槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

低氧诱导因子-1α与马桑内酯点燃SD大鼠难治性颞叶癫痫耐药模型耐药性的相关性研究

目的 探讨难治性颞叶癫痫中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)在不同脑区表达水平的变化及其与耐药蛋白MDR1/Pgp表达的关系.方法 以SD大鼠作为研究对象,设置点燃组和对照组.点燃组处理方法:以马桑内酯(CL)0.4ml/kg肌注,1次/72h,在给药1～5次期间判定点燃模型是否构建成功,选择符合标准的大鼠继续给药,1次/6d,共30次;最后点燃组共存留7只大鼠.对照组5只大鼠,在同时间点给予0.4ml/kg生理盐水肌注.取大鼠脑组织标本,制备后采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)、免疫组织化学(IIHC)和Western blotting三种方法分别检测HIF-1 α、MDR1/Pgp在脑组织中的表达情况.结果 IHC显示,HIF-1α在点燃组主要表达于大鼠海马、颞叶皮质等部位的神经元和神经胶质细胞,在对照组仅见微弱表达.Pgp的分布及表达情况与HIF-1 α一致.RO-PCR显示,点燃组HIF-1αmRNA在海马中的表达为对照组的1.741倍,在颞叶中的表达是对照组的1.395倍.Pgp mRNA在海马及颞叶的表达分别为对照组的2.297倍和1.474倍.Western blotting显示,点燃组海马HIF-1 α蛋白表达(1.284±0.166)较对照组(0.763±0.117)明显增高(p＜0.05),且点燃组颞叶皮质中HIF-1α蛋白(1.350±0.105)亦较对照组(0.941±0.078)明显增高(P＜0.05).Pgp的表达与HIF-1α表达呈一致变化,即点燃组海马和颞叶中Pgp的表达(0.831±0.086,0.919±0.129)较对照组(0.441±0.053,0.643±0.095)明显增高(P＜0.05).另外,点燃组Pgp蛋白和mRNA在海马中的表达较颞叶高(P＜0.05).结论 HIF-1α在大鼠颞叶癫痫耐药模型的海马和颞叶皮质中的表达较正常大鼠高,且与Pgp表达的空间分布一致.HIF-1 α与PgP表达的相关性提示HIF-1 α可能与难治性颢叶癫痫的耐药性相关.     

膜联蛋白A1拟肽Ac2-26对大鼠心肺复苏后脑神经损伤的保护作用

 目的 研究膜联蛋白A1拟肽Ac2-26在大鼠心肺复苏后对脑损伤神经的保护作用。方法 随机将45只模型大鼠分为假手术组、对照组、Ac2-26组,每组15只。假手术组行动静脉穿刺和气管插管;对照组、Ac2-26组行5 min窒息处理,在自主循环恢复后分别从静脉给予生理盐水、Ac2-26(1 mg/kg)。评估三组大鼠术后3 d的存活率,评估术前及术后24、48、72 h神经功能缺损评分;采用ELISA法检测术后3 d大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度;采用Western Blot检测大鼠前额叶皮层和海马中NF-κB蛋白的表达水平。结果 术后3 d假手术组大鼠生存率为 100%,对照组为53.3%,Ac2-26组为73.3%,与对照组比较,Ac2-26组大鼠在心肺复苏后3 d的累计生存率明显升高。与假手术组相比,对照组各时间点神经功能缺损评分均降低(P<0.01),而Ac2-26组均高于对照组(P<0.01)。Ac2-26组术后3 d血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而与假手术组相比,Ac2-26组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平略升高。Ac2-26组大鼠前额叶皮层和海马中NF-κB蛋白相对表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而 Ac2-26组与假手术组皮层和海马中NF-κB蛋白表达水平[(0.174±0.039) vs(0.177±0.054),(0.298±0.014) vs(0.272±0.022)]相比,差异无统计学意义。结论 膜联蛋白A1拟肽Ac2-26对大鼠心肺复苏后脑损伤具有神经保护作用。     

