反义Snail转录因子诱导MG-63细胞凋亡增加顺铂化疗敏感性的研究

[目的]探讨反义Snail转录因子对人骨肉瘤细胞株MG-63顺铂化疗敏感性的影响。[方法]用脂质体转染法将高转移性骨肉瘤细胞株MG-63分别转染反义Snail质粒（pGenesil-snailAS）和空载体质粒（pGenesil）。MG-63组（对照组）、MG-63/pGenesil组和MG-63/pGenesil-snailAS组细胞分别与浓度为0、0.5、1、5、10、15、20μg/ml顺铂作用72h。MTT法测定各组细胞的存活率并计算IC50,FCM检测细胞凋亡,Westernblot检测各组细胞Snail蛋白表达。[结果]细胞稳定转染pGenesil-snailAS后,细胞内Snail蛋白表达明显被抑制。MG-63、MG-63/pGenesil和MG-63/pGenesil-snailAS组细胞的顺铂IC50分别为14.0±1.8、12.6±1.6和2.8±0.5μg/ml,MG-63/pGenesil-snailAS组细胞对顺铂作用的敏感性增加了5倍。顺铂对MG-63/pGenesil-snailAS组细胞所诱导的凋亡比MG-63组和MG-63/pGenesil组显著。[结论]反义Snail转录因子能诱导人骨肉瘤细胞株MG-63凋亡并抑制其生长,增加其对顺铂化疗敏感性。     

TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

目的 研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下（TK/GCV系统）联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果 成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63 （tk＋）呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测,当GCV浓度为10 μg/ml时,骨肉瘤MG-63 （tk＋）细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1 μg/ml。当顺铂与GCV （5 μg/ml）联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25 μg/ml,并对MG-63 （tk＋）细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。     

宫颈癌侧群细胞化疗耐受性的体外研究

目的：观察化疗药物干预对人宫颈癌细胞系Hela侧群细胞和非侧群细胞中ABCG2、ABCC2基因表达变化的影响,探讨两群细胞化疗耐受性的差异。方法：Hoechst 33342免疫荧光染色与流式细胞术（ FACS）相结合分选宫颈癌细胞系Hela中的侧群细胞和非侧群细胞。给予顺铂干预,利用RT-PCR观察两群细胞化疗前后ABCG2、ABCC2基因的表达差异,以及细胞凋亡情况。结果：与非侧群细胞相比,侧群细胞 ABCG2、ABCC2基因表达更高,但差异不明显;顺铂干预后,两组细胞ABCG2、ABCC2基因表达均有升高,组间比较侧群细胞中ABCG2、ABCC2明显高于非侧群细胞,差异有统计学意义;侧群细胞对于IC50附近两个顺铂浓度0.95μg/ml和1.9μg/ml的耐受能力较好,细胞没有因药物的加入而大量凋亡,细胞凋亡率反而略有下降。非侧群细胞对于IC50附近0.95μg/ml和1.9μg/ml顺铂浓度的耐受能力较差,细胞大量凋亡。结论：来源于宫颈癌Hela细胞中的侧群细胞相对于非侧群细胞顺铂化疗耐受性更强,这种化疗耐受可能与侧群细胞 ABCG2、ABCC2的高表达抑制细胞凋亡有关。     

华蟾素和顺铂对骨肉瘤MG-63细胞联合杀伤作用的研究

目的：探讨比较华蟾素（ cinobufagin ）协同顺铂（ cisplatin ）对人骨肉瘤细胞株 MG-63的杀伤作用。方法体外培养骨肉瘤细胞株 MG-63细胞,取对数生长期细胞进行实验;采用 MTT 比色法测定MG-63细胞的生长抑制作用并计算细胞抑制率;流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡率和细胞周期,观察细胞凋亡率的变化情况和药物对细胞周期的抑制作用;原位末端标记法（ TUNEL ）观察骨肉瘤细胞的凋亡情况并检测细胞凋亡率;相差显微镜观察骨肉瘤细胞生长状况及形态学上的改变。结果华蟾素和顺铂均对骨肉瘤细胞有生长抑制作用,华蟾素组、顺铂组及华蟾素＋顺铂组在药物浓度不同时对骨肉瘤细胞的生长抑制作用各不相同,在药物浓度低于80μg/ml时,各实验组药物对细胞的生长抑制作用随药物浓度的增加而上升;当药物浓度达到80μg/ml时,华蟾素组和顺铂组药物对骨肉瘤细胞的生长抑制作用不再增加,但华蟾素＋顺铂组药物对细胞的生长抑制作用在药物浓度达到160μg/ml时,抑制作用仍强于其浓度为80μg/ml时。各实验组在药物浓度相同时华蟾素＋顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制作用明显强于单独应用华蟾素或者顺铂。结论华蟾素＋顺铂对骨肉瘤 MG-63细胞的联合杀伤作用明显强于单独应用顺铂或者华蟾素;在抑制骨肉瘤 MG-63细胞生长方面,华蟾素协同顺铂对细胞的杀伤作用效果显著,并且具有时间和浓度依赖性。     

