动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架变化

目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化.方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1 000、2 000、4 000 μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12 h),经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张、压应力后细胞形态变化,细胞骨架荧光染色强度测定分析细胞骨架F-actin表达量的变化.结果:加力后细胞骨架形态和微丝蛋白发生规律性变化;细胞F-actin荧光染色强度正常→下降→正常;细胞骨架对张、压应力作用的反应敏感程度无明显差异.结论:在一定的张、压应力范围内人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的形态结构具有一定的稳定性.     

张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞早期增殖活性和差异表达基因的变化

目的对比在张应力和压应力两种不同性质力的刺激下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）增殖活性的变化,并对差异表达基因进行筛选,探讨不同应力作用后HPDLF增殖变化的分子机理。方法使用四点弯曲加力装置对细胞进行0.5 Hz、4 000 μstrain的应力加载,加载时间2 h,采用流式细胞术测定张、压应力刺激对HPDLF增殖活性的影响,应用基因芯片技术检测两种应力刺激下细胞的差异表达基因。结果在两种应力刺激作用下,S期细胞百分比和细胞增殖指数均降低;差异表达的基因最主要位于细胞核,集中在转录因子活性相关基因群,参与最多的生物过程为转录因子调控,其中压应力引起的差异表达基因和生物过程的数量较张应力更多。结论1）周期性张、压应力作用下,HPDLF增殖变缓、细胞周期阻滞。2）细胞增殖变缓和细胞周期阻滞可看成是细胞对外界刺激的适应和自我保护,有利于HPDLF有更多的时间决定如何应答外界应力刺激,其应答的结果首先是转录水平上基因表达的改变,最主要的生物学反应是核转录调控。3）HPDLF对周期性压应力更敏感。     

张应力刺激下人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素、细胞骨架的变化

目的:研究不同动态张应力刺激下体外培养的人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白、整合素β1和细胞骨架的变化.方法:刮取牙根中1/3牙周膜组织,采用Ⅰ型胶原酶消化结合组织块贴附法进行人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)原代培养并传代.用四点弯曲加载装置,通过对体外培养的hPDLF分别施加不同动态的张应力,采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞纤连蛋白和整合素β1亚单位mRNA表达的影响.经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张应力后细胞形态的变化.采用SPSS 13.0软件包对荧光定量PCR所得数据取常用对数后行ANOVA分析.结果:张应力的大小及加力时间都对hPDLF纤连蛋白mRNA表达产生影响.加力后,hPDLF整合索β1亚单位mRNA表达下调,这种下调变化与所施加应力大小和作用持续时间相关.机械力刺激越强,整合素β1表达越明显.加力后,细胞骨架形态发生变化.加力前呈梭形,排列呈漩涡状,F-actin纤维粗且分布均匀;加力后,形态不规则,沿力的方向排列整齐,F-actin纤维细且分布不均匀;加力12h后,形态恢复到加力前形态,细胞F-actin荧光染色强度也由正常到下降再到正常.结论:动态张应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进纤连蛋白、整合素βmRNA表达改变,hPDLF细胞骨架的形态结构也发生一定规律的变化.     

静态张应力作用下人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1表达的变化

目的检测静态张应力作用对人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1表达变化的影响。方法有限稀释法克隆化培养纯化人牙周膜干细胞(hPDLSCs),应用内外双层套筒式硅胶膜细胞加力装置对人牙周膜干细胞加力,加力时间点为0、3、6、12、24小时。采用原位杂交和实时定量PCR检测各加力时间点Cbfa1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人牙周膜干细胞受力后Cbfa1蛋白的表达。结果人牙周膜干细胞受到静态张应力作用后3小时、6小时、12小时Cbfa1 mRNA表达均升高(P0.05),且以加力3小时最为明显,6小时后开始下降,24小时后基本恢复到不加力时的表达水平。加力3小时Cbfa1蛋白表达未见明显升高,加力6小时后Cbfa1蛋白逐渐升高,一直持续到加力24小时(P0.05)。结论静态张应力作用下,人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1在RNA水平和蛋白水平的表达均发生变化,说明Cbfa1在机械力促使人牙周膜干细胞向成骨细胞方向分化的过程中起到了重要作用。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化

牙周炎是口腔最常见的疾病之一,累及牙周支持组织,随着疾病的进展将引起附着丧失、牙周袋形成、牙槽骨吸收,最终导致牙齿松动脱落。因被牙周炎破坏吸收的牙槽骨自愈能力十分有限,所以牙周炎的治疗目标是在彻底清除菌斑生物膜的基础上,争取获得较多的牙周组织再生。牙周膜干细胞作为最适宜进行牙周组织再生的细胞,被广泛研究。Wnt信号通路分为经典Wnt通路和非经典Wnt信号通路,为十分复杂而高度保守的通路传导途径。该通路与牙周膜干细胞成骨分化的关系十分密切,牙周膜干细胞的成骨分化又对牙周组织再生有重要意义。该文对经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化的研究概况作一综述。     

GSK126通过Wnt/β-catenin信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化能力

目的体外研究GSK126对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化能力的影响及调控机制。方法分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后EZH2和H3K27me3的表达;新型EZH2抑制剂(GSK126)加入成骨诱导液培养后,qPCR检测EZH2和成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)mRNA水平的表达;Western blot检测H3K27me3及β-catenin蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;检测Wnt/β-catenin抑制剂(XAV939)对GSK126作用后细胞成骨分化能力的影响。结果成骨诱导后牙周膜干细胞中成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)的表达水平明显升高,而EZH2和H3K27me3的表达水平显著下调;GSK126可显著抑制EZH2、H3K27me3的表达,但明显促进hPDLSCs的成骨分化能力及β-catenin蛋白水平的表达;进一步实验结果表明XAV939可逆转GSK126对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论 GSK126可通过Wnt/β-catenin信号通路调控人...     

Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性牙龈增生中的表达

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性增生的牙龈组织中的表达.方法:选择正常牙龈对照组、(未服药)高血压牙龈增生组、硝苯地平引起的药物性牙龈增生组各10例,用Western-Blot和RT-PCR检测牙龈组织中Wnt1、β-catenin的表达.结果:药物性牙龈增生组的牙龈组织中Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平显著高于正常牙龈对照组(P＜0.05)和高血压牙龈增生组(P＜0.05).结论:硝苯地平引起的药物性牙龈增生的牙龈组织中Wnt1、β-catenin表达水平增高,可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙龈成纤维细胞的增殖导致牙龈纤维化.     

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力（强度为1 000、2 000、4 000 μstrain，加力时间为0、0.5、1、4、8、12 h），采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后，人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调，这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致，机械力刺激越强，整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变，不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。     

雌激素与机械张应力对碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的研究雌激素与机械张应力共同作用对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)增殖分化相关因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达水平的影响。方法体外培养HPDLF,分为两组。实验组使用10-7mol/L雌激素干预后,使用4点弯曲加力装置对HP-DLF进行张应力加载;对照组不使用雌激素干预,只进行机械张应力加载。采用实时多聚酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和紫外线分析检测HPDLF加力时3、6、12 h时bFGF基因的表达。结果加力0、3、6、12 h时,对照组bF-GFmRNA表达量光密度值分别为1.000,3.245±0.261,4.498±0.431,7.969±0.597,实验组bFGFmRNA表达量光密度值分别为16.736±1.003,22.542±1.768,27.923±1.914,31.556±2.142。雌激素干预与张应力加载共同作用与单纯受到机械张应力作用相比,bFGF的mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞增殖分化相关因子bFGF有较强调控作用,表现为bFGF的mRNA表达量显著上升。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

动态张应力对人牙周膜成纤维细胞MMP-9 mRNA合成的影响

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）是一组锌依赖蛋白酶，以酶原形式分泌，主要参与细胞外基质降解、转运和组织重塑，具有降解和变性Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原明胶的特异能力，也可切割天然Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅺ型胶原。我们对其在动态张应力作用下的合成与表达进行了研究。     

miR-27a通过Wnt/β-catenin通路对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果及机制研究

目的：探讨miR-27a对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果以及对Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法：40只小鼠建立骨质疏松颅骨缺损模型,随机分为模型组、miR-27a NC组、miR-27a mimic组和mi R-27a inhibitor组,另外10只骨质疏松小鼠作为对照组。对照组和模型组小鼠尾静脉注射10μL生理盐水,其余组小鼠分别尾静脉注射10μL mi R-27a阴性对照质粒、miR-27a过表达慢病毒质粒和mi R-27a沉默慢病毒质粒,1次/周,连续4周。micro-CT检测颅骨愈合情况,ELISA检测血清中碱性磷酸酶（ALP）、钙和磷水平,qRT-PCR法和蛋白印迹法检测骨钙素（OCN）和骨桥蛋白（OPN）基因和蛋白表达量,蛋白印迹法检测细胞核和细胞质中β-catenin蛋白表达情况。结果：与对照组比较,模型组小鼠ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN m RNA和蛋白水平均降低（P<0.05）;与mi R-27a NC组比较,miR-27a mimic组小鼠BV/TV、骨小梁数量以及骨小梁厚度,ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN基因和蛋白水平均升高...     

雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞OPG表达的影响

目的:研究雌激素受体β(ERβ)对人牙周膜成纤维细胞(HPLF)的骨保护因子(OPG)表达的影响.方法:合成ERβ基因的干涉载体,以脂质体法转染至HPLF中,Western blot及RT-PCR法检测转染效率.鉴定后用雌激素干预ERβ十涉载体转染和未经转染的HPLF,研究细胞OPG的表达情况.结果:ERβ干涉载体可特异地抑制HPLF中ERβ的表达.雌激素明显增强了未转染的HPLF的OPG表达,但对稳定转染的HPLF的OPG表达没有显著影响.结论:雌激素主要通过ERβ促进人牙周膜成纤维细胞OPG的表达.     

四环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的探讨四环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(I1PDLFs)的生物学作用。方法将不同浓度的四环素(1,5,20,100,500,2 500习ml)加人体外培养的HPDLFs中,孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用M,1法、考马司亮蓝法及“H-TdR掺人法,分别检测四环素对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1 -. 100 pg/ml的浓度范围内,细胞形态呈正常的梭形或纺锤形。在20- 100留ml的浓度范围内,四环素可促进HPDLFs的增殖及生物合成(P < 0.01)。当四环素的浓度增至2 500 lcg/ml,不仅使细胞的镜下形态发生了明显改变,而且严重抑制了细胞的生物学活性。结论在合适的浓度范围内,四环素能促进HPDLFs的增殖及生物合成,而浓度过高则具有细胞毒性。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

Wnt/β-catenin信号通路影响牙本质形成及再生的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路是Wnt通路中的经典途径,在牙的发生中发挥着重要作用。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在牙本质的形成过程中扮演着重要角色,本文就近年来相关研究对Wnt/β-catenin信号通路在成牙本质细胞分化和牙本质发生及再生中的作用及影响作一阐述。