核因子E2相关因子2基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响

 目的 探讨核因子E2相关因子2(NRF2)基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响及其机制。方法 采用RT- PCR检测人前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达。采用脂质体转染法将NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列转染至PC-3细胞后,Western blot和RT-PCR检测转染效果,并筛选出干扰效果最好的NRF2 siRNA序列。将体外培养的PC-3细胞分为Con组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和NRF2 siRNA组(转染NRF2 siRNA-3),采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,Western blot检测各组细胞中细胞核增殖相关抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达。结果 与前列腺上皮细胞株RWPE-1相比,前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达水平明显升高(0.84±0.05 vs 0.22±0.03,P<0.05)。NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列均能够明显下调PC-3细胞中NRF2蛋白(0.56±0.04,0.39±0.03,0.11±0.02 vs 0.76±0.07)和mRNA(0.80±0.05,0.52±0.03,0.26±0.03 vs 1.00±0.05)的表达,且NRF2 siRNA-3的干扰效果明显大于NRF2 siRNA-1和NRF2 siRNA-2。与Con组相比,NRF2 siRNA组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力[存活率:24 h (82.05±5.24)% vs (99.86±5.05)%,48 h (64.57±4.85)% vs (97.28±6.36)%,72 h (45.62±3.76)% vs (94.57±5.49)%;克隆形成率:(39.35±3.26)% vs (66.52±4.85)%;侵袭细胞数:42.00±5.50 vs 85.00±7.50;迁移细胞数:58.00±3.00 vs 118.50±8.00]均明显减弱,同时Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达(Ki67:0.25±0.03 vs 0.78±0.05;CyclinD1 0.41±0.03 vs 0.85±0.06;MMP-9:0.10±0.02 vs 0.89±0.07;N-cadherin:0.22±0.02 vs 0.49±0.04)均明显降低(P<0.05);而NC组与Con组间无统计学差异(P>0.05)。结论 NRF2基因沉默可抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移,其分子机制可能与下调Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达有关。     

高压氧对缺血再灌注小鼠脑组织中细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA表达及血脑屏障通透性的影响

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对缺血再灌注小鼠脑组织中细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA的表达及血脑屏障通透性的影响.方法 复制清醒小鼠脑缺血再灌注模型,并于再灌注期间行0.25 MPa HBO治疗5次,在处死动物前1 h经尾静脉注射2%伊文思兰(Evans blue,EB),采用RT-PCR及分光光度法分别检测脑组织中细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA的表达及EB的含量.结果 细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA的表达及EB的含量缺血再灌注组较假手术组高,且2组间差异有统计学意义(P＜0.01);HBO组与假手术组相比差异无统计学意义(P＞0.05);HBO+脑缺血再灌注组与脑缺血再灌注组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HBO可从基因水平明显减少脑缺血再灌注细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA的表达,从而降低血脑屏障通透性,而对正常脑组织中TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响很小.     

罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠胰腺氧化应激的影响

 目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,ROSI)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺组织氧化应激的影响。方法 雄性SPF级SD大鼠60只,按随机数字表法随机分为3组:假手术组(sham operation group,SO组)、SAP组、ROSI组,每组20只。胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型。ROSI组在造模后5 min经股静脉注射ROSI(6 mg/kg),SO组和SAP组则注射等量生理盐水。术后12 h剖杀大鼠,统计各组大鼠死亡率。检测血清淀粉酶(amylase,AMY);检测胰腺组织一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;胰腺组织行病理学检查;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清白介素-1β(interleukine-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukine-6,IL-6)水平。免疫印迹法(western blotting)检测胰腺组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、内皮细胞型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白水平。结果 SAP组死亡2只大鼠;SO组和ROSI组无大鼠死亡。SAP组大鼠AMY、IL-1β、IL-6、NO、MDA、胰腺病理评分均较SO组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ROSI组干预后上述指标较SAP组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。SAP组GSH-Px水平较SO组明显下降,给予ROSI干预后GSH-Px水平有所上升,但仍低于SO组[(49.01±9.42) U/mg vs (59.81±22.43 )U/mg],差异均有统计学意义(P<0.05)。SO组胰腺组织iNOS和eNOS蛋白呈低表达,SAP组iNOS和eNOS蛋白表达水平较SO组明显升高[(1.90±0.16 )vs(0.75±0.09)、(0.37±0.09)vs(0.09±0.01)],差异有统计学意义(P<0.05),ROSI干预后其表达水平均下降[(1.31±0.18)vs(1.90±0.16)、(0.23±0.08)vs(0.37±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 罗格列酮对SAP大鼠胰腺损伤具有保护作用,其机制与抑制氧化应激、减少炎性反应因子产生有关。     

