用及其对β?连环蛋白（β?catenin）蛋白表达的影响。方法应用CCK?8法检测不同浓度TET对Tca8113细胞作用不同时间后的影响;应用Western blot法检测TET作用前后β?catenin蛋白表达的变化情况;应用细胞免疫荧光法检测TET作用前后β?catenin蛋白的分布。结果随着TET浓度的增加,其对Tca8113的抑制率也不断增加（F=819.90,P<0.05）,半数有效抑制浓度（half maximal inhibitory concentration ,IC50）为64μmol/L;同时TET对Tca8113细胞的抑制呈时间依赖性。Western blot结果显示,在TET作用后β?catenin蛋白的表达下调,差异具有统计学意义（t=6.48, P<0.05）。细胞免疫荧光法检测结果显示,在空白组中β?catenin蛋白主要表达在细胞核内,而在TET作用后β?catenin蛋白主要表达在细胞膜和细胞质中,呈散在分布,细胞核内表达较少。结论 TET能显著抑制口腔癌细胞Tca8113的增殖,同时可影响β?catenin蛋白在Tca8113细胞内的分布。     

嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞增殖的影响

目的研究嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞Tca8113增殖及细胞周期的影响。方法体外培养Tca8113细胞,分别将不同稀释度（原液和4、16倍稀释）的嗜酸乳杆菌上清液、灭活菌液和无细胞提取物与Tca8113细胞共培养,采用倒置显微镜观察细胞形态并行细胞计数,磺酰罗丹明B（SRB）法测定细胞增殖率,流式细胞术分析嗜酸乳杆菌各组分对Tca8113细胞增殖及细胞周期的影响,激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）检测细胞内自由基和Ca2+含量。结果嗜酸乳杆菌各组分作用于Tca8113细胞48 h后,在倒置显微镜下观察,细胞由菱形、多角形、铺路石状变为细长形。细胞计数与SRB实验分析：在不同稀释度同一培养时间与不同培养时间同一稀释度培养条件下,嗜酸乳杆菌各组分均可明显抑制Tca8113细胞增殖,抑制力随稀释度增加而降低,随培养时间延长而增强。流式细胞术分析：嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后,细胞增殖指数降低（P<0.01）。CLSM检测：嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后细胞内自由基和Ca2+含量均升高（P<0.01）。结论嗜酸乳杆菌代谢产物、灭活菌液、无细胞提取物均可抑制Tca8113细胞增殖,可能与菌体及其代谢产物引起细胞内自由基含量增多、Ca2+超载有关。     

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的：研究中草药岩黄连脱氢卡维丁（Tetradehydroscoulerine，YHL－1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用，及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响，同时以TRAP—ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况，并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果：YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖，且随时间延长和药物浓度的增高，抑制作用增强。72h时，0．200、0．100、0．050、0．025 g／LYHL-1组细胞增殖抑制率分别为（64．1±1．5）％、（47．3±3．3）％、（35．6±5．0）％、（31．8±5．87）％。72 h时，0．100、0．050 g／L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组（P〈0．05）。结论：岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖，并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达，这可能是其抗舌癌的机制之一。     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

三苯氧胺对人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖抑制作用研究

目的：探讨三苯氧胺（Tamoxifen,TAM）对人舌鳞癌细胞系Tca8113的增殖抑制作用。方法：不同浓度TAM处理体外培养的人舌鳞癌细胞Tca8113,MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果：在浓度为1、2、5、10μmol／L时,TAM呈现出剂量依赖性抑制人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖作用。通过对三个不同浓度（2μmol／L、5μmol／L、10μmol／L）TAM实验组的抑制率进行比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,细胞抑制率与药物浓度呈正相关。细胞超微结构显示,药物浓度与细胞结构呈剂量依赖关系。结论：TAM可显著抑制人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖,其作用呈剂量依赖关系。     

