6-OHDA制作帕金森病大鼠模型及评估

目的应用6-OHDA制作帕金森病(PD)大鼠模型,并对不同剂量6-OHDA制作的模型进行综合评价。方法取雄性SD大鼠70只,随机分成12μl单点、8μl单点、4μl单点、8μl双点和对照组,采用立体定向法,分别行左侧纹状体区相应剂量6-OHDA单点及双点注射,检测大鼠行为学变化及黑质多巴胺(DA)能神经元变化。结果双点组大鼠模型病死率高于其余各组,12μl单点组大鼠模型成功率高于其余各组,行为学检测见各单点组随6-OHDA剂量增加,其异常行为出现率增高;免疫组化检测各单点组间存在显著差异,但12μl单点组与双点组之间无显著差异。结论纹状体区对6-OHDA损伤存在剂量依赖性,12μl单点注射方法优于双点注射法。     

纹状体内注射6-羟基多巴胺制作帕金森病大鼠模型

[目的]研究帕金森病(PD)大鼠模型的制作方法.[方法]采用单点双注法将6-羟基多巴胺(6-OHDA)立体定向注入到大鼠右侧纹状体,观察大鼠的行为变化和中脑黑质区的形态学变化.[结果]注药后2周,大鼠经阿扑吗啡诱导出现向健侧旋转行为,在2个月的观察中见旋转行为稳定.形态学观察结果示,损伤侧黑质区致密部和中脑被盖腹侧区内酪氨酸羟化酶阳性神经元数量明显减少.[结论]6-OHDA单针道双点法是制作大鼠PD模型的可行方法.     

纹状体注射不同剂量6-OHDA制备帕金森病小鼠模型的评价

目的纹状体内注射6-OHDA可用于制备帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型,其在小鼠模型上的行为学、形态学及多巴胺水平的变化需要进行系统评价。方法在小鼠右侧纹状体背外侧部立体定位分别注入4、6、8及10μg的6羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),动态观察各剂量组小鼠的基本生理状况。旋转行为和转棒行为可评价PD小鼠的运动症状;酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色可反映黑质-纹状体内多巴胺能系统的功能改变;高效液相色谱法能检测多巴胺(dopamine,DA)及其代谢产物的含量并分析DA代谢率。结果除了10μg 6-OHDA组的小鼠体质量呈一过性下降,其他剂量对小鼠体质量无显著影响。在6-OHDA注射一周后,各组小鼠均出现了持续性的异常旋转行为增加。此外,高剂量组(8μg及10μg)小鼠的转棒时间较低剂量组(4μg及6μg)小鼠明显缩短。TH组织化学染色显示,低剂量组小鼠损伤侧丢失了约60%的多巴胺神经元及40%的多巴胺神经纤维;而高剂量组小鼠则有超过80%的多巴胺神经元丢失和70%的多巴胺神经纤维减少。各组小鼠损伤侧纹状体内的DA水平及其代谢产物含量也显著降低,与6-OHDA注射量具有剂量依赖性;而DA代谢率却出现了代偿性增加改变。结论纹状体内注射不同剂量6-OHDA均能引起一定程度的PD病理表型,其损伤程度与6-OHDA剂量相关,为研究PD不同病理阶段及其干预策略提供了新的模型。     

单点注射6-羟基多巴胺成功建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 探讨成功建立帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）大鼠模型的快速有效方法.方法 将Wistar大鼠92只,随机分为实验组（80只）及对照组（12只）,采用脑立体定向术,实验组在大鼠右侧中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）注入6-OHDA,经阿朴吗啡（Apomorphine,APO）诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数﹥210 r/30 min的视为成功PD大鼠模型,对照组则在脑部相应位置注入生理盐水.免疫组化法观察成功模型毁损侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元的形态及数量变化.结果 （1）行为学检测：模型组与对照组手术后分别死亡2只及1只,实验组78只大鼠中36只左侧恒定旋转圈数﹥210 r/30 min,造模成功率为46.2%,并且维持时间长.（2）免疫组化：成功大鼠模型毁损侧黑质区TH阳性的神经元较对侧及对照组明显减少（P＆lt;0.01）.结论 大鼠中脑VTA单点注射6-OHDA制作PD大鼠模型,易于定位,操作简单,动物死亡率低,模型成功率较高,成本较低,是较快建立稳定PD大鼠模型的可行方法.     

