miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法构建心肌细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测心肌细胞中miR-7的表达水平。心肌细胞转染miR-7模拟物和抑制物,RT-PCR检测转染效果。流式细胞术检测miR-7模拟物和抑制物对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响,试剂盒检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平。结果缺氧复氧心肌细胞模型中miR-7的表达水平明显高于正常培养的心肌细胞(P<0.01)。miR-7模拟物能够提高心肌细胞中miR-7的表达水平,而miR-7抑制物能够抑制心肌细胞中miR-7的表达。miR-7模拟物能够降低缺氧复氧心肌细胞的凋亡率和细胞中cleaved caspase-3表达,抑制心肌细胞分泌LDH,促进细胞中p-Akt的表达。miR-7抑制物能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡和细胞中cleaved caspase-3表达,促进心肌细胞分泌LDH,抑制细胞中p-Akt的表达。结论 miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中表达升高。miR-7能够降低缺氧复氧心肌细胞凋亡,干扰miR-7表达能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。     

HMGB1对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制。 方法 心肌细胞H9C2分为正常组、H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组。其中正常组细胞为正常培养的H9C2细胞,H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组细胞分别进行缺氧复氧处理,HMGB1 siRNA组、siRNA-NC组细胞在缺氧处理前48 h分别转染HMGB1小干扰RNA(HMGB1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control)。RT-PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。 结果 与正常组相比,H/R组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平显著升高(P<0.05),而SOD、p-STAT3水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、LDH、MDA及SOD水平、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与H/R组相比,HMGB1 siRNA组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平明显降低,而SOD、p-STAT3水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 HMGB1表达下调可能通过降低缺氧复氧对心肌细胞的氧化损伤而抑制心肌细胞凋亡。     

miR-137靶向下调SETD7表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究

目的探讨miR-137对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及其机制。方法心肌细胞H9C2分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧组+miR-con、缺氧复氧+miR-137组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA-SETD7组。qPCR检测H9C2细胞中miR-137和SETD7 mRNA表达,Western blot检测SETD7、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,比色法检测LDH、MDA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-137和SETD7的靶向关系。结果缺氧复氧明显降低H9C2细胞中miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),显著提高SETD7 mRNA及蛋白水平、LDH活性、MDA含量、Cleaved Caspase-3蛋白水平和细胞凋亡率(P<0.05)。上调miR-137表达促进缺氧复氧处理H9C2细胞内miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),明显降低SETD7蛋白、LDH、MDA、Cleaved Caspase-3水平和细胞凋亡率(P<0.05)。miR-137靶向调控SETD7表达。过表达SETD7部分逆转miR-137保护缺氧复氧处理H9C2细胞的作用。结论 miR-137通过靶向下调SETD7表达来促进缺氧复氧处理的心肌细胞增殖并抑制细胞凋亡,保护缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤。     

缺氧对H9C2心肌细胞膜葡萄糖转运蛋白表达量的影响

目的观察缺氧对H9C2心肌细胞膜葡萄糖转运蛋白（GLUT1和GLUT4）表达量的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分为对照组、胰岛素组、叠氮钠模拟的缺氧组，提取各实验组细胞膜后，用蛋白质印记杂交法测定膜组份中GLUTs的表达量。结果同对照组相比，胰岛素组和缺氧组细胞膜GLUTs表达量均明显增加，且胰岛素组对细胞膜GLUTs表达量的影响高于缺氧组（P〈0．05）。结论缺氧诱导H9C2心肌细胞膜GLUTs表达量增加，此种增加至少部分程度上介导了缺氧状态下H9C2心肌葡萄糖转运活动。     

EGCG通过PI3-K/Akt信号通路抗神经细胞缺氧/复氧损伤

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对神经细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响及其作用机制。方法原代培养神经细胞,实验分4组:对照组、A/R组、EGCG预处理组(EGCG+A/R组)、EGCG+LY294002+A/R组。检测细胞存活率与乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和[Ca~(2+)]i;Western blot法检测总-Akt和磷酸化-Akt(p-Akt)蛋白表达。结果与对照组相比,A/R组中细胞存活率降低;LDH、[Ca~(2+)]i与细胞凋亡增加。与A/R组相比,EGCG预处理显著降低LDH、[Ca~(2+)]i与细胞凋亡,提高细胞存活率,表明EGCG可对抗神经细胞A/R损伤。进一步结果显示EGCG预处理后,显著增加神经细胞中p-Akt蛋白表达。然而,PI3K-Akt信号转导通路阻断剂LY294002显著抑制EGCG介导的神经保护作用与p-Akt蛋白上调。结论 EGCG对A/R介导的神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用与PI3K-Akt信号转导通路有关。     

