流体剪切力对人脂肪基质细胞成骨相关基因表达影响的研究

目的 探讨流体剪切力(FSS)对人脂肪基质细胞(ADSC)成骨相关基因骨钙素(OCN)、转录因子Osterix(Osx)及核心结合因子(Cbf) al/Runt相关转录因子(Runx)2表达的影响.方法 将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行常规培养(A1、A2组)和诱导培养(A3、A4组),然后分别对其加载强度为0.3 Pa的FSS(A1、A3组),未加FSS的为对照组(A2、A4组),通过逆转录-聚合酶链反应检测骨钙素、转录因子Osx及Cbfal/Runx2基因表达的情况.结果 A3、A4组在FSS加载后,其成骨相关基因的表达增强;而A1、A2组未见成骨特异性基因条带.这表明在常规培养条件下,无论是否有FSS的刺激,均无成骨特异性基因表达.结论 脂肪基质细胞在诱导培养条件下,FSS可促使其向成骨细胞分化,可作为骨组织工程的种子细胞.     

脂肪基质细胞骨向诱导分化的研究进展

脂肪基质细胞(ADSCs)是目前骨组织工程的理想种子细胞,诱导其定向成骨分化是该领域的研究热点。脂肪基质细胞定向成骨诱导的方法主要有改变ADSCs所处的微环境、修饰ADSCs内部基因等。本文对脂肪基质细胞骨向诱导分化的研究进展进行综述。     

柚皮苷对犬骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)在柚皮苷诱导下定向成骨及成骨分化能力。方法:抽取犬骨髓,贴壁法体外培养,流式细胞仪鉴定,加入不同浓度柚皮苷(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L)诱导,以CCK-8检测药物毒性,定量检测碱性磷酸酶、von Kossa检测钙结节形成。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经流式细胞仪检测,CD34、CD45低表达、CD90高表达分别为0.126%、0.075%和95.4%;柚皮苷浓度在10-6、10-7 mol/L时,能明显促进细胞增殖;经柚皮苷诱导后,碱性磷酸酶含量显著提高,其中,浓度为10-6 mol/L时,ALP相对值最高(P<0.05);von Kossa钙结节检测呈阳性。结论:犬骨髓基质细胞在柚皮苷诱导下能分化为成骨细胞。柚皮苷浓度为10-6 mol/L时,能明显促进骨髓基质细胞的增殖及分化。     

不同周龄大鼠骨髓基质干细胞成骨与成脂分化平衡的研究

目的研究不同周龄大鼠骨髓基质干细胞成骨与成脂肪能力。方法不同周龄(幼年组:2周,成年组:3个月,老年组:18个月)大鼠骨髓基质干细胞原代培养,成骨诱导分化,矿化结节染色,计算矿化率。成脂肪诱导分化,显微镜下观察脂肪滴及检测油红-O染色阳性细胞率。结果全骨髓细胞贴壁的方法得到大鼠骨髓基质干细胞,幼年组成骨分化的矿化率最高,老年组最低。成脂肪诱导油红-O染色阳性率老年组最高,幼年组最低。结论随着年龄的增长骨髓基质干细胞成骨能力减弱,成脂肪能力增强。     

矿化液对人脂肪基质细胞(hADSCs)成骨分化的影响

目的:比较人脂肪基质细胞(human adipose-derived mesenehymal stem cells,hADSCs)在矿化条件与非矿化条件下分别培养,评价矿化液对其增殖和分化的影响。方法:酶消法原代培养人脂肪基质细胞,再以含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的矿化液进行诱导,MTT检测矿化液对细胞增殖的影响,细胞培养上清液检测碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素(OCN)含量。结果:矿化液抑制细胞的增殖,提高人脂肪基质细胞ALP活性和骨钙素的含量。结论:人脂肪基质细胞在矿化条件下可以表现出成骨细胞特性。     

骨髓基质细胞的成骨性分化

骨髓基质细胞具有多分化潜能,取材简便,来源丰富,被较多应用于组织工程研究,其中包括骨组织工程和牙周组织工程等,该文从骨髓基质细胞概述及其生物学特性、成骨潜能、成牙骨质潜能等方面作一综述。     

犬外周血基质细胞成骨诱导分化后的超微结构观察

目的：利用透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）观察成骨诱导培养前后,犬外周血基质细胞（dog peripheral blood stromal cells,dPBSCs）超微结构的变化。方法：采用密度梯度离心法—贴壁筛选法分离培养dPBSCs,并进行成骨诱导培养,14d后进行TEM观察。结果：经成骨诱导培养的dPBSCs光镜观察显示,形态由长梭形变为短梭形成骨细胞样形态,体积增大,细胞排列较杂乱;透射电镜观察显示,细胞体积增大,胞质中含有丰富的细胞器,还有大量的基质小泡、呈同心圆状或板层状的髓样体和空泡状结构,细胞间连接紧密,带有大量微绒毛样突起。结论：dPBSCs是一种具有成骨潜能的细胞,经成骨诱导培养后,其超微结构具有成骨细胞的特点。     