GSK-3β及β-catenin的表达定位与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的 研究人肺腺癌细胞系A549和其顺铂耐药细胞系A549/DDP中GSK-3β及β-catenin的表达定位差异,以探讨其与肺腺癌顺铂耐药的作用机制。方法 MTT法检测A549和A549/DDP细胞对顺铂的IC50 ;免疫细胞荧光法检测顺铂处理前后两种细胞GSK-3β及β-catenin的定位表达。结果 顺铂对A549/DDP细胞的IC₅₀值为（28.984±1.404）μmol/L高于A549细胞的（5.888±0.338）μmol/L（t=27.696,P<0.001）;A549/DDP细胞中的GSK-3β表达主要在胞质,顺铂处理后GSK-3β定位在胞质和胞核;β-catenin表达主要在胞膜、胞质,顺铂处理后定位转移至胞核。而A549细胞中GSK-3β及β-catenin表达定位无变化。结论 肺腺癌顺铂耐药的机制可能与GSK-3β胞质和胞核共同定位、β-catenin核转移定位相关。     

卵巢癌SKOV3细胞中侧群细胞的生物学特性

目的 分选人卵巢癌细胞系SKOV3中的侧群（side population, SP）细胞,并探讨其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性。方法 流式细胞仪检测、分选经DNA染料Hoechst 33342染色后SKOV3中的SP细胞,并对侧群细胞（SP）与非侧群细胞（non-SP）作细胞生物学鉴定,包括增殖能力、克隆形成能力、侵袭及迁移能力、自我更新能力及细胞周期。结果 SKOV3细胞系中SP细胞比例为（1.12±0.104）%,SP细胞增殖速度快于non-SP细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。接种相同数量的细胞,SP细胞克隆形成率高于non-SP细胞（P<0.05）。Transwell实验显示,SP细胞侵袭与迁移的细胞数与non-SP相比均明显增多（P<0.05）。SP细胞体外能分化为Non-SP细胞,具有自我更新能力。SP细胞大多处于细胞周期的G0/G1期。结论 卵巢癌细胞系SKOV3中的SP细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性,SP细胞表型可考虑作为富集卵巢癌干细胞样细胞的有效方法。     

Panx1调控ATP/IP3通路促进顺铂诱导A549细胞的凋亡

目的 观察顺铂诱导肺腺癌细胞凋亡过程中Panx1对ATP/IP3信号通路的调控及作用机制。方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,以甘珀酸（CBX）为药物干扰工具。将人肺腺癌A549细胞分为：空白组（Control组）、甘珀酸组（CBX组）、顺铂组（DDP组）、甘珀酸+顺铂组（CBX+DDP组）。MTT法和Annexin V/PI法分别检测A549细胞存活率和凋亡率的变化。化学发光法和ELISA法分别检测细胞外三磷酸腺苷（ATP）和细胞内三磷酸肌醇（IP3）的相对浓度。结果 与单用DDP组相比,CBX+DDP组的细胞存活率增加（P<0.01）、细胞早期凋亡率和晚期凋亡率下降（P<0.01）、细胞外ATP、细胞内IP3的释放浓度降低（P<0.01）。结论 Panx1可通过调控ATP/IP3信号通路增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感度。     