缺氧-复氧对肾小管上皮细胞内DRP1及OPA1表达的影响

目的:探讨缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内动力相关蛋白1(Dynamin related protein 1,DRP1)及视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy,OPA1)表达的变化。方法:以人近曲肾小管上皮细胞株为研究对象,将培养细胞随机分为正常对照组和H/R组。正常对照组常规培养,H/R组先缺氧24h,然后复氧培养6h。光镜观察细胞形态变化,CCK-8检测细胞活力,透射电子显微镜观察线粒体形态改变,免疫组织化学法检测细胞内DRP1和OPA1蛋白表达。结果:H/R组与对照组相比,细胞活力下降,线粒体出现凋亡相关改变,OPA1表达减少而DRP1的表达增加。结论:缺氧-复氧可导致HK-2细胞发生凋亡相关改变,其机制可能与诱导线粒体形态相关蛋白DRP1、OPA1的表达改变相关。     

血红素加氧酶1对人脊髓星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase, HO-1)过表达对人脊髓星形胶质细胞(human astrocytes of spinal cord, HA-sp)缺氧/复氧损伤的保护作用。 方法通过给予HA-sp氯化钴(250 μl/L CoCl₂)刺激模拟缺氧,然后再去除CoCl₂刺激,建立细胞缺氧/复氧损伤模型。采用免疫印迹(western blot, WB)方法,从蛋白水平上检测不同刺激条件下HA-sp中HO-1的表达。采用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)方法,分析单纯给予缺氧/复氧刺激后以及上调HO-1表达的同时给予缺氧/复氧刺激后HA-sp的存活率变化。 结果缺氧/复氧刺激条件下,HA-sp中HO-1蛋白过表达。利用锌原卟啉(ZnPPIX)抑制缺氧/复氧刺激条件下HO-1过表达后,HA-sp在缺氧/复氧刺激条件下存活率明显降低(P<0.01);与单纯给予缺氧/复氧刺激后HA-sp的存活率相比,用钴原卟啉(CoPP)上调HA-sp中HO-1表达的同时给予缺氧/复氧刺激,细胞存活率明显升高(P<0.01)。 结论利用CoPP上调HA-sp中HO-1的表达,具有抗细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。     

大蒜素对培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的抗凋亡作用通过p38MAPK细胞信号转导通路(英文)

目的探讨大蒜素对培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并探讨p38MAPK细胞信号转导通路是否发挥作用。方法利用新生大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧模型,将培养的心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(A/R组)、大蒜素组(A组)、大蒜素+SB203580(A+SB)及SB203580(SB)组共5组;各组均测定缺氧后和复氧后心肌损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,并利用凝胶电泳及原位末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡。同时用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法检测各组p38MAPK及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达水平。结果A组较A/R、A+SB、SB组LDH、MDA明显降低,SOD明显增高(均P<0.01);A组AI(心肌细胞凋亡指数)较A/R、A+SB、SB组明显降低(均P<0.01),与凝胶电泳结果相一致。各组p38MAPK无显著性差异,p-p38MAPK在A组表达显著高于其它各组;结论大蒜素有明显抗培养心肌细胞缺氧/复氧损伤作用,其作用是通过减少心肌细胞凋亡而发挥的,p38MAPK细胞信号转导通路在其中起到重要作用。     

缺氧-复氧后HK-2细胞内OPA1的表达变化及rhEPO干预的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)干预对缺氧复氧后HK-2细胞内视神经萎缩症蛋白(optic atrophy 1,OPA1)表达变化及细胞凋亡率的影响。方法 体外培养HK-2细胞随机分为正常对照组、H/R组和rhEPO干预组。然后免疫组化检测各组细胞胞质内OPA1蛋白表达变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡数量差异。结果 与正常对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞凋亡率显著增加,同时细胞内OPA1表达减少;而与H/R组相比,rhEPO干预组细胞数量增加,细胞凋亡率下降,OPA1表达明显增强,但各指标仍未恢复至正常对照组水平。结论 rhEPO对缺氧-复氧所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能通过抑制细胞内OPA1蛋白表达而实现。     

胸腺五肽联合2H3R3Z3E3S3/6H3R3E3方案对复治菌阳肺结核的控制效果

目的 探究胸腺五肽联合2H3R3Z3E3S3/6H3R3E3方案治疗复治菌阳肺结核患者的效果.方法 选取我院2017年10月至2018年10月复治菌阳肺结核患者76例,根据治疗方案不同分为研究组(n=38)、参照组(n=38),参照组给予2H3R3Z3E3S3/6H3R3E3方案治疗,研究组在参照组基础上联合胸腺五肽,...     

镉致大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用

目的 研究不同浓度氯化镉(CdCl2)引起大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用。方法 采用姬姆萨染色法观察氯化镉对细胞毒作用的形态学改变;采用Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)流式细胞技术(flowcytometric,FCM)检测氯化镉对H9c2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测线粒体膜电位(MMP)的变化;采用免疫细胞化学法检测细胞色素C表达。结果 5,10,30,50,80μmol/L的氯化镉分别作用H9c2细胞6,12,24 h可以诱导细胞凋亡;随着镉剂量的加大及作用时间的延长,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着镉剂量增加,CytC表达增强。结论 镉可以通过线粒体途径诱导H9c2细胞凋亡。     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H₂O₂)对H9 c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用。方法 H9 c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H₂O₂中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤。结果 H₂O₂可以引起H9 c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%。H₂O₂可诱导H9 c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%。H₂O₂可引起H9 c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%。结论 H₂O₂造成H9 c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死。     