干扰TonEBP基因对Raw264.7细胞迁移、增殖和吞噬功能的影响

 目的 探讨张力反应性增强因子结合蛋白(tonicity-responsive enhancer binding protein, TonEBP)基因对巨噬细胞活性、迁移、增殖及吞噬功能的影响。方法 利用TonEBP-shRNA慢病毒感染Raw 264.7细胞,筛选稳定细胞株,Real time-PCR、Western blot评估干扰效率,选取干扰效率最高的慢病毒感染组及空载慢病毒感染组用于后续实验。各组细胞同步培养,孵育24 h后CCK-8法测定细胞活性,transwell实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期及吞噬功能。结果 成功建立并筛选出干扰TonEBP稳定细胞株,与正常细胞组相比,mRNA和蛋白的干扰效率均高于70％,差异具有统计学意义(P＜0.05);下调TonEBP表达可使细胞活性明显下降[24 h (0.39±0.02 vs 0.46±0.01),48 h(0.57±0.02 vs 0.63±0.02),72 h(0.71±0.02 vs 1.01±0.11),96 h(0.93±0.06 vs 1.42± 0.04),120 h(1.26±0.06 vs 1.56±0.09) ](P＜0.05),同时显著降低细胞迁移(88±7.00 vs 356±35.23)、增殖[(38.73±2.57)％ vs (50.20±2.29)％]及吞噬[(2.26±0.10)％ vs (5.63±0.42)％]能力,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 干扰TonEBP的表达可有效抑制巨噬细胞活性,降低其迁移、增殖及吞噬能力,为继续探究与巨噬细胞相关的疾病提供实验依据。     

虎纹捕鸟蜘蛛毒素对全脑缺血大鼠海马神经元细胞形态及bax、bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察蛛网膜下腔注射虎纹捕鸟蜘蛛毒素(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞线粒体和CA1区锥体细胞形态、凋亡相关因子bax和bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及HWTX-I组,采用改良的Pulsinelli四血管阻断全脑缺血损伤结合蛛网膜下腔置管术模型,对大鼠海马神经细胞线粒体进行超微结构及Nissl染色形态学观察,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白表达,RT-PCR法检测baxb、cl-2 mRNA表达。结果:(1)HWTX-I能够使全脑缺血大鼠海马神经细胞线粒体基本维持正常形态。(2)HWTX-I能稳定全脑缺血大鼠海马CA1区锥体细胞分布。(3)HWTX-I能够下调全脑缺血再灌注大鼠海马组织bax mRNA及蛋白表达,上调bcl-2 mRNA及蛋白表达。结论:蛛网膜下腔注射HWTX-I对全脑缺血再灌注所致的大鼠海马神经元损伤有明显的保护作用。     

CysLT2受体拮抗剂HAMI3379对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的 探究半胱氨酰白三烯2(CysLT₂)受体拮抗剂HAMI3379对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其可能机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组与HAMI3379组，每组10只。模型组大鼠采用大脑中动脉阻断术(MCAO)构建脑缺血损伤模型，HAMI3379组在MCAO术前和术后30 min腹腔注射HAMI3379(0.2 mg/kg)。对脑缺血损伤后的大鼠行神经症状评分，TTC染色法观察大鼠脑梗死体积，免疫荧光染色法检测小胶质细胞活化标志物Iba1,Real-time PCR检测小胶质细胞M1/M2极化表型分子mRNA水平的变化，NeuN染色法观察神经元数量，Fluoro-Jade B染色法观察神经元变性情况，Western-blotting检测脑组织中CysLT₂蛋白和核因子κB相关蛋白Cα(PKCα)、NF-κB抑制蛋白(IκBα)、p65和p50蛋白的表达变化。结果 与假手术组比较，模型组大鼠神经症状评分、脑梗死体积均明显增高(P<0.05)；与模型组比较，HAMI3379组大鼠的神经症状评分、脑梗死体积明显降低或缩...     