白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的研究

目的：探讨白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳条件并筛选敏感细胞。方法：设立阴性对照组、空白调零组及40 μmol/L白杨素、5.0 μg/mL顺铂、40 μmol/L白杨素+5.0 μg/mL顺铂3个处理组,选取人结直肠癌细胞（HCT-116）、人鼻咽癌细胞（CNE1）、人肝癌细胞（HepG2）、人胃癌细胞（BGC-823）分别作用24 h。采用四甲基噻唑蓝（MTT）法测定肿瘤细胞的增殖抑制率,采用Hoechst 33342荧光染色法测定诱导肿瘤细胞的凋亡率,通过抑制率和凋亡率筛选出敏感细胞。采用L₉（3³）正交设计方法,设立3个白杨素水平（10、20、40 μmol/L）,3个顺铂水平（1.3、2.5、5.0 μg/mL）,以及3种作用时间（12、24、36 h）处理敏感细胞,确定白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳作用条件。结果：与白杨素或顺铂单独处理组相比,MTT试验结果表明,白杨素联合顺铂作用组对上述4种肿瘤细胞增殖的抑制率均明显增加,差异均具有统计学意义（P均 < 0.01）;Hoechst 33342染色实验发现,白杨素联合顺铂作用组诱导各肿瘤细胞的凋亡率亦均明显增加（P均 < 0.01）。白杨素联合顺铂作用组对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制率为（78.0±2.0）%、诱导细胞的凋亡率为（72.3±6.5）%。在4种细胞中,人胃癌细胞株BGC-823对白杨素联合顺铂抗肿瘤作用最敏感。正交实验的体外模型结果表明,最佳作用条件为白杨素40 μmol/L联合顺铂5.0 μg/mL,作用时间24 h。结论：白杨素能增强顺铂抑制人肿瘤细胞增殖和诱导人肿瘤细胞凋亡的作用。人胃癌细胞BGC-823是白杨素和顺铂联合作用的敏感细胞株。     

洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG-63细胞进行实验,分为对照组和实验组 (加入不同浓度洛铂: 2、4和8 μg/ml)。采用噻唑盐（MTT）比色法、流式细胞技术(FCM)检测洛铂对MG-63细胞的形态改变、生长及增殖抑制、细胞周期阻滞和细胞凋亡诱导等作用,并绘制不同浓度时MG-63细胞的生长曲线,应用Western blot的方法分析洛铂对MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达的影响。结果 洛铂能够抑制MG-63细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖效应。Western blot检测结果显示洛铂可使MG-63细胞Bcl-2蛋白表达下降。结论 洛铂能显著抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节 MG-63细胞Bcl-2蛋白的表达有关。     

雪灵芝水提物对人胃癌MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雪灵芝水溶性提取物(arenaria kansuensis aqueous extract,AKAE)对人胃癌细胞株MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养的MGC-803细胞经不同浓度AKAE处理,采用MTT法检测受试细胞增殖水平;应用流式细胞术检测AKAE处理12 h后各组细胞的细胞周期;Western blot检测不同浓度、不同时间AKAE处理组MGC-803细胞中cyclin D1蛋白表达水平;实时定量 PCR检测各组MGC-803细胞中cyclin D1、p16和p21基因的mRNA相对表达量。结果AKAE对体外培养的MGC-803细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用（P<0.05）,IC₅₀为(0.134±0.005)mg/ml;经AKAE处理12 h,0.8 mg/ml组MGC-803细胞的 G₁期细胞比例高于对照组、S期细胞比例低于对照组（P<0.05）;(0.2～0.8) mg/ml浓度的AKAE处理,对MGC-803细胞中cyclin D1的蛋白及mRNA表达具有明显抑制作用（P<0.05）;AKAE促进MGC-803细胞中p16、p21基因mRNA 表达,0.2 mg/ml处理组p16、p21 mRNA相对表达量分别为对照组的3.3倍和18.5倍。结论雪灵芝水提物(AKAE)对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,其机制与G₁期阻滞和对G₁期相关因子表达的影响有关。     

白花丹素对骨肉瘤MG-63细胞迁移的影响及其作用机制

目的 观察白花丹素对骨肉瘤细胞迁移的抑制作用并初步探讨其可能的机制.方法 以2.5 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L浓度白花丹素分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,以含0.1％ DMSO完全培养基为对照组.作用24 h后,Transwell法观察骨肉瘤MG-63细胞迁移能力,Real-time PCR检测骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin基因mRNA表达情况,Westem blot检测Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达情况.结果 Transwell结果显示,作用24h后,各实验组下层小室细胞数明显减少,2.5 μmol/L组、5μmol/L组和10 μmol/L组的细胞迁移率分别为(69.9±4.5)％、(39.3±3.5)％和(26.2±4.1)％,呈浓度依赖性(P＜0.05);Real-time PCR结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin mRNA表达水平明显下降,呈浓度依赖性(P＜0.05).Western blot结果显示,Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达量明显降低,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 白花丹素能够抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移,其作用机制可能与抑制骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin的表达及活化有关.     

