胃癌组织端粒酶逆转录酶基因的表达及意义

绝大多数正常体细胞中端粒酶都处于失活状态,而不同部位恶性肿瘤标本中几乎都可以检测到端粒酶活性,总表达率在85%,端粒酶可能是目前已知最为广谱的恶性肿瘤分子标记物。     

胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶mRNA表达及其临床意义

目的 研究胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,并探讨其临床意义.方法 应用TaqMan实时定量RT-PCR法检测58例患者、20名健康对照者外周血hTERT mRNA的表达,随访2年.结果 胃癌患者外周血hTERT mRNA阳性率为55.17%,显著高于健康对照组(P<0.001);hTERTmRNA表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和临床分期相关,其中淋巴结转移和远处转移是影响hTERT mRNA表达的独立因素;近期疗效无效的患者hTERT mRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者(P=0.003).化疗前hTERTmRNA阳性与阴性患者的1年生存率分别是28.13%和76.92%.结论 外周血hTERT mRNA可作为检测胃癌患者微转移的分子标志,定期监测有助于评估化疗疗效和预测预后.淋巴结转移和远处转移与hTERT mRNA表达密切相关.     

端粒酶在食管癌组织中的表达及临床意义

目的 :研究食管癌组织中端粒酶活性检测的临床意义 ,探讨其作为食管癌诊断和预后评价指标的可行性。方法 :采用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplicationpro tocal,TRAP) PCR ELLISA方法检测 42例食管癌手术切除组织及相应的癌旁组织中端粒酶的活性 ,并以 16例食管良性病变作为对照。结果 :42例食管癌组织中端粒酶阳性率为85 7% ( 3 6/4 2 ) ,癌旁组织为 11 9% ( 5 /4 2 ) ,16例食管良性病变组织中未检出端粒酶阳性。食管癌组织端粒酶水平明显高于癌旁组织(P <0 0 1)及良性病变组织 (P <0 0 1)。端粒酶活性随细胞分化程度、临床分期有升高趋势 ,但差异无统计学意义 ,伴淋巴结转移食管癌组织中端粒酶阳性率明显高于不伴淋巴结转移组 ,P <0 0 1。结论 :端粒酶的激活与食管癌的发生发展密切相关。端粒酶可作为食管癌辅助诊断、预后判断的标志物之一 ,并为食管癌的基因治疗提供理论依据     

胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶mRNA表达及其临床意义

目的研究胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA的表达,并探讨其临床意义。方法应用TaqMan 实时定量RT-PCR法检测58例患者、20名健康对照者外周血hTERT mRNA的表达,随访2年。结果胃癌患者外周血hTERT mRNA阳性率为55.17%,显著高于健康对照组（P＜0.001）;hTERT mRNA表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和临床分期相关,其中淋巴结转移和远处转移是影响hTERT mRNA 表达的独立因素;近期疗效无效的患者hTERT mRNA 的阳性率显著高于近期疗效有效的患者（P=0.003）。化疗前hTERT mRNA阳性与阴性患者的1年生存率分别是28.13%和76.92%。结论外周血hTERT mRNA可作为检测胃癌患者微转移的分子标志,定期监测有助于评估化疗疗效和预测预后。淋巴结转移和远处转移与hTERT mRNA 表达密切相关。     

端粒酶逆转录酶及VEGF在卵巢肿瘤中的表达

目的探讨卵巢肿瘤组织中端粒酶逆转录酶(TRT)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及相关性.方法对89例卵巢肿瘤(良性肿瘤44例、交界性肿瘤9例、恶性肿瘤33例)采用免疫组织化学S-P法测定其TRT和VEGF的表达,并进行相关分析.结果 TRT和VEGF在不同卵巢肿瘤组中的表达明显各异,两者在良性组、交界性组、恶性组中的阳性率分别是9.1%、55.6%、83.3%和11.4%、66.4%、86.1%.它们的阳性表达强度亦随着肿瘤的恶性度增高而逐渐增强;各组比较均有显著性差异(P＜0.01).相关分析显示TRT和VEGF的表达密切正相关(P＜0.01).结论 TRT和VEGF在卵巢肿瘤组织中的高表达与恶性度关系密切,二者的同时检测可作为判断卵巢肿瘤恶性度的重要指标.     