犬骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bonemarrowderivedstromacell,BMSC)定向分化为成骨样细胞(osteoblasts-like,OBL)后的体外成骨能力和细胞内钙离子浓度的变化。方法:分离、培养犬骨髓基质细胞,并使用诱导培养液进行成骨诱导,取第3代成骨样细胞。通过碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)染色和vonKossa染色检测BMSC分化为OBL的程度。检测细胞增殖率,比较细胞与多孔支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)黏附前后的生长情况,用对BMSC分化前后、OBL黏附多孔β-TCP前后细胞内钙离子浓度荧光值进行统计学分析。结果:ALP染色和vonKossa染色均显示为阳性。细胞增殖率曲线结果显示,细胞黏附多孔β-TCP后增殖率没有明显差异。统计学分析发现,BMSC分化前后和OBL黏附β-TCP前后细胞内钙离子浓度荧光值均有明显的差异,P<0.05,有统计学意义。结论:犬OBL有很好的体外增殖能力和成骨能力,黏附多孔β-TCP之后,细胞的生长状况没有差别,多孔β-TCP材料对BMSC细胞内钙离子浓度有很大的影响。     

大鼠骨髓基质干细胞体外培养及成骨作用的实验研究

目的研究大鼠骨髓基质干细胞在体外条件培养下的成骨能力，为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法取大鼠骨髓基质干细胞进行体外培养，用倒置相差显微镜、钙染色、扫描电镜和X线能谱等手段观察细胞的生长情况和矿化能力。结果细胞呈贴壁型生长，形态为梭形或多角形，在条件培养液中这些细胞间不发生接触抑制，而是相互重叠成多层，形成钙化结节，与成骨细胞的特点相符合。碱性磷酸酶染色呈强阳性，结节钙染色阳性，X线能谱分析显示结节的主要组成元素为钙和磷。结论体外培养的大鼠骨髓基质干细胞具有与成骨细胞相似的形态特征，并能在体外形成钙化的新骨结节。     

黄精多糖干预骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的:研究不同浓度的黄精多糖(polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对骨质疏松小鼠脂肪干细胞(adipose derived stem cells in osteoporosis mice,OP-ASCs)成骨分化的影响.方法:建立骨质疏松症小鼠动物模型.体外分离培养OP-...     

人体脂肪基质细胞成肌潜能研究

目的　研究分离的人体脂肪基质细胞经过诱导培养后向骨骼肌细胞分化的潜能。方法　通过脂肪抽吸 术获取健康成人脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞。将脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代 培养10 d,在DMEM/F12培养基中进行成肌诱导培养20 d,获得细胞爬片。细胞爬片经4%多聚甲醛固定后,用甲 苯胺蓝、Mallory磷钨酸苏木素染色观察细胞形态;Myosin单克隆抗体免疫细胞化学染色观察肌球蛋白表达情况。 结果　经过成肌诱导培养的细胞与常规培养的脂肪基质细胞在形态上有明显的差异,表现为细胞体积增大,单个 核的细胞融合形成多核的肌管样结构,胞浆内细胞器发达,肌浆网扩张并形成肌原纤维骨骼肌特异性的Myosin表 达阳性。未经诱导的脂肪基质细胞在相同时间点无此现象。结论　人类脂肪基质细胞中存在着成体干细胞,在成 肌诱导培养条件下具有向骨骼肌细胞分化的潜能。     

富血小板血浆对人脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的：探讨富血小板血浆（PRP）对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）增殖、分化及成骨能力的影响。方法：脂肪组织体外分离获得hADSCs,2次离心制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活PRP。倒置相差显微镜观察成骨诱导实验中PRP对细胞增殖、分化状况的影响,钙-钴法检测PRP作用下hADSCs矿化结节形成,碱性磷酸酶（ALP）检测PRP对细胞活性及分化能力的影响。CCK-8法检测成骨诱导组和非成骨诱导组加PRP培养后2、4、6、8、16d细胞活性变化。结果：成骨诱导实验中50%PRP30μL组细胞密集、数量最多,且有剂量依赖性;钙-钴法检测见PRP原液组细胞染色最深,且有浓度依赖性;碱性磷酸酶显色见PRP原液组细胞活性最强,染色最深。CCK-8检测显示无论有无成骨诱导,各浓度PRP均可促进细胞增殖,且有浓度依赖性。结论：适宜浓度的PRP可明显促进hADSCs增殖,并有浓度及剂量依赖性。     

珊瑚复合人骨髓基质细胞构建组织工程骨

目的：观察人骨髓基质细胞在角孔珊瑚上立体培养后的生长情况及其在体内的成骨能力。方法：穿刺抽吸人髂骨区骨髓基质细胞，体外培养扩增、诱导后，接种于角孔珊瑚中立体培养5d，观察细胞在角孔珊瑚表面的贴附及伸展情况；将上述细胞/角孔珊瑚复合物植入体内，观察植入物在体内的成骨情况。结果：细胞可在角孔珊瑚中立体培养成活。体内植入后4周，复合物中有少量新骨形成；体内植入后8周，复合物中出现大量较成熟骨组织；而对照组4、8周均无骨组织形成。结论：穿刺抽吸的人骨髓基质细胞可作为骨组织工程的种子细胞，角孔珊瑚可作为骨组织工程的支架材料。     