survivin在肝癌细胞株Hep G2表达与化疗药物敏感性的关系

 目的 探讨肝癌细胞株Hep G₂中凋亡抑制因子survivin与化疗药物敏感性的关系。方法 通过MTT检测肝癌细胞株Hep G₂对于1.0 μg/ml顺铂, 1 μmol/L阿霉素,及1.0 μg/ml吉西他滨的敏感程度;通过Western blot 检测Hep G₂中survivin 蛋白在顺铂、阿霉素、吉西他滨处理后不同时间段表达水平的变化。结果 在药物作用72 h后,10%~20%的肝癌细胞仍然存活并具有代谢活性。顺铂和吉西他滨处理48 h后survivin蛋白表达升高(2.04±0.05 vs 1.25±0.05;1.84±0.02 vs 1.25±0.05;1.92±0.05 vs 1.55±0.04;1.88±0.11 vs 1.55±0.04,差异有统计意义(P<0.05)。阿霉素处理48 h后survivin 蛋白表达并未见明显变化(1.73±0.11 vs 1.52±0.02;1.66±0.12 vs 1.52±0.02),差异无统计学意义。结论 survivin 蛋白水平升高与肝癌细胞株Hep G2部分化疗药物敏感性相关。     

缺氧诱导因子-1α对肺动脉平滑肌细胞端粒酶反转录酶的转录调节作用

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中端粒酶反转录酶(TERT)表达的调控作用.方法 培养大鼠PASMC,采用RT-PCR分别检测HIF-1α激动剂(CoCl2、DFX)、HIF-1α抑制剂(FAS)、代谢抑制剂(CBZ-LLL)、反义寡核苷酸等作用后及缺氧条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达,Western blotting检测HIF-1α蛋白的表达.结果 缺氧4h条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达量(分别为0.59±0.07、0.60±0.06)明显高于对照组(分别为0.11±0.02、0.10±0.01,P＜0.05).与对照组相比,加入DFX后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.52±0.06、0.45±0.04)明显升高(P＜0.05);加入CoCl2后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.99±0.08、0.72±0.07)也明显升高(P＜0.05).加入FAS后,HIF-1α、TERT的mRNA表达量(分别为0.09±0.01、0.13±0.01)较缺氧组(分别为0.65±0.06、0.52±0.04)明显降低(P＜0.05).加入CBZ-LLL后,HIF-1α mRNA表达量(0.09±0.01)与对照组(0.06±0.01)比较无明显差异(P＞0.05),但TERT mRNA表达量(0.82±0.07)较对照组(0.08±0.01)明显升高(P＜0.05).加入CoCl2和CBZ-LLL后,HIF-1α蛋白表达量(分别为12.0±1.1、9.0±0.8)较对照组(1.0±0.1)明显升高(P＜0.05).缺氧条件下,加入反义寡核苷酸后TERT mRNA表达量(0.20±0.01)较缺氧组(0.75±0.06)明显降低(P＜0.05),但加入错配寡核苷酸的TERT mRNA表达量(0.70±0.06)与缺氧组相比无明显差异(P＞0.05);常氧条件下,同时加入反义寡核苷酸、CoCl2后PASMC的TERT mRNA表达量(0.45±0.04)较CoCl2组(0.95±0.08)明显降低(P＜0.05).结论 HIF-1α对缺氧状态下大鼠PASMC中TERT的表达具有调控作用.     

脑缺血再灌注的炎症损伤分子机制及吲哚美辛的保护作用

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注炎症损伤的分子机制,并观察吲哚美辛对脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用.方法 36只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,吲哚美辛3、6、9mg/kg组,每组6～8只.应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注24h后处死动物,以TTC染色法测定脑梗死范围和神经功能缺损情况,并分别采用ELISA、Western blot法检测脑组织中IL-8、IL-1β、TNF-α、髓过氧化物酶(MPO)含量以及细胞间黏附分子1(ICAM-1)、E选择素(E-selectin)的表达.结果 吲哚美辛能明显减小模型大鼠的脑梗死范围,减轻神经损伤症状;预先给予吲哚美辛(6、9mg/kg)可降低脑组织中MPO活性及IL-8、IL-1β、TNF-α的水平,并减少ICAM-1、E-selectin的表达(P＜0.05或0.01).结论 吲哚美辛可通过抑制脑缺血再灌注过程中炎症介质的表达和释放,降低脑缺血再灌注所致的炎症损伤.     