TESTIN基因在原发性胃癌组织中的表达及临床意义

背景与目的:我们既往研究发现胃癌在染色体7q31区域D7S486位点存在高频杂合性缺失.人类TESTIN(TES)基因是一个定位在染色体7q31的候选抑癌基因.本研究旨在检测胃癌组织中TES基因的表达,并分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测140例胃癌组织及对应癌旁正常组织中TES的表达;应用Western blot法检测50例胃癌组织及对应癌旁正常组织中TES蛋白的表达.同时分析TES的表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果:在140例标本中,68.6%(96/140)的胃癌组织TES mRNA表达量比对应癌旁正常组织下降;免疫组化结果显示TES在22.9%(32/140)的胃癌组织中阳性,而在癌旁正常组织中有85.7%(120/140)阳性.在50例标本中,Western blot结果显示72.0%(36/50)的胃癌组织TES蛋白表达量比对应癌旁正常组织下降.统计分析结果发现,TES的表达与胃癌分化程度有关(r=0.178,P=0.035),TES阴性患者的5年生存率差.结论:TES在胃癌中的表达量显著下降,而且与分化程度和患者预后相关,可能成为判断胃癌预后的一个有价值的分子标志.     

人端粒酶逆转录酶mRNA在胃癌组织中的定量表达及其与胃癌预后的关系

目的 探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在胃癌组织中的表达,及其与胃癌生物学行为和根治术后患者预后的关系.方法 应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例胃癌根治性切除术后患者的肿瘤组织和阴性切缘组织中hTERT mRNA的表达量,对hTERT mRNA表达量与患者的临床病理参数(年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型、组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、pTNM分期及生存期)进行单因素分析,采用Cox模型进行胃癌患者生存的多因素分析.结果 hTERT mRNA在阴性切缘组织中的表达量为11.37±2.15,在胃癌组织中的表达量为16.98±3.56,差异有统计学意义(P<0.05).胃癌组织中hTERT mRNA的表达量与组织学分级、浸润深度、pTNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与胃癌患者的生存期呈负相关(P<0.01).结论 胃癌组织中hTERT mRNA高表达表明胃癌恶性程度较高且病期较晚,检测胃癌组织中hTERTmRNA的表达水平有助于对胃癌患者的预后做出更准确的判断.胃癌组织中hTERT mRNA的表达量、肿瘤浸润深度和pTNM分期是影响胃癌患者预后的重要因素.

Abstract：

Objective By quantitative detection of telomerase expression, we investigated the relationship between telomerase expression and malignant behavior and prognosis in gastric carcinoma.Methods A real-time quantitative RT-PCR (RQ-PCR) was used to quantify the hTERT mRNA copy numbers in 89 samples of gastric carcinoma and corresponding non-cancerous tissues.The clinicopathological data of enrolled patients such as age, sex, tumor size, tumor site, pathologic type, histodifferentiation,infiltration depth, lymph node metastasis, stage and survival were obtained, and were made one factor analysis of variance and COX regression prognostic analysis with those above mentioned markers.Follow-up was completed as of February 28, 2010.The median follow-up was 24 months.Results hTERT from gastric carcinomas and corresponding non-cancerous tissues was 16.98 ± 3.56 and 11.37 ± 2.15, respectively (P<0.05 ),the telomerase activity in gastric cancer was significantly higher than that in non-cancerous tissue ( P < O.05 ).Telomerase activity showed a positive correlation with depth of invasion, tumor differentiation and nodal metastasis ( P < 0.01 ), and negative correlation with survival.Conclusions Gastric cancer with high hTERT mRNA expression indicates a more malignant potential.Detection of hTERT mRNA in gastric cancer may be useful in a better understanding of invasion, metastasis, as well as prognosis of gastric cancer and provide a more efficient therapy.The quantitative expression of hTERT mRNA, infiltration depth and pTNM stage are significant afactors affecting the prognosis of patients with gastric carcinoma.     