基于文献数据库的6-OHDA帕金森病大鼠模型特点分析及在中药研究中的应用

目的 分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况,以期为6-OHDA模型在帕金森研究中的应用提供参考。方法 查阅近20年来中国知网(CNKI)和PubMed中应用6-OHDA建立PD大鼠模型的相关文献,分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况。结果 6-OHDA诱导的大鼠PD模型多选用雄性SD或Wistar大鼠,造模时注射部位多为单侧黑质、内侧前脑束或纹状体,多在造模4周后检测阿扑吗啡诱导旋转实验、脑组织形态学、分子生物学、生化指标以判断模型成功率及防治PD药物的有效性。结论 本文通过对6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况进行分析,为PD模型的造模和应用提供参考。     

6—羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的建立与评价

目的：探讨提高6－羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法，并从行为学、黑质多巴胺神经元形态学角度对模型进行评价。方法：取SD大鼠90只，将6－羟基多巴胺立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠的行为及黑质细胞形态学变化。结果：①90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只（占71．1％）恒定转向右侧脯结果稳定，旋转圈 ＞210r /30min，被认为是成功的帕金森病大鼠模型；②除旋转行为外，部分大鼠还出现震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常表现；③随机选取10只不同时期的成功帕金森病大鼠模型，免疫组化下观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少（P＜0．001），电镜观察发现大鼠中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡改变。结论：用6－羟基多巴胺选择性损毁黑质多巴胺能神经元可较快建立稳定的成功率较高的类似于人类中晚期帕金 森病行为和病理的大鼠模型，但在病理和行为学等方面向帕金森病人仍有许多差异。     

帕金森病大鼠模型的炎性机制

目的 :研究帕金森病 (PD)大鼠模型的炎性机制。　方法 :采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测PD大鼠模型黑质纹状体区肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白细胞介素 1(IL 1)的水平。采用酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化法估测黑质区神经损伤的程度。　结果 :PD大鼠模型黑质纹状体区TNF α和IL 1的水平较对照组明显增高 (P <0 .0 5 ) ,环孢素 (CsA)可减轻 6 羟基多巴胺 ( 6 OHDA)对黑质多巴胺神经元的损伤 ,但对黑质纹状体区TNF α和IL 1水平无明显影响。　结论 :免疫炎性机制可能参与PD的发病过程 ,CsA可能通过与炎性因子无关的途径对黑质多巴胺神经元起保护作用     

选择性毁损帕金森病大鼠模型的建立

目的探讨提高 6 -羟基多巴胺 (6 -OHDA)帕金森病 (PD)大鼠模型成功率的方法 ,并对模型进行评价。方法 :取SD大鼠 90只 ,将 6 -OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路 ,观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。结果 :90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有 6 4只 (占 71.1% )恒定转向右侧且结果稳定 ,旋转圈数 >2 10r/ 30min ,被视为成功PD大鼠模型 ;免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴能神经元 (NDN)较对侧明显减少 ,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论 :用 6 -OHDA选择性损毁NDN可较快建立稳定的类似于人类中晚期PD行为病理的大鼠模型 ,但在病理和行为学等方面同自然PD病人仍有较多差异     

6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的建立与评价

目的 探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法 ,并从行为学、黑质多巴胺神经元形态学角度对模型进行评价.方法 取SD大鼠90只,将6-羟基多巴胺立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠的行为及黑质细胞形态学变化.结果 ①90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71.1%)恒定转向右侧且结果 稳定,旋转圈数>210r/30min,被认为是成功的帕金森病大鼠模型;②除旋转行为外,部分大鼠还出现震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常表现;③随机选取10只不同时期的成功帕金森病大鼠模型,免疫组化下观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少(P＜0.001),电镜观察发现大鼠中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡样改变.结论 用6-羟基多巴胺选择性损毁黑质多巴胺能神经元可较快建立稳定的成功率较高的类似于人类中晚期帕金森病行为和病理的大鼠模型,但在病程和行为学等方面同帕金森病人仍有许多差异.     