缺氧诱导体外绒毛组织转化生长因子3β表达及调控

 目的探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子3β(TGF-3β)表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用.方法取孕早期绒毛组织分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF-1α反义组和HIF-1α正义组.HIF-1α反义组和HIF-1α正义组先加入HIF-1α寡核甘酸,低氧条件培养48h.48h后,收集培养的绒毛组织,实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平;Westem blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平.结果与正常对照组相比,缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加,TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高;与HIF-1α正义组比较,HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低,TGF-3βmRNA和蛋白表达也下降.结论缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF-3β表达,且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控.     

模拟正畸静压力刺激牙周膜干细胞增殖的TGFβ/STAT信号通路探讨

 目的 探讨模拟正畸静压力刺激牙周膜干细胞增殖的TGFβ/STAT信号通路参与机制,为相关研究提供参考。方法 体外培养牙周膜干细胞至生长状态良好后加压处理(100 kPa)不同时间(1、6、12 h),Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白及TGFβ/STAT信号通路蛋白的表达。结果 体外培养的牙周膜干细胞具有多向分化能力,加压处理1 h和6 h后细胞Bax明显增强(0.34±0.05 vs 0.42±0.08, P<0.05)而Bcl-2水平明显减弱(0.33±0.05 vs 0.29±0.05, P<0.05),TGFβ/STAT信号通路蛋白TGFβ(0.34±0.06 vs 0.39±0.07, P<0.05)及STAT2表达明显增强(0.32±0.06 vs 0.43±0.08, P<0.05),而处理12 h干细胞的上述蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 模拟正畸静压力刺激可明显抑制体外培养的牙周膜干细胞的增殖过程,其可能与TGFβ/STAT信号通路异常有关。     

尾悬吊模拟失重大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α表达变化

目的 研究模拟失重环境下大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化.方法 取性成熟期健康雌性Wistar大鼠60只作为研究对象,体重200±20g,随机分为10组(n=6),按模拟失重时相分为悬吊0.25、0.5、1、2、3、5、7、14、21d组和0d组(对照组).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠卵巢组织中HIF-1 α的表达分别应用免疫组织化学和RT-PCR方法进行检测.结果 各实验组及对照组大鼠卵巢卵泡卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞中均可见HIF-1α阳性染色细胞.对照组大鼠卵巢HIF-1 α染色阳性颗粒主要位于细胞质中,悬吊0.25d和0.5d组大鼠卵巢卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞的HIF-1α颗粒由细胞质向细胞核转移;尾悬吊1d组HIF-1 α表达情况与对照组接近,HIF-1α核染色消失.尾悬吊0.25d、0.5d大鼠卵巢HIF-1α mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05),持续尾悬吊1d以后各组卵巢HIF-1α的蛋白和mRNA水平逐渐恢复至对照组水平.结论 尾悬吊模拟失重使大鼠卵巢组织中HIF-1α蛋白及mRNA表达发生明显变化,早期同步过表达,提示卵巢HIF-1α表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.     

小RNA干扰沉默S100A13对甲状腺细胞侵袭、迁移的影响及机制

 目的 探究干扰钙结合蛋白A13(calcium binding protein A13, S100A13)基因表达对甲状腺癌TPC-1细胞侵袭、迁移的影响及可能作用机制。方法 采用小RNA干扰敲减甲状腺癌TPC-1细胞S100A13基因的表达,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测S100A13对TPC-1细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测S100A13对TPC-1细胞侵袭能力的影响,免疫印迹试验(Western Blot)检测S100A13、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。结果 与对照组相比,采用小RNA干扰的人甲状腺癌TPC-1细胞划痕宽度显著升高(25.214±2.687 vs 69.223±5.291),侵袭(0.897±0.082 vs 0.521±0.053)、迁移(1.263±0.252 vs 0.759±0.062)能力显著降低(P<0.05),细胞中MMP-2(0.523±0.062 vs 0.246±0.033)、Vimentin(0.863±0.082 vs 0.458±0.053)蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin(0.445±0.053 vs 0.755±0.078)蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 采用小RNA干扰S100A13表达可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移,可能与其下调上皮间质转化和MMP-2的表达有关。     