血清游离DNA hTERT定量检测对胶质瘤的诊断意义

目的 分析不同级别胶质瘤患者血清游离DNA中人类端粒酶逆转录酶（hTERT）的含量及其与临床病理特征之间的关系.方法 采集70例胶质瘤患者及22例正常对照者的外周血,用德国希尔登试剂盒提取DNA,实时荧光定量PCR检测血清DNA中hTERT含量,并比较其差异.随访胶质瘤患者的生存时间,比较血清DNA中hTERT含量与生存时间的关系.结果 胶质瘤患者血清DNA中hTERT含量显著高于正常对照组（107.41 ng/ml：34.79 ng/ml,P＜0.01）;70例胶质瘤患者中,高级别组血清DNA中hTERT含量显著高于低级别组（131.76 ng/ml：85.89 ng/ml,P=0.010）;术后随访1年,其中55例存活,10例死亡,5例失访,死亡组较存活组患者术前血清DNA中hTERT含量高（126.98 ng/ml：88.21 ng/ml,P=0.016）.受试者工作特征曲线分析血清DNA中hTERT含量,曲线下面积（AUC）为0.966.结论 检测血清游离DNA中hTERT含量有助于胶质瘤的筛查、早期诊断,并且在判断肿瘤恶性程度及预后方面具有重要意义.     

食管上皮癌变过程中NF-κB与hTERT的表达及其意义

目的 检测食管上皮癌变过程中NF-κB与hTERT蛋白表达水平,探讨其与食管鳞状细胞癌（以下简称食管癌）癌变的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测了45例食管鳞状细胞癌、21例不典型增生和24例切缘正常组织中NF-кB和hTERT蛋白的表达水平。应用SAS统计学软件分析食管癌组织中NF-κB和hTERT蛋白表达的相关性。 结果 hTERT蛋白在癌组织中的表达（88.9%）显著高于不典型增生（57.1%）和切缘正常组织（12.5%）（P<0.05）,hTERT蛋白表达与患者年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）,与食管癌的浸润深度有关（P<0.01）。NF-кB在癌组织中的表达（80.0%）明显高于不典型增生（57.1%）和切缘正常组织（20.8%）（P<0.05）,与患者年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）,与食管癌的浸润深度有关（P<0.01）。统计学分析,食管癌组织中NF-кB与hTERT蛋白表达呈显著正相关（P<0.05）。结论 食管癌组织中hTERT及NF-κB表达异常增高可能是引起食管癌变的因素之一,联合检测hTERT及NF-кB蛋白,有助于食管癌的早期诊断及预后判断。     

Expression of a mutant hTERT in human bladder carcinoma cell line T24 and its clinical significance

Objective: To construct a mutant pEGFP- hTERT expression vector, to observe its steady expression in transfected human bladder carcinoma cell line T24 and its role in molecular regulatory mechanisms of telomerase, and to provide a new target gene for bladder cancer. Methods:PCR amplification was performed by using primers based on the known gene sequence of hTERT. PCR production was cloned into plasmid pGEMT-T easy and the sequence of mutant hTERT gene was analyzed. A recombinant mutant hTERT vector (pEGFP-hTERT) was constructed at the EcoR I and Sa/I sites of the pEGFP-C1 vector. After transfecting the fusion gene into bladder carcinoma cell line T24 by calcium phosphate-DNA coprecipitation, the steady expression of GFP-hTERT fusion protein was tested by fluorescent light microscopy. The proliferation changes of bladder carcinoma cell line T24 were detected by light microscopy and senescence correlated [3-galactosidase staining. Results: Identification of pEGFP-hTERT by enzyme digestion showed that mutant hTERT fragment had been cloned into EcoR I and Sal I sites of the pEGFP-C1 vector. The steady expression of GFP-hTERT fusion protein was localized in the nucleus of transfected cells. Expression of senescence-associated ~-galactosidase in transfected cells gradually increased with extended cultured time and cell growth was suppressed. Conclusion: The mutant-type hTERT gene suppresses the proliferation of bladder carcinoma cell line T24 by competitive effect on telomerase activity. This suggests that hTERT gene might be a suitable gene target for bladder cancer therapy.     