人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX的建立及多药耐药机制研究

目的 建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系,探讨骨肉瘤细胞多药耐药的发生机制.方法 采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系(MG-63/PTX),并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细胞系和耐药细胞系的细胞膜表面P-gp蛋白表达率、罗丹明123排出情况,RT-PCR检测细胞内耐药基因的变化,免疫细胞化学法检测细胞内P-gp蛋白的表达,Westernblotting法检测细胞内P-gp蛋白的表达.结果 历时12个月建成人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX,能在含PTX1μg/mL的培养基中稳定生长并传代,其对PTX的耐药指数为69.8,并与卡铂、顺铂、表柔比星、甲氨蝶呤、阿霉素等多种化疗药物存在不同程度的交叉耐药性;罗丹明123排出实验显示MG-63/PTX内罗丹明含量明显低于亲本细胞;RT-PCR结果显示在MG-63/PTX细胞系中存在MDR1、MRP1、LRP、ABCG2基因的表达,而在MG-63细胞系中无MDR1基因的表达.免疫细胞化学、流式细胞仪及Western blotting实验均显示在MG-63/PTX中存在P-gp的表达.结论 MDR1/ P-gp在多药耐药的特性上起着至关重要的作用,而且骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础.     

The multidrug resistance transporter ABCG2 (breast cancer resistance protein 1) effluxes Hoechst 33342 and is overexpressed in hematopoietic stem cells.

The human ATP-binding cassette superfamily G (White) member 2 (ABCG2) gene and its murine homologue breast cancer resistance protein 1 (Bcrp1) are recently described ATP-binding cassette transporters associated with drug resistance in tumor cell lines, including the MCF-7 cell line, selected for its resistance to mitoxantrone (MCF-7/MitoR). Infection of MCF-7 cells with the retroviral vector containing ABCG2 cDNA (G1-ABCG2) resulted in cells (MCF-7/ABCG2) that were resistant to mitoxantrone at levels similar to those observed in MCF-7/MitoR cells. Previous studies have shown that pluripotent hematopoietic stem cells overexpress the multidrug-resistant transport (MDR1) gene and efflux rhodamine, a substrate for the MDR1 transporter. Other studies have identified a primitive hematopoietic stem cell population, or side population (SP) cells, which are identified by their efflux of the fluorescent dye, Hoechst 33342. In an attempt to identify the transport genes responsible for this phenotype, we examined the uptake of Hoechst 33342 into MCF-7, MCF-7/MitoR, and MCF-7 cells infected with a retroviral vector expressing the ABCG2 gene (MCF-7/ABCG2). MCF-7/MitoR cells as well as MCF-7/ABCG2 cells demonstrated lower levels of Hoechst 33342 uptake compared with the parental MCF-7 cells. We also examined the level of the mouse Bcrp1 RNA in SP cells and non-SP cells isolated from mouse hematopoietic cells. Mouse SP cells expressed relatively high levels of Bcrp1 mRNA relative to non-SP cells. These results suggest that Hoechst 33342 is a substrate for the ABCG2 transporter and that ABCG2/Bcrp1 expression may serve as a marker for hematopoietic stem cells in hematopoietic cells.     

SGC-7901和MGC-803肿瘤干细胞中不同分子标志表达的观察

目的：探讨ABCG2、CD133、CK20、CyclinB1和DNA-PKcs在SGC-7901和MGC-803细胞SP（side population）亚群中的表达,探讨其为胃癌干细胞（cancer stemcell）标志的可行性。方法：用Hoe-chest33342染色检测胃癌细胞SGC-7901和MGC-803中SP细胞的比例;通过荧光免疫细胞化学染色比较ABCG2、CD133、CK20、Cyclin B1和DNA-PKcs在SP细胞与非SP细胞中表达的差异。结果：经Hoechst33342和荧光免疫细胞化学染色显示,SGC-7901细胞中SP细胞占3.8%;SP细胞中ABCG2和CK20表达阳性的细胞比率显著低于非SP细胞,P〈0.05;CD133、Cyclin B1和DNA-PKcs在SP细胞和非SP细胞中的表达差异无统计学意义,P〉0.05。经Hoechst33342和荧光免疫细胞化学染色显示,MGC-803细胞中SP细胞占2.9%;SP细胞中Cyclin B1的阳性表达率显著高于非SP细胞中的（P〈0.05）,但ABCG2、CD133、CK20及DNA-PKcs的阳性表达率显著低于非SP细胞中的,P〈0.05。结论：CK20^-/Cyclin B1^＋或CD133^＋可能是胃癌干细胞的特异性分子标志,而单项ABCG2、CD133、Cyclin B1及DNA-PKcs在鉴定胃癌干细胞时无特异性。     