富硒板党对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护

目的探讨富硒板党对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用。方法益智实验采用苯异丙腺甘(PIA)致小鼠学习记忆障碍等益智模型;抗氧化实验采用小鼠低氧/复氧损伤的模型,检测小鼠血液中活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)值。结果富硒板党水煎液可提高小鼠的学习记忆能力,明显延长小鼠游泳时间;降低ROS和MDA值,增强SOD活性,对CAT作用不明显。结论富硒板党对小鼠具有益智和低氧/复氧损伤的保护作用。     

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。     

针灸对缺氧大鼠神经保护作用机制的研究

目的初步阐明针灸对缺氧大鼠神经保护作用的机制。方法选取20只健康雄性SD大鼠随机分为缺氧组和针灸治疗组,每组10只。针灸治疗组大鼠每日针灸关元、百会和内关3穴,针灸7d后进行常压缺氧暴露生存时间实验。将大鼠置于通入10%O2+90%N2混合气体的医用氧舱,分别缺氧暴露0h、12h、24h及36h,测定红细胞数、血红蛋白含量和血细胞比容,大鼠大脑匀浆测定丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶和乳酸脱氢酶含量。结果缺氧12h、24h及36h条件下,针灸治疗组大鼠缺氧暴露生存时间明显延长;针灸治疗组大鼠不同缺氧时段血红细胞数、血红蛋白含量和血细胞比容明显升高,大脑匀浆丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶和乳酸脱氢酶含量亦明显升高。结论针灸能够增强机体携运氧能力,促进无氧酵解的进行,缓解能量代谢障碍,可能在保护缺氧脑组织中起着重要作用。     

Neuroprotective effects of carnosic acid on neuronal cells under ischemic and hypoxic stress

Abstract

Ischemia/hypoxia induces oxidative stress which is associated with neurodegenerative diseases. The present study investigated protective mechanism of carnosic acid (CA) on ischemia/reperfusion and hypoxia-induced neuronal cell injury. The results showed that CA reduced 52% of the infarct volume from brains under ischemia/reperfusion in vivo and protected the PC12 cells from hypoxic injury in vitro. CA (1.0 µM) enhanced cell viability, prevented lactic dehydrogenase (LDH) release, scavenged reactive oxygen species (ROS), increased superoxide dismutase activity, and attenuated Ca²⁺ release, lipid peroxidation, and prostaglandin E₂ production in hypoxic PC12 cells. In addition, CA also reduced nitric oxide (NO) and interleukine (IL)-1 and IL-6 production from activated BV-2 microglia. Furthermore, its effect on hypoxia-induced mitogen-activated protein kinases (MAPKs) signaling pathway and caspase-3 was examined. Extracellular signal-regulated protein kinases, c-jun NH₂-terminal kinase, and p38 MAPK were activated during hypoxia. CA inhibited MAPKs, caspase-3, and COX-2 activation and correlated well with the diminished LDH release and apoptosis (TUNEL) in PC12 cells under hypoxia. Taken together, CA protected neuronal cells under ischemia/hypoxia through scavenging or reducing of ROS and NO, inhibiting COX-2 and MAPK pathways by anti-inflammatory and anti-oxidative properties.     

甲基丙烯酸环氧丙酯对BALB/c 3T3细胞恶性转化的实验研究

利用建立的 BALB/c 3T3细胞转化系统进行甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)的细胞转化和裸鼠诱癌的实验研究。实验结果表明:GMA 可诱导 BALB/c 3T3细胞形态转化,并呈剂量-反应关系;从转化灶分离扩增细胞,经电镜扫描观察到转化细胞表面形态改变,可被植物凝集素 ConA凝集,并在半固体琼脂生长,在同品系裸鼠皮下形成了肿瘤,病理组织检查结果为分化程度较低的纤维肉瘤。GMA 有很强的诱导细胞恶性转化的能力,提示 GMA 有潜在的致癌危险性。     

骨形成蛋白-2对低氧状态下的人肺动脉平滑肌细胞PTEN表达的作用

目的:研究骨形成蛋白-2(BMP-2)对低氧状态下人肺动脉平滑肌细胞(Pu lmonary artery smooth musc le cells,PASMCs)的PTEN(Phosohatase and tensin homolog deleted on chromosom e 10)表达调节作用。方法:将培养的人PASMCSs分为对照组(1%的氧浓度,5%的CO2和94%N2条件下培养)和BMP-2组(另加入BMP-2),培养48 h后通过CyQUANT细胞增殖检测试剂盒测定PASMCs的增殖,定量RT-PCR方法检测PTEN基因表达,W estern b lot方法检测PTEN蛋白的表达。结果:BMP-2组与对照组比较细胞增殖明显降低(P<0.05);定量RT-PCR结果显示,与对照组比较,BMP-2组细胞培养4 h、8 h、24 h后PTEN相对表达量(2-△△ct)均明显升高(P<0.05);进一步的western b lot证实BMP-2组PTEN蛋白表达也明显升高。结论:BMP-2能抑制缺氧状态下的PASMCs的增殖,通过上调PTEN表达可能是其机制之一。