hTERT转录调控区克隆及在人癌细胞的转录特异性分析

目的　通过克隆人癌细胞中端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因上游转录调控区并观察其在不同人癌细胞和正常细胞中的转录活性 ,探讨人hTERT基因在细胞癌变中的激活机制。方法　用PCR方法克隆HeLa和PG癌细胞hTERT基因转录调控区 ,并进行DNA序列测定 ;将转录调控区重组于荧光酶报告载体 ,瞬时转染人癌细胞HeLa、PG、2 93和正常人二倍体细胞 2BS后 ,测定荧光酶活性以确定调控区转录活性。结果　于人HeLa和PG癌细胞分别克隆hTERT基因转录起始点附近 6 36bp(- 5 31～ 90 )和 95 0bp(- 5 31～ 40 4 )的转录调节区 ,其序列与GenBank人hTERT启动子序列相同。将两转录调控区分别重组于荧光酶报告载体pGL2 ,得到pGL2 6 36和pGL2 95 0 ,并同时构建了pGL2 X(- 5 31～ - 2 72 )和pGL2 S (第一内含子区 )。瞬时转染细胞后发现 :pGL2 6 36和pGL2 95 0在癌细胞中的转录活性明显增高 ,而在人二倍体 2BS细胞中几无转录活性。重组体pGL2 S和pGL2 X在端粒酶阳性肿瘤细胞中的转录活性明显降低 ,pGL2 S的转录活性略高于pGL2 X。结论　人HeLa和PG癌细胞中hTERT转录调控区无基因突变并高度保存 ;hTERT调控区具有癌细胞特异性转录调节活性 ,表明hTERT转录水平的激活与端粒酶阳性及细胞癌变密切相关 ;hTERT上游 2 72为其核心     

端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤中的表达

目的:探讨端粒酶催化亚单位和c-myc在骨肉瘤发生中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测60例骨肉瘤、12例骨软骨瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc的表达,采用显微图像分析系统进行平均灰度值测定。结果:骨肉瘤中端粒酶催化亚单位和c-myc蛋白的平均灰度值均低于骨软骨瘤中两者的平均灰度值,且有统计学意义(P<0.01)。骨肉瘤中端粒酶催化亚单位与c-myc蛋白平均灰度值间无相关性(P>0.05)。结论:端粒酶催化亚单位、c-myc蛋白分别与骨肉瘤的发生有关。     

宫颈癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA表达临床意义的探讨

目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在宫颈癌(CC)脱落细胞中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌HeLa细胞株(细胞组)、40例宫颈癌(宫颈癌组)和21例正常或慢性宫颈炎(对照组)患者宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERTmRNA的表达作为定性、定量参照。结果:宫颈癌组和对照组中hTERT mRNA阳性表达率分别为82.5%和9.5%,差异有统计学意义,P=0.000;两组hTERTmRNA的相对定量水平NhTERT分别为0.327 6~13.782 3和0.009 3~0.081 6,差异均有统计学意义,P=0.019;hTERTmRNA阳性表达与宫颈癌的分化程度具有负相关性(r=-0.308,P=0.016),与年龄、临床分期、间质浸润深度和组织学分类无相关性。结论:宫颈癌患者宫颈脱落细胞hTERT mRNA阳性表达率及相对定量水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达有助于宫颈癌的诊断及预后评估。     

骨肉瘤端粒酶逆转录酶的定性与定量检测及其意义

目的 对骨肉瘤中人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达进行定性及定量检测,探讨hTERT在骨肉瘤中的表达及意义.方法 用免疫细胞/组织化学法分别定性检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞株U2-OS、MG-63、SAOS-2及15例骨肉瘤组织中hTERT的表达情况;用蛋白印迹法(Western-blot,WB)定量检测上述细胞株及7例骨肉瘤组织中hTERT的表达情况.结果 免疫细胞/组织化学显示,HeLa细胞hTERT表达率最高(95.16%);MG-63、SAOS-2、U2-OS细胞系中hTERT阳性率分别为8.75%、5.26%、2.33%;骨肉瘤组织中hTERT表达阳性率26.7% (4/15).蛋白印迹法显示,Hela、MG-63及两个骨肉瘤样本(OS1和OS2)有hTERT表达,U2-OS及SAOS-2中几乎没有hTERT表达.结论 hTERT在骨肉瘤中表达很低,可能无法成为骨肉瘤的临床治疗靶点.