亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与甲基化状态分析

目的：探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与启动子甲基化状态。方法：C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm（对照组）、1 ppm（低浓度组）和100 ppm（高浓度组）。收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR（qPCR）检测Survivin、Bcl2L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果：与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大（P＜0.01）,低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低。低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低。两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响。结论：亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态。     

慢性铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响

目的 研究铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响。方法 将12只成熟雄性c57bl/6j小鼠分为两组：对照组(n=6)、铝模型组(n=6),对照组用蒸馏水灌胃，铝模型组采用10 mg/(kg·d) AlCl₃灌胃，8周后，获取小鼠睾丸组织、附睾组织及附睾精子。对附睾精子进行精子质量分析，对睾丸及附睾HE染色进行病理检测；运用PCR、免疫组化检测睾丸组织细胞焦亡关键基因的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，铝暴露的小鼠睾丸重量、附睾重量、精子活力、精子数量均显著下降(P<0.01),精子畸形率显著增加(P<0.01)。睾丸形态学观察结果显示，铝暴露小鼠睾丸生精小管中细胞排列紊乱，生精小管的面积和直径减小，管内精子减少。PCR及免疫组化结果显示，铝暴露小鼠睾丸组织中焦亡关键基因Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd和IL-1b的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01)。结论 铝暴露可降低小鼠的精子质量，促进睾丸细胞焦亡，从而损伤雄性生殖系统。     

外层致密纤维在Akap4基因缺陷致小鼠精子尾部多种形态异常中的作用

目的：探讨外层致密纤维(outer dense fobres，ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多种形态异常中 的作用。方法：通过基因编辑技术构建Akap4基因缺陷小鼠模型。实验分为2组：成年Akap4基因缺陷雄鼠为实验组 (n=7)，成年野生型雄鼠为对照组(n=7)，比较2组小鼠的体重和睾丸重量；采用计算机辅助精液分析(computer aided sperm analysis，CASA)检测精子活动力，改良巴氏染色(modifi ed pap staining)检测精子形态学，扫描及透射电镜观察精 子超微结构，免疫荧光检测精子尾部蛋白表达及定位，睾丸切片HE及PAS染色检测睾丸生精功能，透射电镜观察曲 精细管超微结构。结果： Akap4基因缺陷小鼠精子总活动力为8.81%，明显低于野生型小鼠(P<0.01)，且无正常形态精 子，尾部缩短与尾部卷曲比例达91.18%，明显高于野生型小鼠(P<0.01)，睾丸重量、睾丸生精功能、精子数量2组比 较差异无统计学意义(P>0.01)； Akap4基因缺陷精子的纤维鞘纵柱缺失，横肋柱结构部分残留，主段的3和8号ODF排 列紊乱，与ODF2蛋白定位结果相符；睾丸中精子纤维鞘发育障碍，无正常纤维鞘结构形成，但未见异常膨大的精子 尾部。结论：Akap4基因缺陷使纤维鞘横肋发育不良，纵肋的缺失引起3和8号ODF分离，“9+2”微管结构紊乱，使 主段管腔异常膨大，导致小鼠精子尾部多种形态异常。     

亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bc12L13的表达与甲基化状态分析

目的：探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bc12L13的表达与启动子甲基化状态.方法：C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm（对照组）、1 ppm（低浓度组）和100 ppm（高浓度组）.收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR （qPCR）检测Survivin、Bl12L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定基因启动子区CpG岛甲基化水平.结果：与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大（P＜0.01）,低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低.低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低.两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响.结论：亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态.     

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义

【摘要】 目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2，SRPK2） 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征，探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。 方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达；利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达；应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。 结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达；实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达，具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核；间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。 结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达，并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位，极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程，其作用机制值得进一步深入研究。     

亚慢性砷暴露对雄性小鼠脑组织性基因Eif2s3y表达的影响

[目的]观察亚慢性砷暴露对雄性小鼠脑组织性基因Eif2s3y表达的影响。[方法]SPF级小鼠30只,按体重将小鼠随机分为对照组、低剂量染砷组(1 mg/L As2O3)、高剂量染砷组(4 mg/L As2O3)。通过自然饮用含不同浓度As2O3蒸馏水的方式使小鼠染砷,连续染毒60 d后取脑。利用基因芯片技术和RT-PCR技术检测雄性小鼠脑组织性基因Eif2s3y的mRNA表达变化。[结果]基因芯片结果显示,染砷组雄性小鼠大、小脑中Eif2s3y基因表达显著高于对照组。RT-PCR验证结果也显示,染砷组雄性小鼠大脑皮质、髓质Eif2s3y的mRNA表达量明显高于对照组,但小鼠小脑组织Eif2s3y的mRNA表达量与对照组比较,差异无显著意义。[结论]亚慢性砷暴露可诱导雄性小鼠大脑组织Eif2s3y基因表达上调。     