应用斜面汉密顿微量注射器针头脑内注射6-羟基多巴胺制作大鼠帕金森病模型

目的：探讨应用斜面汉密顿微量注射器针头代替平面汉密顿微量注射器针头,6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）中脑黑质单侧单点立体定向注射法制作单侧帕金森病（Parkinson＇sdisease,PD）模型的可行性。方法：采用雌性SD大鼠,在脑立体定位技术下,应用斜面汉密顿微量注射器针头将6-OHDA注入大鼠右侧的中脑黑质部位,用动物旋转行为监测仪记录阿扑吗啡（Apomorphine,Ap0）诱发的大鼠异常旋转行为,并测定脑组织液生化改变,并与平面汉密顿微量注射器针头注射组相比较。结果：实验组和对照组的PD动物模型成功率分别为73．33％（11／15）和80．00％（12／15）,两者比较差异无统计学意义（P〉O．05）。两种针头制作的PD鼠损毁侧脑组织液中多巴胺（Dopamine,DA）代谢产物3,4-二羟基乙酸（dihydroxyphenylaceticacid,DOPAC）和高香草酸（homovanillicacid,HVA）明显低于未损毁侧（P〈0．05）。而空白对照组的旋转行为、两侧脑组织液中多巴胺代谢产物均没有明显改变。结论：应用斜面汉密顿微量注射器针头代替平面汉密顿微量注射器针头可以制作可靠而稳定的PD大鼠模型。     

颈上交感神经节和单涎酸神经节苷脂联合移植抗帕金森病的实验研究

目的：观察颈上交感神经节（SCG）和单涎酸神经节苷酯（GM1）联合植入帕金森病（PD）大鼠脑内的抗PD效果及移植物的存活情况。方法：将用酶消化法制成的同种大鼠SCG细胞悬液和GM1立体定向植入PD大鼠损毁侧尾壳核内,比较单纯细胞移植组,联合移植组,上清液组和非移植组间及移植前,后诱发旋转行为的变化,移植6个月后移植区行组织学检查（HE,TH染色）。结果：两个实验组中的PD大鼠移植后的旋转行为较移植前和对照组明显改善,其中尤以联合移植组的旋转行为减少最为明显,而两个对照组的改善不明显,脑切片组织学观察可见实验组移植区内有存活良好的TH阳性细胞,联合移植组中的阳性细胞数目明显多于单纯细胞移植组。结论：1．GM1可提高SCG细胞在受体脑内的存活率,2．同种成年大鼠SCG细胞植入PD大鼠脑内可以存活,并可纠正PD大鼠的异常旋转行为。     

两点单侧注射前脑内侧束建立PD大鼠模型及其行为学评价

目的6-羟基多巴胺(6-OHDA)两点单侧注射前脑内侧束建立帕金森病(PD)大鼠模型,从行为学角度对模型进行评价。方法104只SD大鼠随机分为正常对照组(n=14),生理盐水对照组(n=35)和模型组(n=55)。模型组SD大鼠以6-OHDA立体定向两点单侧注射至前脑内侧束。术后不同时间点(第7、14、21、28天)进行行为学分析(姿势不对称性、前肢始动不能试验);术后第1周开始,每周1次腹腔注射阿朴吗啡(Apo)诱发大鼠旋转行为,连续6周,分别计数阳性大鼠例数。结果模型组大鼠姿势不对称性和前肢始动不能试验指标与正常对照组和生理盐水对照组比较,有显著差异(P<0.01);其行为学不对称性随时间延长而逐渐加重,至28 d后趋于稳定。第1、2、3、4周Apo诱发模型组大鼠旋转行为的阳性例数分别为9、12、12、1。结论前脑内侧束单侧注射6-OHDA诱发大鼠的行为学改变与PD患者临床表现有相似之处。Apo诱发的PD模型大鼠旋转行为次数随损毁时间延长而增加,与其行为不对称性随时间延长加重的表现一致。实验为深入研究帕金森病发病机制奠定了基础。     