羟基红花黄色素A对脑组织蛋白质硝基化及对损伤侧脑组织保护作用的研究

目的 探究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)通过细胞实验及动物实验对损伤侧脑组织的保护作用,观察ONOO-及Heme/NaNO₂/H₂O₂途径对脑组织蛋白硝基化以及HSYA的影响,探讨HSYA对损伤脑组织的保护作用。方法 选取30只SD大鼠分为正常组(Control组)、模型组(Model组)及HSYA干预组(HSYA组)。采用Western blot检测3-NT蛋白表达水平,通过细胞实验观察HSYA对脑缺血再灌注损伤诱导的脑组织蛋白质硝基化、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达情况的影响,初步探讨HSYA对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。选取120只SD大鼠分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(CIRI组)及HSYA治疗组(HSYA+CIRI组)。通过改良线栓法制备大鼠脑梗死模型,采用免疫组化及Western blot检测3-NT蛋白表达水平,使用ABTS法检测T-AOC,使用ELISA...     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠压力负荷性心力衰竭保护作用研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠压力负荷性心力衰竭的保护作用。方法将30只普通级8周龄雄性SD大鼠分入对照组、模型组和NAC给药组。所有大鼠术后干预3周,饲养至第7周后,测量每组剩余大鼠心脏质量,并计算心脏质量指数(HWI),通过实时聚合酶链反应和Western blot技术检测黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、肌醇依赖酶1α(IRE1α)、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)和氧化应激Nrf2/Keap1通路关键基因及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠心脏质量、HWI显著增加,氧化应激指标MDA5与IRE1αmRNA及蛋白表达均明显升高,SOD-1 mRNA及蛋白表达显著降低,氧化应激通路Nrf2与Keap1 mRNA及蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,给药组大鼠心脏质量、HWI显著降低,MDA5与IRE1αmRNA及蛋白水平明显降低,而SOD-1 mRNA及蛋白水平明显升高,Nrf2与Keap1 mRNA及蛋白平均明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NAC对大鼠压力负荷性心力衰竭有保护作用,其作用机制可能通过调控氧化应激Nrf2/Keap1通路有关。     

八子补肾胶囊对去势大鼠性功能的影响

 目的 观察中药制剂八子补肾胶囊对雄性大鼠性功能的改善作用。方法 采用雄性大鼠去势模型,将状态良好的60 d大鼠,随机分为模型组,八子补肾高、中、低剂量(给药量分别为4、2、1 g /kg)组,睾酮组(0.9 mg/kg),正常对照组,每组10只。给药4周后测定电刺激诱导的阴茎勃起功能,取副性器官称重计算脏器指数,取血,测定血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(TSH)和皮质醇(F)的含量。结果 与模型组相比,八子补肾高、中剂量组大鼠勃起潜伏期明显缩短(5.9±1.9 s,6.2±2.2 s vs 8.9±3.2 s),勃起持续时间明显延长(5.4±1.7 s,5.1±1.8 s vs 3.2±2.0 s),T含量明显升高(0.41±0.08 nmol/L,0.39±0.14 nmol/L vs 0.22±0.08 nmol/L),F含量明显升高(36.46±5.12,34.67±5.09 vs 26.79±5.21)。结论 八子补肾胶囊能够有效调节去势大鼠性激素水平,改善其性功能。     

缺氧对PC12细胞中活性氧含量和缺氧诱导因子 血管内皮生长因子表达的影响

目的研究缺氧对PC12细胞中ROS含量和HIF-1α、VEGF表达的影响,初步探讨缺氧损伤的分子机制。方法使用三气培养箱建立PC12细胞缺氧损伤模型;观察缺氧环境下细胞形态的改变;MTT法检测细胞存活率;DCHF-A染色检测ROS的含量;RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达;Western Blot检测HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果与正常组相比较,缺氧24 h后ROS明显升高;HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达较正常组明显升高。结论缺氧24 h后可以导致PC12细胞中ROS含量、HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达升高。