CEP55可能是治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标

目的应用siRNA技术沉默CEP55基因表达对小鼠精原细胞增殖的影响。方法选取2017年1月1日~12月31日在南方 医科大学南方医院妇产科生殖中心就诊的无精子症男性不育症患者,根据其睾丸病理切片诊断分为成熟阻滞组和生精正常组 各3 名。应用核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,发现两组患者的睾丸组织表达差异蛋白质CEP55 蛋白。设计并合成 CEP55 基因特异性的siRNA 序列,转染小鼠精原细胞,分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 转染组,应用Western blot 和 qPCR检测在siRNA 对CEP55的影响,CCK8实验观察siRNA抑制CEP55后对小鼠精原细胞增殖的影响。结果通过iTRAQ 核素标记结合LC/MS/MS分析,共鉴定出差异蛋白共两百多个,CEP55在基因表达水平差异最显著。Western blot结果显示, siRNA转染组CEP55蛋白的相对表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。qPCR结果显示,siRNA转染组CEP55 的mRNA表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。CCK8实验发现siRNA干扰CEP55表达后,小鼠精原细胞生长明显 受到抑制（P<0.05）。结论CEP55可能在精子发生过程中起到关键作用,CEP55可能成为治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分 子靶标。     

Plac8l1在小鼠精子发生过程中的表达特征研究

目的：探讨Plac8l1（placenta-specific 8 like 1）基因在小鼠睾丸组织的表达特征,及其与精子发生的相关性。方法：经生物信息学方法初步筛选到一个睾丸特异性表达候选基因Plac8l1,并推测其可能与小鼠精子发生相关;采用半定量RT-PCR和实时定量RT-PCR对Plac8l1表达的时空特异进行了研究;应用原位杂交技术对Plac8l1 mRNA在成年小鼠睾丸中的细胞类群表达特征进行初步研究;通过构建过表达PLAC8L1-EGFP重组蛋白质粒及生物信息学分析进行亚细胞定位研究与功能预测。结果：①Plac8l1是1个睾丸特异性转录基因。②在成年小鼠,Plac8l1只在睾丸和附睾组织发生特异性转录,而且睾丸中的表达水平明显高于附睾[睾丸vs. 附睾=[（1.000±0.000） vs. （0.036±0.018）,P=0.000]。③随着小鼠精子发生的起始,睾丸中Plac8l1转录水平逐渐升高（P=0.000）。④mRNA原位杂交结果显示Plac8l1 mRNA主要定位在成年小鼠睾丸中的间质细胞和精母细胞。⑤经生物信息学分析,PLAC8L1也有着一个类似于PLAC8的功能域,过表达重组蛋白显示PLAC8L1在细胞膜上聚集。结论：Plac8l1是1个睾丸特异性基因,可能与精子发生过程中的精母细胞分化相关;PLAC8L1具有1个富含半胱氨酸的PLAC8结构域,这一结构域可能介导了PLAC8L1在细胞膜上聚集并与其他蛋白相互作用,并可能在精母细胞分化中发挥重要作用。     

亚慢性铅暴露小鼠睾丸组织铅蓄积及对精子质量影响

目的观察亚慢性铅暴露小鼠睾丸组织铅蓄积和对小鼠精子质量影响,并探讨二者的关联性。方法昆明种小鼠60只,按体重将小鼠随机分为对照组、0.5 g/L、1.0 g/L和1.5 g/L醋酸铅染毒组。通过自然饮用含不同浓度醋酸铅水的方式使小鼠染铅,连续染毒60 d后取附睾和睾丸组织。用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测小鼠睾丸组织的铅浓度,常规方法检测附睾精子质量,并用统计学方法对二者的相关性进行分析。结果 0.5g/L、1.0 g/L和1.5 g/L染铅组小鼠精子的活动度分别为87.3%、79.2%和68.3%,显著低于对照组(94.1%)(P<0.05)。各铅暴露小鼠精子畸形率分别为15.2%、32.8%和35.5%,显著高于对照组(7.0%)(P<0.05)。各铅暴露小鼠睾丸组织铅浓度分别为72.71 ng/g,118.74 ng/g和177.14 ng/g,显著高于对照组(9.73 ng/g)(P<0.05),并随染毒剂量增加而升高。而且,铅暴露小鼠睾丸铅浓度与精子的活动率、密度和存活率之间呈显著负相关(P<0.05)。结论亚慢性铅暴露可导致小鼠睾丸组织铅蓄积,铅在睾丸组织蓄积可能是亚慢性暴露小鼠精子质量下降的重要因素。     