脑深部电刺激对帕金森大鼠模型黑质神经元形态及功能的影响

背景 帕金森病(PD)是常见的中枢神经系统退行性疾病,好发于中老年人.最近的研究表明细胞凋亡在帕金森病的发生和发展中发挥重要的作用.丘脑底核脑深部电刺激术(STN-DBS)被认为是一种有效的治疗帕金森病的方法. 近年来的理论研究、动物实验和临床观察均提示脑神部电刺激术可能具有潜在的神经保护作用,并藉此延缓帕金森病的进展。然而, 丘脑底核脑深部电刺激术的保护效果和黑质致密部(SNc)神经元凋亡进展之间的关系仍不知道.本实验的目的是研究丘脑底核电刺激对帕金森大鼠模型黑质致密部报销效应及作用机制. 方法: 建立帕金森大鼠模型,选择大鼠丘脑底核(STN)作为靶点,植入双侧大鼠脑深部刺激电极,给予高频电刺激,观察大鼠行为学改变及刺激后情况;通过尼氏染色及末端标记法,观察黑质致密部神经元的变化情况;采用多管玻璃微电极细胞外记录和微电泳的方法,分析电刺激对黑质神经元兴奋性功能改变情况,探讨电刺激对黑质神经元的作用机制. 结果: 与假刺激组相比,刺激组PD模型大鼠黑质致密部神经元凋亡显著减少(P<0.05). 正常大鼠及PD模型大鼠患侧均可观察到黑质致密部神经元自发放电,正常大鼠SNc神经元平均自发放电频率（40.65±11.08）Hz略高于PD模型大鼠患侧残存SNc神经元（36.71±9.23）Hz。电刺激PD大鼠STN时,同侧SNc神经元以兴奋性增高为主,若同时给予微电泳GABA受体阻断剂荷包牡丹碱（BIC）,SNc神经元的兴奋程度明显减少,而GLu受体阻断剂（MK-801）使SNc神经元的神经元兴奋性变化不明显。 结论: 高频刺激STN有保护帕金森老大鼠SNc神经元的作用。可能的分子机制可能与SNc区神经递质的分布和代谢的变化相关。     

6-羟基多巴在帕金森病发病机制中的作用

目的：探讨神经毒素6-羟基多巴（6-OHDA）在帕金森病（PD）发病机制中的作用。 方法：采用立体定向术将神经毒素6-OHDA注入大鼠右侧纹状体内,制备经典的帕金森病动物模型。造模2个月后,检测其纹状体内还原型谷胱甘肽(GSH)和活性氧,并观察黑质的病理改变。结果：帕金森病模型组右侧纹状体内GSH含量［（36.85±8.64 μg•mg^-1 prot）］明显下降,活性氧含量［（58.69±9.84）U•mg^-1 prot］明显增高,与假手术组及正常对照组比较差异均有显著性（P<0.05）。光镜下可见帕金森病模型组右侧黑质致密带内多巴胺能神经元减少,与模型组左侧及对照组、假手术组黑质相比差异均有显著性（P<0.05）。 结论：6-OHDA可通过耗竭GSH及增加自由基的生成损害多巴胺能神经末梢,并逆行性损毁神经元胞体,导致黑质致密带多巴胺能神经元变性死亡。     

早期帕金森病大鼠模型的建立

目的 探索建立早期帕金森病（Parkinson disease,PD）大鼠模型.方法 成年大鼠单侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）.注射后第7天,通过姿势不对称性、前肢始动不能、前肢使用不对称性、阿朴吗啡诱发旋转实验进行行为学评估.观察组织学变化,取鼠脑黑质节段（n=6）,固定、石蜡包埋、连续冠状切片.焦油紫（Nissl）染色显示黑质神经细胞;抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）抗体免疫组织化学染色显示黑质多巴胺（DA）能神经元,光镜下观察并进行细胞计数,统计学分析处理数据.而且,使另一部分模型动物（n=6）继续存活到第28天,鉴定所选动物模型的可靠性.结果 纹状体内注射6-OHDA后第7天,动物行为学出现有意义改变,黑质内神经细胞出现肿胀等变性坏死的早期形态变化,DA能神经元出现有意义减少;注射后的第28天,行为学改变更加显著,神经细胞大量减少,DA能神经元数量减少到92%.结论 纹状体内注射6-OHDA后第7天,通过行为学方法能确定早期PD动物模型.     