牙囊干细胞诱导成骨的体外研究

目的:体外研究牙囊干细胞(DFSC)的成骨能力,为其在牙周组织工程中的应用提供理论基础。方法:结合组织块法和酶消化法分离培养DFSC,用有限稀释法纯化细胞,经细胞形态、免疫组化和流式细胞技术鉴定DFSC后,然后进行成骨诱导,并通过碱性磷酸酶和茜素红染色、Real-timePCR、Western-blot检测成骨/牙骨质细胞表面标记物ALP、OCN、BMP2、RUNX2的表达。结果:DFSC具有较强的增殖能力,免疫组化示波形丝蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性;DFSC高表达间充质干细胞表面标记物CD44、CD90、CD105、CD146;随着诱导时间的增加,其ALP、OCN、BMP2、RUNX2的表达明显上调(P＜0.05)。结论:DFSC是牙周组织再生良好的种子细胞,必将为牙周组织再生治疗开辟新的途径。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

成人正常骨髓基质细胞体外培养及生物学特性

目的：建立成人体外培养成骨细胞的生物学模型，研究其生物学特性，为用于骨组织工程的功能细胞提供实验基础。方法：将成人正常骨髓基质细胞在不同培养体系中培养，通过倒置显微镜观察、HE染色、四环素荧光标记等方法对细胞进行生物学特性研究。结果：培养细胞形态多样，有两个或两个以上的胞浆突起且相互连接，细胞呈叠加复层生长，形成细胞结节；胞浆碱性磷酸酶染色强阳性，在一定条件下可产生钙化结节，结节的四环素荧光标记呈阳性。结论：确认培养的骨髓基质细胞具有与成骨细胞相似的形态特征和生物学特征，并能在体外钙化形成钙化结节。     

不同浓度的骨髓基质细胞裸鼠体内成骨能力的研究

目的：探讨不同浓度骨髓基质细胞（BMSCs）与胶原膜BME-10X复合培养体的体内成骨能力,为深入开展牙周组织工程研究奠定基础。方法：将BMSCs分别以5×10^5/mL、5×10^6/mL和5×10^7/mL浓度与胶原膜复合培养后植入裸鼠皮下,8周后取材做病理切片,苏木精-伊红、Mallory染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色,观察其体内成骨能力。结果：实验组和对照组均有不同程度Ⅰ型胶原的表达,5×10^6/mL和5×10^7/mL组高于对照组和5×10^5/mL组（P〈0.05）,而5×10^6/mL与5×10^7/mL组之间、对照组与5×10^5/mL组之间无显著型差异。结论：在一定条件下BMSCs的浓度可影响复合体的体内成骨能力,浓度越高其成骨能力越强。     

脂肪干细胞的培养鉴定及多向诱导分化

目的:进行脂肪干细胞的分离、培养和鉴定,阐明脂肪干细胞的生物学特性。方法:无菌条件下取新西兰大耳白兔腹股沟处脂肪组织,从中获得纯化的脂肪来源干细胞。HE染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞表面标志物;多向诱导后检测其成脂、成骨及成软骨分化能力。结果:提取的兔脂肪干细胞形态为成纤维细胞样,生长旺盛,可以稳定增殖20代以上。流式细胞术分析显示CD44呈阳性表达,CD34、CD14呈阴性表达;经体外诱导培养后,向成脂细胞、成骨细胞及成软骨细胞分化。结论:本实验成功分离、培养和鉴定了脂肪干细胞,脂肪干细胞体外增殖稳定,并且具有成脂、成骨及成软骨多向分化潜能。     

牙本质支架体外诱导兔骨髓干细胞分化

目的：探讨将人牙本质作为组织工程支架的可行性,采用不同的方式处理牙本质片,观察牙本质片处理后诱导兔骨髓基质干细胞贴壁附着生长的规律及成骨分化潜能。方法：将兔的骨髓基质干细胞分别接种于经机械去除前期牙本质加EDTA-柠檬酸脱矿处理（A组）,标准根管预备-EDTA处理（B组）的牙本质片上,体外培养1周,扫描电镜观察细胞与牙本质片的附着情况,碱性磷酸酶、茜素红及Vonkossa染色观察兔骨髓基质干细胞成骨分化。结果：兔骨髓基质细胞附着在2种方式处理的牙本质片上生长良好,贴附紧密。B组牙本质片上细胞碱性磷酸酶表达阳性率高达80％,茜素红、Vonkossa染色观察到钙结节数量多于A组。结论：经标准根管预备一EDTA处理的人牙本质能有效促进骨髓基质干细胞增殖及成骨分化,可能成为一种理想的成骨生物支架,并为牙体牙髓疾病的治疗提供了新的思路。广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻1012400lA一42）