慢性砷暴露对小鼠肾组织DNA损伤的研究

目的:通过检测8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)在砷暴露小鼠肾脏组织中的表达和分布,探讨砷的肾毒性作用机制。方法:昆明种小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为低剂量组(1ppmAs2O3)、中剂量组(2ppm As2O3)、高剂量组(4ppm As2O3)和生理盐水对照组,连续染毒60天后断头处死,用HE染色法进行组织病理学观察,用免疫组化及图像分析方法检测肾组织内8-OHdG的水平。结果:与对照组相比,1ppm、2ppm和4ppm染砷组小鼠肾组织出现不同程度细胞肿胀,胞浆空泡变性,核固缩、溶解及血管扩张、充血等病理学改变,近曲小管较肾小球损伤严重。免疫组化结果表明,肾组织中8-OHdG含量明显增高,并呈现明显的剂量-反应关系,其总光密度值与对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。而且,8-OHdG在近曲小管的表达明显高于肾小球区域。结论:慢性低剂量砷暴露可引起小鼠肾组织DNA的氧化损伤和病理变化,尤其对肾脏近曲小管的损伤作用较为明显。     

Boule基因在小鼠精子发生过程中的动态表达

目的:研究雄性不育相关基因Boule在小鼠出生后首个精子发生波中的动态表达,探讨Boule在精子发生过程中的调控作用。方法:运用免疫印迹法分析BOULE蛋白在多组织中的表达情况。运用实时荧光定量、免疫组织化学和免疫荧光技术检测Boule m RNA和BOULE蛋白在雄性小鼠出生后首个精子发生波各个时间点中的表达。结果:1免疫印迹法显示BOULE蛋白在睾丸中特异性高表达,在出生后16 d睾丸可被检测到,并在随后的发育中睾丸和成年睾丸持续表达;2实时荧光定量方法证实Boule m RNA在雄鼠出生后14 d睾丸中可被检测到,20 d呈现表达高峰;3免疫组织化学显示在精母细胞及圆形精子细胞胞质中存在BOULE蛋白阳性信号。结论:Boule在精子发生过程中的表达是在发育水平精密调控的,在粗线期精母细胞和圆形精子细胞阶段的特异表达提示Boule可能在精母细胞进程和圆形精子细胞中发挥作用。     

Expression of Telomerase Gene mTR in the Testis of SD Rats and Its Significance

Summary:To study the expression of mTR gene in the testis of SD rats with varied ages and its sig-nificance,in situ hybridization(ISH)techniques were applied to detect the expression of telomerasegene mTR mRNA in the testis of SD rats.The expression of mTR was found in testes of different-age male SD rats.There was a positive correlation between the expression of mTR and the location ofgerm cells(spermatogonia,spermatocyte,spermatid).In Setoli cells,leydig cell and spermatozoa,no telomerase mTR was detectable.Type A spermatogonia expressed the highest level of telomerasemTR mRNA.It was suggested that the expression of mTR gene in the testis of SD rats is of lifetimeand coincides with the telomerase activity.     

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63的表达

目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变.方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配,并敲除胚胎中AR,筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只,对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达.结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P＜0.05）,p63的阳性表达主要位于精原细胞及精母细胞,精子细胞及成熟精子中表达呈阴性,且AR敲除组表达阳性率及HSCRE评分均显著低于对照组（P＜0.01）.结论 AR表达与小鼠睾丸曲细精管p63表达关系密切,AR敲除小鼠睾丸曲细精管生精功能受损、p63表达下调,p63调控生殖细胞的早期分化.     

环磷酰胺对小鼠精子发生的影响

观察雄性小鼠经腹腔注射环磷酰胺后,在不同时期其精子及睾丸组织学的变化。结果;第３４,３６ｄ,精子计数下降,畸形率增高;第２１,２８,３４,３６ｄ,生精细胞数均减少;睾丸超微结构的变化主要表现为各级生精细胞核膜的溶解,核的破坏及精子细胞顶体囊泡的异常,但紧密连接不受影响。提示ＣＹ通过对精原细胞及细线前期初级精母细胞产生毒害作用而影响精子发生。     

亚慢性染砷对小鼠脑组织性基因Jarid1d表达的影响

[目的]观察亚慢性染砷对小鼠脑组织性基因Jarid1d表达的影响.[方法]SPF级小鼠30只,按体重将小鼠随机分为1 mg/L As2O3染砷组、4 mg/Ls2O3染砷组和对照组,每组10只.自然饮用含不同浓度As2O3饮用水方式使小鼠染砷,连续染毒60 d后取脑.利用基因芯片技术检测小鼠脑组织性基因Jarid1d的...