姜黄素类似物L6H3对帕金森病大鼠脑部纹状体中单胺类神经递质代谢物的影响

目的：研究姜黄素类似物L6H3对帕金森病（PD）大鼠脑纹状体中7种单胺类神经递质及其代谢物的影响。方法：采用脑部纹状体定位注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）建立PD大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、PD组和PD+L6H3组。通过微透析活体取样技术和高效液相色谱电化学检测法（HPLC-ECD）联用测定PD组大鼠脑纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢物含量。结果：造模后第6周（即给药第2周）及造模后第7周（即停药第1周）,PD+L6H3组大鼠脑纹状体的多巴胺（DA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）与PD组比较明显升高（P＜0.01）。结论：L6H3在给药后第2周及停药后1周均能明显提高PD大鼠脑中单胺类神经递质及其代谢物的含量。     

松果菊苷对鱼藤酮诱导的大鼠帕金森病模型黑质多巴胺能神经元的选择性保护作用（英文）

目的：观察鱼藤酮对大鼠中脑纹状体多巴胺能神经系统、肝、肾等组织的损伤及松果菊苷的干预作用。方法：雄性健康Sprague-Dawley大鼠被随机分为对照组,模型组和低、中、高剂量松果菊苷干预组。运用鱼藤酮2.75mg/（kg·d）腹腔注射4周的方法制作大鼠帕金森病模型;对照组腹腔每日注射同等体积不含鱼藤酮的溶解液;干预组除注射鱼藤酮外,分别给予松果菊苷20、40、80mg/（kg·d）灌胃处理。运用改良神经功能缺损评分（modified neurological severity score,mNSS）测量大鼠的神经行为改变,采用试剂盒检测其肝、肾损伤的指标,酪氨酸羟化酶免疫染色观察中脑黑质多巴胺能神经元的数目,比色法测定纹状体多巴胺的含量。结果：与正常对照组比较,鱼藤酮模型组肝、肾损伤的指标明显上升（P〈0.05）,mNSS升高（P〈0.01）,黑质多巴胺能神经元数目显著减少（P〈0.05）,纹状体多巴胺含量降低（P〈0.05）;与模型组相比,松果菊苷低、中、高剂量组肝、肾功能没有显著改善（P〉0.05）,但mNSS显著降低（P〈0.05）,黑质多巴胺能神经元数增加（P〈0.05）,纹状体多巴胺含量也增加（P〈0.05）,以上保护效应呈现剂量依赖性。结论：鱼藤酮能引起大鼠严重的黑质-纹状体多巴胺能神经系统以及肝、肾等组织的损伤,松果菊苷可以选择性地改善其神经损伤。     

帕金森病模型黑质Caspase 3的表达

目的研究帕金森病(PD)动物模型黑质Caspase 3的表达,以探讨帕金森病的凋亡机制。方法40只SD大鼠随机分为两组,PD组:立体定向注入6-羟多巴,术后1周腹腔注入阿朴吗啡观察30 min大鼠旋转的次数,连续至第四周每分钟大于6次者为成功的帕金森氏病模型;正常对照组:立体定向注入黑质抗坏血酸生理盐水。处死后制作快速冰冻切片用免疫组化检测Caspase 3阳性细胞数,用原位杂交法检测Caspase 3 mRNA的阳性细胞数。结果免疫组化显示PD组术侧黑质Caspase 3阳性神经元数量较正常对照组明显升高,原位杂交显示PD组术侧黑质Caspase 3 mRNA阳性神经元数量较正常对照组明显升高。结论PD动物模型Caspase 3的表达显著提高,提示Caspase 3参与PD的发病机制。