MiR-129-5p靶向HMGB1抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-129-5p对骨肉瘤(OS)细胞增殖和迁移的影响以及对HMGB1的调控作用.方法 RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p和HMGB1的表达.生物信息学预测miR-129-5p与HMGB1基因是否存在结合位点,...     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

Side population cells isolated from human osteosarcoma are enriched with tumor-initiating cells

It has been proven that "side population (SP)" cells that exclude Hoechst 33342 dye are enriched with cancer stem cells in several tumors. In the present study we aimed to isolate and characterize SP cells from human primary osteosarcoma. Side population cells were detected in osteosarcoma samples. In vitro, SP cells regenerated both SP and non-SP and the clonogenicity of SP cells was higher than that of non-SP cells, just like stem cells. In vivo, SP cells exhibited heightened tumorigenicity and only the SP fraction had the capacity to self- renew both in vitro and in vivo. Furthermore, SP cells exhibited increased multidrug resistance and the RNA expression of ATP-binding cassette protein transporters was increased in the SP group. In addition, "stemness" genes Oct-4 and Nanog were also upregulated in the SP group. However, the expression of other putative stem cell markers (CD44, CD117 and CD133) had no significant difference between SP and non-SP for each individual marker. These findings suggest that SP cells derived from osteosarcoma are enriched with tumorigenic cells with stem-like properties and might be an ideal target for clinical therapy.     

硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响

目的 探讨硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响。方法 采用查随机数字表法将40例老年肺癌根治术患者随机分为观察组和对照组,每组20例。观察组采用硬膜外阻滞联合全身麻醉,对照组采用静脉全身麻醉。用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法测定CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺细胞和NK细胞水平,简易智力状态检查表（MMES）评估认知功能,VAS评分法及Ramsay镇静评分法评估疼痛和镇静状况,并观察两组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间。结果 观察组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间均优于对照组（P＜0.05）,但两组患者术后6 h、12 h VAS疼痛评分和Ramsay镇静评分差异均无统计学意义（P＞0.05）。两组患者术后1 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于术前（P＜0.05）;CD8⁺细胞水平高于术前（P＜0.05）;观察组患者术后1 d 和7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均显著高于对照组（P＜0.05）,但CD8⁺细胞水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。术后7 d两组患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于术后1 d（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于术后1 d（P＜0.05）;观察组术后7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于对照组（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于对照组（P＜0.05）。两组患者MMES评分均显著低于术前（P＜0.05）,但观察组评分高于对照组;术后认知功能障碍发生率亦低于对照组（P＜0.05）。结论 硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术后认知功能影响较小,同时可促进细胞免疫功能恢复。     

阿法替尼对卵巢癌阿霉素耐药细胞的增敏作用及其机制

目的 探讨阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对阿霉素化疗敏感度的作用及机制。方法 MTT法检测联用阿法替尼对阿霉素作用于卵巢癌A2780及A2780T细胞的IC50的影响;不同浓度的阿法替尼干预后,罗丹明123蓄积实验检测ABCB1外排功能;ABCB1-Glo? Assay Systems实验检测ABCB1ATPase活性;Western blot检测A2780T细胞EGFR、p-EGFR、HER-2、p-HER-2及ABCB1的表达;RTPCR实验检测A2780T细胞MDR1 mRNA的表达。结果 无毒浓度的阿法替尼显著降低了阿霉素对耐药卵巢癌A2780T细胞的IC50（P<0.05）,而对A2780细胞没有影响;阿法替尼浓度依赖性地增加罗丹明123在A2780T细胞内的蓄积量及ABCB1 ATPase活性（P<0.05）;阿法替尼下调A2780T细胞ABCB1的编码基因MDR1的mRNA水平及ABCB1的蛋白表达水平,抑制了EGFR及HER-2的磷酸化水平。结论 阿法替尼可能通过抑制ABCB1转运体的外排功能,下调ABCB1的表达,进而增敏耐药卵巢癌细胞A2780T对阿霉素的化疗敏感度,是一种有开发前景的卵巢癌化疗增敏剂。