shRNA干扰蛋白激酶D-2基因提高Tca8113对化疗药物的敏感性研究

目的 探讨蛋白激酶D（PKD）-2基因沉默对Tca8113细胞增殖、细胞程序性死亡及对化疗药物敏感性的影响。方法 构建针对 pkd-2基因的 shRNA干扰质粒及空载体对照组质粒,建立 pkd-2基因沉默的稳定细胞株;采用甲基噻唑基四唑（ MTT）方法检测 shRNA干扰后细胞株的增殖情况及对化疗药物的半数抑制质量浓度（ IC50）;采用流式细胞术检测 pkd-2基因沉默前后细胞程序性死亡率及对化疗药物的敏感性;采用免疫组化方法检测 pkd-2沉默后细胞中 P糖蛋白（ P-gp）的表达。结果 筛选并建立 pkd-2基因沉默的稳定细胞株;经 shRNA干扰后 Tca8113细胞的增殖速度与野生型细胞相比差异无统计学意义,但 IC50明显降低; pkd-2沉默后 Tca8113细胞程序性死亡率明显上升,且对化疗药物的敏感性显著提高;与野生型对照组 Tca8113相比较, shRNA-pkd-2基因沉默的 Tca8113经化疗药物诱导后 P-gp表达明显下降。结论 shRNA干扰技术特异性沉默 Tca8113中的 pkd-2基因,促进了肿瘤细胞的程序性死亡,降低对化疗药物的IC50,并明显提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,同时降低了P-gp的表达。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响

目的 研究醋酸棉酚（ GAA）对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响和对人类错配修复基因 1（hMLH1）甲基化水平的影响,初步探讨其抗肿瘤机理。方法 应用 MTT法检测 GAA对Tca8113细胞生长的影响;应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nMSP）检测 Tca8113细胞在 GAA作用 48、72 h后hMLH1基因甲基化状态的改变情况。结果 MTT检测显示,作用 24~72 h,GAA对Tca8113细胞生长具有抑制作用;nMSP检测显示,以终浓度 30、15 μmol•L-1的GAA作用于 Tca8113细胞 48、72 h后, hMLH1基因甲基化条带的平均光度值降低,与未经药物处理组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GAA能抑制舌鳞癌细胞的生长,并能降低 hMLH1基因的甲基化水平。 GAA去甲基化作用可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一。     

β-榄香烯对Tca8113细胞株诱导分化的研究

目的：研究β-榄香烯对Tca8113（口腔舌鳞癌细胞株）细胞株诱导调亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后的亚细胞结构。结果：β-榄香烯对Tca8113细胞株有明显的抑制作用。流式细胞仪分析不同的药物浓度、不同的作用时间细胞凋亡的发生均有显著意义，Gl期细胞减少，S期细胞增多。亚细胞结构细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：β-榄香烯能抑制Tca8113细胞增殖，促进细胞凋亡，阻止S期细胞过程。     

细胞周期蛋白D1反义寡核苷酸调控联合顺铂抑制口腔鳞癌耐药细胞的研究

目的通过体内外实验探讨细胞周期蛋白（cyclin D1）与舌鳞状细胞癌对顺铂（CDDP）耐药细胞系（Tca8113/CDDP）耐药的相关性.方法通过脂质体将cyclin D1正义、反义寡核苷酸序列分别导入Tca8113/CDDP细胞内.用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染细胞系和耐药细胞系体外生长增殖情况及对顺铂的敏感性.将被转染的细胞及Tca8113/CDDP细胞接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,共18只,每组6只.给予顺铂腹腔注射治疗,观察移植瘤体积变化,绘制生长曲线;称取瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织病理学变化.结果转导mRNA 3＇cyclin D1反义寡核苷酸的Tca8113/CDDP细胞在动物体内外生长明显受到顺铂的抑制;裸鼠皮下移植瘤抑瘤率达74%（P＜0.05）,移植瘤重量较对照组和转导正义寡核苷酸序列组差异均有统计学意义（P＜0.05）;光镜下可见反义寡核苷酸组移植瘤坏死明显.结论cyclin D1基因的反义调控联合顺铂能抑制Tca8113/CDDP细胞的生长能力及体内移植瘤的生长.研究结果提示：抑制cyclin D1可能增加口腔鳞状细胞癌对顺铂的敏感度.     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

盐酸小檗碱抗假丝酵母菌及抗肿瘤活性研究

目的:研究盐酸小檗碱抗假丝酵母菌及抗肿瘤活性,为临床用药提供依据.方法:依据NCCLS的M27-A2标准方案测定标准株对盐酸小檗碱的药物敏感性;MTT 法测定盐酸小檗碱对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测盐酸小檗碱对人舌癌细胞Tca8113凋亡率的影响.结果:盐酸小檗碱具有抗假丝酵母菌活性,能抑制Tca8113细胞生长;浓度为160、80、40、20、10 μg/ml的盐酸小檗碱作用于Tca8113 细胞48 h后凋亡率分别为32.3%、24.6%、13.3%、6.35%、6.51%,对照为8.46%.结论:盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)体外具有抗假丝酵母菌活性,且能抑制舌癌细胞Tca8113的生长,诱导舌癌细胞Tca8113的凋亡.